小耳畸形的序列化治疗体系

小耳畸形的治疗现状是, 针对耳廓大部分或者完全缺失的Ⅲ、Ⅳ型小耳畸形患者, 治疗方法相对统一——自体肋软骨移植耳廓再造术, 且随着技术进步, 效果逐渐提升;而针对残耳较大的Ⅰ、Ⅱ型, 选择什么方法进行治疗尚缺乏依据;佩戴矫治器的非手术疗法在小耳畸形治疗中有望发挥辅助作用, 值得进一步研究。该文基于作者团队的临床实践并结合文献资料, 提出了小耳畸形序列化的治疗体系, 以期对该病的治疗有所助益。     

流式细胞仪分选纯化人脂肪干细胞体外成骨活性的实验研究

目的利用流式细胞仪分选人脂肪干细胞(Human adipose-derived stem cells,hADSCs)并检测其体外成骨活性。方法分离hADSCs,通过流式细胞仪以CD105作为表面标志进行分选,所得细胞成骨诱导培养,以CD105-细胞、未分选细胞作为对照。2周后进行碱性磷酸酶(AKP)和骨钙蛋白(OCN)定量PCR和Western-blot检测。结果流式细胞分选所得CD105+hADSCs细胞约占单核细胞的50%。定量PCR和Western-blot检测均显示分选hADSCs成骨诱导后,AKP和OCN的表达均显著高于CD105-细胞组及未分选细胞组(P<0.05)。结论诱导分选纯化后的hADSCs有较好的成骨活性,可作为骨组织工程的种子细胞。     

耳垂逆转位在低位耳垂型小耳畸形外耳再造中的应用

目的探讨耳垂逆行转位法在低位耳垂型小耳畸形外耳再造中的应用。方法 2014年1月至2015年12月,对20例残耳位置较健侧明显低下的单侧小耳畸形患者,以扩张器法进行外耳再造,一期于残耳后乳突区植入50 m L肾形扩张器,术后1周拆线,并以每周3次的频率进行注水扩张,注水期约1个月。注水完成约1个月后,行二期耳再造术。于二期术中将残耳下缘切开,以残耳上部为蒂,逆行旋转,形成再造耳耳垂,切取残耳的创面直接缝合。结果 20例耳再造术后,再造耳耳垂血运良好。术后随访6~24个月,再造耳外形自然饱满,耳垂位置与健侧基本对称。结论对于一些严重半侧颜面短小症的患者,残耳位置较健侧明显低下,耳垂逆行转位法可有效矫正再造耳垂位置,使再造耳与健侧耳位置基本对称,形成良好的耳垂形态。     

脂肪干细胞在软骨组织工程中的应用

软骨是最早应用组织工程技术成功构建的组织之一,但由于缺乏合适的软骨构建种子细胞,因此其发展相对落后。随着干细胞研究的兴起,脂肪干细胞（ASC）因其具有分布广泛、可利用细胞量大、取材容易等优点,为ASC作为种子细胞应用于组织工程研究提供了可能;但是ASC构建软骨组织的效果却不如骨髓间充质干细胞（BMSC）理想。因此ASC在软骨组织工程中的应用仍面临着诸多问题与挑战,其中最核心的问题是如何提高ASC成软骨的效率。为此从如何纯化脂肪来源细胞、尽可能保持其中干细胞的生物学特性并优化软骨诱导方案3个方面予以综述,为提高ASC成软骨的效率提供参考。     

HTGF-β1基因转染脂肪干细胞及其表达

目的探讨携带人转化生长因子β1(hTGF-β1)的腺病毒载体(adeno-hTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)及其表达的可行性。方法重组adeno-hTGF-β1经293细胞包装、扩增后,转染人ADSCs。转染72h后,RT-PCR检测重组腺病毒转染后ADSCs的hTGF-β1 mRNA表达,免疫细胞化学染色定性和酶联免疫吸附(ELASA)定量测定hTGF-β1蛋白的表达。结果转染后72h,ADSCs能有效表达hTGF-β1 mRNA,免疫细胞化学证实重组腺病毒转染后ADSCs胞浆内有大量棕黄色的hTGF-β1蛋白表达,ELISA结果提示其hTGF-βl表达量是转染Adeno-lacZ的3.85倍(<0.05)。结论重组腺病毒adeno-hTGF-β1能够被导入ADSCs并表达hTGF-β1蛋白,为hTGF-β1基因转染的ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。     

CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力。方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞。将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点;成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性;同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定。结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10%。分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力。成脂诱导10 d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但CD204+细胞具有更强的成脂潜能。成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能。同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄。HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,Safranin O染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积;而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变。结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。     

重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。