MiR-155与 KLF4的靶向结合对肾小管上皮细胞MMPs表达的影响

【摘要】 目的 研究miR -155是否通过下调靶基因Kruppel样因子4（KLF4 ）影响肾小管上皮细胞中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）和MMP-9的表达。方法 首先验证miR -155是否可以抑制肾小管上皮细胞中MMPs的表达和活性及其对KLF4表达影响:miR -155-mimic、miR -155 mimic-对照（空质粒）、空白培养基转染离体培养的肾小管上皮细胞,6 h后,荧光定量RT-PCR检测miR -155表达,免疫印迹试验(Western blot)检测细胞MMP-2、MMP-9、KLF4的表达,明胶酶谱检测细胞中MMP-2和MMP-9的活性。生物信息学预测miR -155潜在靶基因为KLF4 后,验证miR -155是否是通过靶向抑制KLF4 发挥其作用:肾小管上皮细胞用过表达miR -155的质粒转染后,再进一步转染KLF4 过表达质粒或空质粒,6 h后Western blot和明胶酶谱法再次检测上述指标。另取细胞,分别构建包含KLF4 -3′-UTR野生型和突变型序列的荧光素酶质粒,与miR -155-mimic或者空质粒对照共转染肾小管上皮细胞, 24 h后荧光素酶试验检测miR-155对KLF4 基因的靶向抑制。结果 相比转染miR -155 mimic-对照的细胞,转染了miR -155-mimic 的细胞miR -155表达上调,KLF4的表达受到抑制,MMP-2、MMP-9的表达和活性下降。相比于转染miR -155质粒和转染miR -155+空质粒,转染过表达KLF4+miR -155质粒的细胞KLF4表达上调,MMP-2、MMP-9的表达和活性增加。荧光素酶试验验证miR -155可与KLF4 靶向结合。结论 MiR -155可以通过靶向作用下调KLF4 ,从而抑制肾小管上皮细胞中MMP-2、MMP-9的表达和活性。     

黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α损伤人脐静脉内皮细胞ET-1/NO的影响

目的 探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞(ECV-304)的一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的影响.方法 用DMEM培养液在37℃、5％ CO2条件下对ECV304细胞株进行扩增至足够数量后,调细胞密度为1×105,并分为7组:A组:空白组,不加任何诱导剂;B组:TNF-α(40ng/ml)诱导组;C组:TNF-α(40ng/ml)+氯沙坦钾(105 mol/l);D组:TNF -α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(0.1 mg/ml);E组:TNF -α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(1mg/ml);F组:TNF-α(40ng/ml)+毛蕊异黄酮(10mg/ml);G组:TNF-α (40ng/ml)+毛蕊异黄酮(20mg/ml).分别于孵育6小时、24小时后时收集上清液,用ELISA检测上清液中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)的含量.结果 ①与空白组比较,TNF-α降低了ECV-304NO水平(P＜0.001)、提高了ET-1水平(P＜0.001);②氯沙坦钾提高了ECV-304NO水平(P ＜0.001)、降低了ET-1水平(P＜0.001);③毛蕊异黄酮(0.1 mg/ml～10mg/ml)能够促进ECV-304细胞NO的产生(P＜0.001)、降低ET -1的产生(P＜0.001);④氯沙坦钾和毛蕊异黄酮(20mg/ml)对ECV-304细胞ET-1和NO水平的影响无明显差异((P＞0.05);⑤毛蕊异黄酮浓度(在0.1 mg/ml ～20mg/ml内)与ECV-304 ET-1的分泌呈负相关性(r=-0.02、P＜0.001);与ECV-304NO的分泌呈正相关性(r=0.0075、P ＜0.001).结论 黄芪毛蕊异黄酮单体可以促进TNF-α诱导的内皮细胞NO分泌,抑制ET-1分泌,并在一定浓度内(0.1 mg/ml～20mg/ml)呈浓度依赖性.     

红细胞生成素及其与心肾综合征关系的研究进展

红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是肾脏产生的重要激素,在红细胞的成熟过程中发挥重要作用.重组人红细胞生成素(rhuEPO)是纠正肾性贫血的重要药物.不仅如此,近年来研究还表明,EPO与心肾综合征(severe cardiorenal syndrome,SCRS)的发生和发展具有一定关系.SCRS是指...     

黄芪单体毛蕊异黄酮对血管内皮细胞前列环素和血栓素A2的影响

目的 观察黄芪单体毛蕊异黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)合成前列环素(PGI2)、血栓素A2(TXA2)的影响.方法 以HUVECs为研究对象,用L-DMEM培养基在5%CO2、37℃条件下对HUVECs进行传代培养,至足够数量后对其进行分组处理:(1)空白对照组(不加入任何干预因素);(2)AngⅡ组(加入AngⅡ至终浓度为 1×10-6 mol/L);(3)AngⅡ+毛蕊异黄酮不同剂量组(10、1、0.1 mg/L),分别培养0、6、12、18、24 h后收集细胞上清进行PGI2、TXA2的检测,检测方法采用ELISA.结果 (1)与空白对照组比较,AngⅡ可以诱导HUVECs合成PGI2和TXA2,并且都具有时间依赖性(r=0.891,P=0.043;r=0.95,P=0.013);(2)与AngⅡ组比较,毛蕊异黄酮0.1 mg/L可以抑制AngⅡ诱导PGI2和TXA2的合成(P<0.05);1 mg/L可以促进AngⅡ诱导的PGI2合成,抑制TXA2合成(P<0.05);10 mg/L可以促进AngⅡ诱导的PGI2和TXA2合成(P<0.05).结论 黄芪单体毛蕊异黄酮可以影响AngⅡ所诱导的HUVECs PGI2和TXA2的合成.     

黄芪毛蕊异黄酮对转化生长因子β1诱导内皮细胞转分化的影响

目的:探讨黄芪单体毛蕊异黄酮对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人脐静脉内皮细胞转分化的影响,以阐明黄芪毛蕊异黄酮对肾脏纤维化的保护作用。方法:人脐静脉内皮细胞系ECV-304为研究对象,体外培养ECV-304细胞株,分为正常对照组,TGF-β1组(10μg/L),TGF-β1+毛蕊异黄酮低、中、高剂量组(0.1、1、10mg/L)。各组细胞培养72h后,采用荧光倒置相差显微镜观察细胞形态学变化,Western Blot检测肌成纤维细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化。结果:与正常对照组相比,TGF-β1组细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞形态,TGF-β1明显促进α-SMA蛋白的表达(P<0.01);毛蕊异黄酮与TGF-β1共培养后可明显抑制TGF-β1诱导的细胞形态学改变及α-SMA的表达(P<0.05),高剂量组比低、中剂量组有更强的抑制效应,低剂量组抑制效应最弱。结论:黄芪单体毛蕊异黄酮可以抑制TGF-β1诱导的内皮细胞(ECV-304)向肌成纤维细胞转化,具有保护内皮细胞的作用,从而为防治慢性肾脏病提供了依据。     

腹膜透析患者营养不良的诊断及治疗

腹膜透析(PD)患者普遍存在的蛋白质-能量营养不良(PEM)是导致患者死亡的危险因素,PEM及其相关的能量消耗(PEM/W)与持续炎症状态和糖代谢异常等多种因素有关,虽然有较多评估PD患者营养状况的评估的研究较多,但尚无单一有效的评价方法,常需要结合多个营养指标。传统营养支持与食欲兴奋剂、抗炎制剂等新型营养策略相结合,为改善PEM/W提供了更好的方法。本文就PEM/W的原因,及不同原因导致PEM/W的识别和处理方法作一简述。