大鼠胎胰胰岛组织培养及移植的实验观察

本实验对培养中的大鼠胎胰胰岛组织及其移植后的形态功能进行了观察。结果表明,大鼠胎胰经短期培养,不仅内分泌胰岛β细胞的活力保存良好,而且胰外分泌腺泡大大减少以致消失。21只糖尿病大鼠,同种移植经过7天培养的胎胰胰岛,未用免疫抑制剂,术后糖尿病缓解率76.2％。     

FTY720对小鼠外周血淋巴细胞的影响

目的　观察FTY72 0对近交系小鼠外周血淋巴细胞的影响。方法　选用近交系雄性C5 7BL/ 6小鼠 ,连续口服FTY72 0 (3mg·kg-1·d-1) 14d。每只动物于服药后 2、4、6、8、12、2 4h以及停药后 1、2、3、4、5、6周自尾静脉采血 ,计数淋巴细胞数。结果　服用FTY72 0后 ,小鼠外周血淋巴细胞迅速减少 ,2h后即由服药前的 (870 0± 6 5 6 ) / μl降至 (3783± 176 ) / μl(P <0 .0 1) ,并于 4h降至最低值 (2 4 6 7± 2 5 2 ) / μl,之后基本保持稳定。停用FTY72 0后小鼠外周血淋巴细胞没有立刻开始恢复 ,在低水平徘徊 2周后 ,第 3周淋巴细胞数开始出现明显回升 ,停药后第 6周恢复到 (7833± 76 4 ) / μl,与服药前相比 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　FTY72 0起效迅速 ,特异性强 ,且作用可逆。     

FTY720对小鼠外周血淋巴细胞及T细胞亚群的影响

目的　观察FTY72 0对近交系小鼠淋巴细胞及T细胞亚群变化的影响以指导临床用药。　方法　选用雄性C5 7/bl近交系小鼠。FTY72 0 3mg·kg-1·d-1,连续口服 14d。在各所选时间点计算淋巴细胞百分比 ,流式细胞术分析T细胞亚群变化。　结果　服用FTY72 0后 ,小鼠外周血淋巴细胞迅速下降 ,并于 4h降至最低值 ,之后保持稳定。停用FTY72 0后小鼠外周血淋巴细胞仍在低水平徘徊 2周 ,第 3周开始出现明显回升 ,停药后第 6周恢复至服药前水平。T细胞在服用FTY72 0后的变化与淋巴细胞相似。CD-8T细胞对FTY72 0相对较敏感。　结论　FTY72 0对外周血淋巴细胞的作用起效迅速 ,安全稳定 ,特异性强 ,可逆。对T细胞及其亚群的作用基本符合以上特点 ,CD-8T细胞对FTY72 0相对较敏感。     

肝细胞海藻酸钡微囊生物性能的研究

目的　研究肝细胞海藻酸钡微囊的生物学性能。方法　大鼠肝细胞微囊化后移植于腹腔内 ,1个月后取出行组织学检查。结果　不含肝细胞的空囊移植组微囊大多保持良好的形状 ,囊壁光滑、完整 ,囊外无纤维化反应 ,回收率为 ( 89± 2 3) %。肝细胞微囊大部分呈游离状态 ,部分囊外有一薄层纤维层附着 ,回收率为 ( 78± 2 1) % ;囊内细胞存活率由移植前的 ( 91± 16 ) %降至 ( 79±13) %。结论　肝细胞海藻酸钡微囊的生物相容性及机械稳定性较好 ,但免疫源性有待进一步提高。     

虫草菌丝口服液对大鼠异位心脏移植的影响

该研究以大鼠异位心脏移植为模型,参考临床上联合用药的模式,对虫草菌丝口服液的免疫抑制作用进行了研究探讨。实验结果证实,单纯虫草菌丝口服液组、虫草菌丝口服液 新山地明组、硫唑嘌呤 新山地明组,移植物存活时间分别为9.1±4.0、15.6±13.1、16.8±14.3;均明显长于对照组(P<0.01),但3组间结果无统计学差异(P>0.05);研究结果说明,无论是单独使用或联合用虫草菌丝口服液均具有免疫抑制作用,虫草菌丝口服液或硫唑嘌呤与新山地明联合应用,其免疫抑制效果相似。     

川芎嗪对犬肾保存的影响

通过犬自体肾移植模型研究了一定浓度的川芎嗪加入ＷＭＯ－１号液对犬肾保存效果的影响。结果表明，单纯ＷＭＯ－１号液保存７２小时和加川芎嗪保存７２小时的肾行自体移植均难存活；加川芎嗪保存４８小时组术后血肌酐的平均值低于单纯ＷＭＯ－１号液保存４８小时组，且血肌酐恢复正常的时间也较单纯ＷＭＯ－１号液组早（Ｐ＜０．０５），说明该实验浓度的川芎嗪不能延长肾保存时间，但有利于移植肾功能的早期恢复。     

小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3~-T细胞凋亡

目的 构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法 常规分子克隆方法 结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9.CsCI密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3~+ T细胞的比例.结果 重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3~+ T细胞的比例.结论 重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.     

新型器官保存液抗脐静脉内皮细胞凋亡作用的研究

由于供者器官在获取、保存和移植过程中难以避免的会遭遇冷缺血、热缺血及缺血再灌注损伤，这将影响供者血管内皮细胞的生存状态。缺血时间过长及器官保存液都会启动血管内皮细胞凋亡基因，引起血管内皮的损伤，从而导致移植物功能恢复延迟，甚至原发性移植物无功能，并目可缩短移植物的存活时间，引起慢性移植物功能丧失。     

Oligofectamine介导转录因子SP1诱骗性寡核苷酸转染猪内皮细胞系条件的优化研究

目的确定SP1诱骗性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介导下转染猪血管内皮细胞系SV-40-PED的最佳转染条件和效果。方法以SV-40-PED为转染对象,在6孔培养板中,接种SV-40-PED细胞2×105/孔,将4μlOligofectamine和不同浓度的SP1ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5μl)分别溶于100μl无血清、无抗生素的DMEM培养基,室温放置20min后转染细胞,SP1ODNs最终浓度分别为50、100、150、200和250nmol/L、转染26h检测不同浓度转染情况,确定最佳SP1ODNs与Oligofectamine的比率、转染时间;流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度及摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量,观察细胞损伤情况。结果SV-40-PED在Oligofectamine的介导下可以摄取SP1ODNs。SP1ODNs终浓度为50、100、150nmol/L组细胞形态无明显变化,终浓度为200、250nmol/L组细胞收缩、变圆后逐渐恢复;SP1ODNs终浓度为250nmol/L时,转染26h时细胞形态也无明显变化,48、72h时有细胞漂浮现象。荧光下观察,转染成功各组荧光物质分布于细胞核内,其中SP1ODNs终浓度为200、250nmol/L组可见清晰核仁,浓度越高,荧光强度越强,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核。SP1ODNs终浓度为250nmol/L时,转染72h组LDH浓度为137.12±3.92U/L,显著高于26h的49.61±17.13U/L和48h的120.26±8.42U/L,均有统计学意义(P<0.01);当转染时间为26h时,各浓度组上清液LDH值差异无统计学意义(P>0.05)。结论SP1ODNs终浓度为250nmol/L、转染26h时可以为SV-40-PED转染提供良好效果。     

超氧化物歧化酶和脂质过氧化物丙二醛在犬肾移植中的变化分析

本文测定了２１只犬在正常、肾移植前和肾移植恢复血流后１小时，血中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性和脂质过氧化物丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化。结果发现：在肾移植前和肾移植恢复血流后１小时与正常时相比，血中ＳＯＤ活性明显下降（Ｐ＜０．００１），同时血中ＭＤＡ含量显著升高（Ｐ＜０．００１），尤以移植后恢复血流１小时为甚。提示了在肾移植过程中，加入一定的自由基清除剂等，对术后恢复将有重要的作用，而在肾保存中移植后加入抗氧化剂至关重要。