淋球菌膜蛋白疫苗的研究

目的设计淋球菌膜蛋白疫苗并构建原核表达系统,测定表达蛋白的免疫活性.方法PCR扩增淋球菌膜蛋白(PIA)基因片段,构建重组质粒,重组质粒宿主菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE分析PIA的表达情况.淋球菌标准株免疫BALB/c小鼠,体外凝集检测动物血清的免疫效果及ELISA法检测PIA的免疫活性.结果成功构建表达PIA蛋白的重组质粒,SDS-PAGE电泳图上显示1条相对分子量(Mr)约为40KDa的新生条带,能与免疫血清发生特异性结合反应.结论淋球菌膜蛋白疫苗原核表达系统的设计和构建正确,表达蛋白PIA具有免疫活性,为淋病疫苗的开发奠定了基础.     

宁波市贝(甲)壳类海产品中致病性气单胞菌的分布

目的了解市售新鲜贝（甲）壳类海产品中致病性气单胞菌的携带及分布。方法用分步筛选的方法，筛检测贝（甲）壳类海产品中疑似致病性气单胞菌，再对疑似菌株进行系统生化定型。结果从13类2431份市售贝（甲）壳类海产品中检出致病性气单胞菌8种1946株，检出率为80．05％。检出的致病性气单胞菌以嗜水气单胞菌数量最多，占总数的38．26％；海产品带菌率最高为海瓜子，达145．31％。牡蛎、淡菜、海螺3类海产品检出的致病性气单胞菌种类和数量相对较少，同一样品中检出2种以上致病性气单胞菌有542份，占22．23％。结论检测发现市售新鲜贝（甲）壳类海产品携带致病性气单胞菌较普遍，贝壳类的致病性气单胞菌携带率高于甲壳类。结果提示，市售新鲜贝（甲）壳类海产品是一类诱发气单胞菌疾病的危险因子，而本地居民对该海产品的食用习惯多为生食或半生食，进一步增加了食用不安全性。因此，建议食用时应注意烹饪方法，以减少气单胞菌等疾病的发生。     

多种方法同步检测海产品中甲型副伤寒沙门菌的应用

目的：为查找食源性甲型副伤寒的病因,提高检出率.方法：采用国标法、mini VIDAS仪器法和PCR 3种方法同步检测11种生吃、半生吃海产品中甲型副伤寒沙门菌.检出菌株用VITEK32全自动微生物分析系统鉴定以及血清分型.结果：mini VIDAS仪器法和PCR 2种方法从1份牡蛎样品中检测出甲型副伤寒沙门菌,检出率为0.73%.结论：多种方法同步检测有利于提高生吃、半生吃海产品中甲型副伤寒沙门菌和沙门菌的检出率.用mini VIDAS或/和PCR过筛检测,具有简便快捷、灵敏度高的特点,阳性时再用国标法分离,可及时获得菌株,以提高检测工作效率,值得应用,尤其适用于杂菌量较多、目标菌易被掩盖以及不适宜甲型副伤寒沙门菌和其它沙门菌生长的样品.     

宁波地区金黄色葡萄球菌临床株肠毒素基因与多位点序列分型研究

目的 了解宁波地区金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)临床株肠毒素基因分布和多位点序列分型特征。方法 收集宁波市各医院分离的金黄色葡萄球菌临床株,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(sea)、金黄色葡萄球菌肠毒素B(seb)、金黄色葡萄球菌肠毒素C(sec)和金黄色葡萄球菌肠毒素D基因(sed),对肠毒素基因阳性菌株利用多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)进行分子分型。结果 2006、2008和2011-2013年共收集临床株155株,其中肠毒素基因阳性株为45株,阳性率为29.03%;4种基因阳性率依次为16.77%、5.81%、11.61%和3.87%;形成8种基因组合,以sea(14株)、sec(9株)和sea+sec (8株)三种组合为主。45株菌株可分为15个ST(sequence type,ST),ST1有14株,占31.11%;ST5有6株,占13.33%; ST1121和ST15的菌株均为4株,各占8.89%。与全国其他地区比较,在宁波地区临床株中发现ST12、ST573和ST1121三种新的ST。45株菌株在系统进化树上形成7个主要分支。在ST1克隆群中,sea阳性率为72.73%(16株),sec阳性率为54.55%(12株),以sea+sec组合为主(8株)。结论 宁波地区金黄色葡萄球菌临床株肠毒素基因阳性率较高,以携带sea和sec为主, 形成8种基因组合。有15种ST型,发现ST12、ST573和ST1121三种新的ST。ST1克隆群为流行优势菌株,其次为ST5克隆群。ST1克隆群以携带sea和sec为主。     

贝(甲)壳类海产品中检出致病性气单胞菌的耐药性分析

目的了解源自贝(甲)壳类海产品的致病性气单胞菌体外抗菌药物活性,发现、分析耐药性强弱,为合理使用抗生素提供科学依据。方法药敏试验采用Kirby-Bauer纸片扩散法,药敏评价判断参照2005年版NCCLS微生物药物敏感性试验标准。结果8种1034株致病性气单胞菌对大多抗菌药物敏感,耐药率最高的是氨苄西林抗生素,达91.9%,哌拉西林次之,为77.9%,土霉素和磺胺类也有较高的耐药率,分别为62.4%和56.9%;检出具有产AmpC酶能力的致病性气单胞菌127株,占12.3%,多重耐药性菌株45株,占4.4%。各类致病性气单胞菌对被检测的15种抗菌药物在耐药程度上存在一定差异,以嗜水、温和及豚鼠气单胞菌的耐药性较高。结论试验证实8种致病性气单胞菌对抗菌药物的耐药现象较为普遍,并有产AmpC酶和多重耐药性菌株存在,说明该类细菌具有多渠道获得耐药性的能力,应引起我们的关注。分析其耐药性高的原因可能与水产养殖业在防治疾病中的广泛应用抗菌药物有关,可选择氨基糖甙类、头孢类和氟喹诺酮类等抗菌药物治疗气单胞菌感染。     

食品中大肠埃希菌中耐药1型整合子检测及多态性分析

目的：了解食品中大肠埃希菌中耐药1型整合子的存在频率，并分析1型整合子可变区DNA碱基大小，以探讨食品中大肠埃希菌耐药基因的携带情况和多态性。方法：普通PCR检测50株分离于食品的大肠埃希菌1型整合子，并采用长片段PCR方法扩增1型整合子可变区序列，计算可变区DNA碱基长度。结果-50份样本有17份检出1型整合子结构（34％），长片段PCR扩增1型整合子DNA平均长度为2321bp，根据可变区分子量大小判断，共有5种整合子结构。结论：食品中大肠埃希菌携带1型整合子阳性较普遍，并具有一定的多态性。     

淋球菌孔蛋白疫苗在动物体内诱导的免疫应答

目的:观察淋球菌孔蛋白疫苗免疫日本大耳白兔后所诱导的免疫应答。方法:兔背皮下注射经原核构建表达并纯化的淋球菌孔蛋白B,ELISA动态检测免疫后大耳兔血清抗体滴度的变化及最高效价;后腿皮内注射孔蛋白B,观察迟发型超敏反应(DTH)、免疫血清体外玻片凝集及抗菌作用。结果:初次免疫后2周,大耳兔体内已产生抗体,但效价较低;第2次免疫后2周血清效价达到1∶2000;第3次免疫后2周血清抗体水平成倍升高,效价为1∶4000;第4次免疫后2周血清最高效价达到1∶12000。大耳兔腿部发生DTH反应,出现明显红肿,于注射后第4天消退。血清体外凝集试验呈阳性,加入补体后发生淋球菌菌体裂解。结论:淋球菌孔蛋白疫苗可诱发动物特异性免疫应答,这为淋病疫苗的进一步研究提供了理论和实验依据。     

宁波市首例人感染猪链球菌病的病原学分析

猪链球菌病是由猪链球菌引起的人-猪重症感染,病死率高.2005年7～8月份,四川省爆发了猪链球菌病,造成多人死亡,引起人类严重感染的疫情,对人类的生命健康造成了严重威胁.2007年5月,宁波市发现了首例猪链球菌引起化脓性肭膜炎的病例,我们对这一病例的病原菌进行了研究分析,现将检测结果报告如下.     

宁波市织纹螺毒性与毒素分析

目的检测织纹螺毒素，了解宁波市织纹螺毒性，分析织纹螺毒素，为预防和控制织纹螺中毒提供依据。方法对各类织纹螺样品用小鼠生物测试法测定PSP，用ELISA法测定STX，按出口贝类麻痹性贝类毒素和美国FDA的贝类麻痹性毒素标准，以每100g肉中PSP含量I〉400MU、STX≥80μg则判为毒螺标准来判定本市织纹螺毒性强弱。结果从逐年定期监测点127份样品中检出毒螺63份；市场检查、食物中毒送检等多种来源130份样品中检出毒螺37份，共检出有毒织纹螺（〉400MU／100g肉）100份，占总数的38．91％，地域的毒次序为宁海〉北仑〉镇海〉奉化〉象山；样品的毒性次序为食物中毒样品〉历年定期监测点样品〉市场采集样品，红带织纹螺和正织纹螺等螺种毒性较强，小黄螺无毒。从155份样品中检出STX超标的16份，占10．32％，小鼠生物测试法超标的51份，占32．90％，两者差异有统计学意义（χ^2=12．205，P〈0．05），两法的相符率为29．57％。结论本市织纹螺带毒情况较严重，分布广泛，应充分认识其对人类的危害，毒性强弱与样品来源、织纹螺种类和地域相关。织纹螺毒素除STX外，尚存在其他麻痹性毒素，提示我们有进一步研究的必要。     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA阴性结果的比较

目的：为了解实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）不同试剂间的假阴性差异,分析其原因,寻找消除办法。方法：用深圳匹基基因诊断技术有限公司的FQ-PCR试剂（A方法）检测2 333份血清病毒学标志为HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc阳性病人血清中的HBV-DNA,对HBV-DNA阴性标本,用2种试剂盒进行复核。结果：2 333份HBeAg阳性标本A方法检出48份HBV-DNA阴性标本,阴性率为2.06%,经广州中山大学达安基因股份有限公司试剂（B方法）复核,有28份转为HBV-DNA阳性;上海申友基因技术诊断公司试剂（C方法）复核,有31份转为HBV-DNA阳性。结论：FQ-PCR不同试剂检测HBV-DNA存在假阴性,且假阴性率较高,其原因可能与试剂引物设计保守序列与HBV某些变异造成不相匹配有关,可以采用多种试剂进行复核的方法弥补。当FQ-PCR检测HBV-DNA低于检测值时,应用其他试剂进行复核,以减少假阴性错误的发生,为临床诊断提供可靠的依据。