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逆转录病毒介导人细胞色素p450IA_2cDNA在V79细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素B_1袁宝珠,孙宗棠目前认为黄曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1)是肝细胞致癌剂,它经肝细胞内微粒体细胞色素p450代谢活化成最终致癌剂。为了加强... 相似文献
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目的 研究HBVX基因、TGF alhpa、c myc、beta catenin等癌变相关基因及 2 49密码子突变的p5 3蛋白在高发区肝细胞癌癌变发生及其恶性表型维持所发挥的作用。方法 以肝癌高发区启东的肝癌细胞株 770 1和 770 3标本作为研究对象 ,以PCR及DNA测序分析方法确定HBVX基因在细胞DNA水平的整合。以RT PCR及Western blot检测HBVX基因的转录与表达。用PCR RFLP方法确定 p5 3基因 2 49密码子的错义突变。应用免疫组织化学法分析TGF alhpa ,c myc ,beta catenin的表达。结果 2株细胞在DNA水平都存在HBVX基因片断的整合 ,但未见完整的转录和蛋白水平表达。序列分析显示 2株细胞的HBVX基因的序列各有特异性 ,并存在 13 0、13 1密码子的热点突变。PCR RFLP分析说明 2个细胞株中p5 3基因 2 49密码子均属野生型。免疫组化显示 2株细胞中TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白均有显著的积累。 结论 本实验的结果显示HBVX基因对这 2株细胞恶性表型的维持并不存在必然的关联 ,而是 1种HBV感染的遗传标志。未见HBVX基因蛋白表达 ,可能由于X基因 3′端缺失变异所致。免疫组化的结果显示TGF alpha ,c myc和beta catenin蛋白的显著积累 ,说明多种癌基因的相互协同 ,可能与肝癌的发生、发展及恶性表型的维持相关联 相似文献
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利用基因转染技术,研究黄曲霉毒素B1在人c-myc基因和p450IA2基因转染的基础上,转化体外原代大鼠脉上皮细胞的可能性及其部分分子机理。首先构建Xm-6/c-myc真核表达载体,并将其转染Alexander细胞,免疫组化实验证明重组的c-mvc基因可在肝细胞中表达。随后分别将c-myc和人p450IA2表达载体转染无血清原代培养的新生Wistar大鼠肝细胞,结果发现p450IA2基因可代谢活化5ng/ml的AFB1,并且在外源c-myc基因辅助下,诱导大鼠肝上皮细胞获得生长优势。其中随机挑选的1例在渡过长达4个月的“危机”期后,获得永生化生长能力。从CK-18和大鼠白蛋白的表达情况和细胞超微结构特征,明确了转化细胞来源于肝上皮细胞。核型分析、免疫组化和Northern杂交分析提示,大鼠肝上皮细胞转化与其基因组稳定性改变和TGFα高表达相关。 相似文献
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IL-12基因转染的人树突状细胞加强细胞免疫反应的体外研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的:探讨IL-12基因转染的树突状细胞(DCs)能否体外加强细胞免疫反应.方法:脂质体转染(经过Flt-3L、SCF、GM-CSF刺激)增殖周期中的DCs前体细胞.加入GM-CSF、IL-4和TNF-α扩增转染细胞.在流式细胞仪上分析细胞表型及IL-12的表达.成熟DCs装载上分别能与HLA-I 类和HLA-II类分子结合的多肽,观察IL-12基因转染DCs对特异性Th细胞发育及特异性CTL诱导和功能的影响.结果:IL-12基因转染细胞在上述细胞因子作用下发育成为能有效表达IL-12并具有典型形态学与表型特征的DCs.在装载上CD4+T细胞表位HBcAg50-69后,能诱导这些细胞发育成为IFN-γ产生型的Th1细胞.HLA-A201亚型DCs在其同时装载CD4+T和CD8+T细胞相应的表位后,IL-12 基因转染DCs所诱导产生的自身淋巴细胞的CTL效应增强.结论:IL-12基因转染的DCs能增强对Th1细胞的刺激和CTL效应的诱导能力,提示它在肿瘤疫苗发展中的潜力. 相似文献
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中国北方肝细胞癌与乙肝病毒感染的紧密关联性 总被引:4,自引:0,他引:4
目的确立乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)及丙肝病毒(hepatitis C virus,HCV)感染在中国北方肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生中的病因学地位。方法采用Abbott AxSym系统检测119例连续系列中国北方地区HCC病例的血清HBV、HCV标志,对血清HBV标志阴性病例,采用免疫组化、巢式PCR和DNA测序等对HBVX基因进行鉴定。结果119例HCC中,血清HBsAg阳性率为82.4%(98/119);anti-HBc阳性率为94.1%(112/119);4例血清HBsAg及anti-HBc均阴性病例中,3例HBVX基因阳性,因而HBV感染的阳性率达99.2%(118/119)。本组anti-HCV阳性率11.8%(14/119),且均伴有HBV感染标志。结论中国北方地区HCC与HBV感染具有紧密关联性,是本地区HCC发生的主导病因。HCV感染是一个HOC发生的重要辅助因素。 相似文献
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在江苏启东5例肝癌鸭的癌细胞中,发现大量病毒样颗粒,圆形,直径35~60nm,中央有电子致密的核心,核周有一层外膜;核内常见特殊致密颗粒,直径20~25nm,无外膜;病毒样颗粒与HBV的形态及大小相似;文中描述了病毒样颗粒的分布特点及其在胞质中发育的可能形式,讨论了这些颗粒的存在可能与肝癌及肝炎的发生有关。 相似文献
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北方汉族群HLA—A2亚型分布及p53的合成肽体外诱导C … 总被引:2,自引:1,他引:1
目的 研究北方汉族人群中HLA-A2亚型的分布及树突状细胞提呈基于p53基因合成肽体外诱导特异性T杀伤细胞(CTL)反应的影响。方法 利用PCR-SSP技术分析北方汉族人群中HL-A2基因型及其亚型的分布,并在适当A2亚型背景下,选择与HLA-A201分子具有高亲和性的2个来自p53蛋白及1个来自HBV核心抗原的蛋白合成多肽,将其分别负载到经体外GM-CSF+IL-4刺激增殖的人脐带血树突状细胞( 相似文献
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高危新生儿接种酶母重组乙肝疫苗12年效果 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]评价接种酶母重组乙肝疫苗(基因疫苗)的免疫效果与免疫持久性,为基因疫苗的推广应用及高危新生儿乙型肝炎的预防提供依据。[方法]1985年-1986年HBsAg( )产妇93例及所生的新生儿94例,按0,1,6免疫程序接种美国Merck基因疫苗(5μg/剂),分别于免疫接种后6个月,12个月及12周岁后采血放射免疫法(RIA)作HBsAg及抗-HBs检测。[结果]新生儿接种基因疫苗12年后,母亲HGsAg阳性但HBeAg阴性者(单阳性)的HBsAg阳性率为4.17%,显著低于母亲HBsAg及HBeAg均阳性者(双阳性)的23.40%(P<0.05)。两组对象12周岁时的免疫保护率分别为91.66%与74.00%,联合使用乙肝免疫球蛋白(HBIG)并未显示出能提高基因疫苗接种者的HBsAg阻断率及抗-HBs血清阳转率(P>0.05)。[结论]Merck基因疫苗的短期和远期免疫效果可以肯定,其对于乙肝高危产妇所生儿童的有效保护率至少可以持续12年,联合使用BHIG并不增加基因疫苗的长期免疫效果,基因疫苗可以取代乙肝血源疫苗,并将在乙肝免疫预防中发挥重要的作用。 相似文献