微小RNA-6791-5p靶向磷酸呋喃酸性簇分选蛋白2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07), 并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control, 并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO:(51.590±6.018)%]。使用两样本t检验进行统计分析, 结果以均数±标准差(±s)表示, 以P<0.05为差异有统计学意义。结果 miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞, 其中RKO和DLD1下调最明显(RKO...     

蛋白激酶D-1调控神经内分泌肿瘤细胞上皮-间充质转化的机制

目的研究蛋白激酶D-1(PKD-1)在神经内分泌肿瘤(NEN)中的表达以及PKD-1信号调控NEN细胞上皮-间充质转化(EMT)的机制, 探讨其与NEN转移的相关性。方法通过免疫荧光染色和免疫组织化学染色的方法, 检测人胰腺NEN组织中PKD-1以及波形蛋白(Vimentin)、白细胞共同抗原(CD45)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达及分布, 分析转移性肿瘤细胞中PKD-1的表达;通过体外培养BON细胞, 分别激活和阻断PKD-1信号, 或以表皮生长因子(EGF)处理细胞, 以免疫荧光染色、蛋白质印迹法(Western blot)和反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法, 检测BON细胞中EMT相关标志物的表达, 分析PKD-1信号对BON细胞EMT的调控机制。两样本间比较采用t检验, 多样本间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果 NEN组织中Vimentin+转移性肿瘤细胞有在小动脉周围聚集现象, 且PKD-1在NEN肿瘤细胞转移过程中呈动态变化;PKD-1信号能够促进BON细胞Vimentin的表达[(56.67±1.93)%比(35.55±2.22...     

微小RNA-422a靶向叉头框蛋白Q1抑制人结直肠癌生长和侵袭能力的研究

目的研究人结直肠癌中微小RNA(miR)-422a的异常表达与肿瘤生物学特征之间的关系, 探讨miR-422a对人结直肠癌细胞系HCT15生长和侵袭能力的调控机制。方法收集2017年8月至2018年1月在武汉大学中南医院实施结直肠癌手术切除标本65例, 收取结直肠癌组织及癌旁组织。采用实时定量反转录聚合酶链反应法(RT-qPCR)检测组织中miR-422a及叉头框蛋白Q1(FoxQ1)的mRNA表达水平, 蛋白质印迹法(Western blot)分析检测组织中FoxQ1的蛋白表达强度。分析miR-422a与结直肠癌肿瘤生物学特征和FoxQ1 mRNA表达水平的相关性。RT-qPCR检测miR-422a在结直肠癌细胞中的表达, 并使用miR-422a模拟物转染人结直肠癌HCT15细胞。采用双荧光素酶活性实验验证miR-422a对FoxQ1的靶向作用。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况, Transwell小室法检测细胞侵袭, Western blot法检测FoxQ1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达。结果结直肠癌组织miR-422a的表...     

微小RNA-17-5p通过抑制转移生长因子β受体2的表达促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460, 以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达, 构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞, 分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中...     

胃肠道间质瘤组织起源的研究进展

胃肠道间质瘤是胃肠道最常见的间叶组织源性肿瘤.近年来,胃肠道间质瘤的诊断和治疗水平有了长足的进步,尤其是伊马替尼的成功应用使胃道肠间质瘤成为肿瘤分子靶向治疗的典范.但是目前胃肠道间质瘤的组织起源仍不明确,其发生发展机制仍有待进一步研究.本文就胃肠道间质瘤组织起源的研究进展作一综述.     

长程2型糖尿病对胰腺导管腺癌肿瘤相关巨噬细胞和预后的影响

目的探讨病程较长(≥3年)的糖尿病是否影响胰腺癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的极化, 以及对胰腺癌患者预后的影响。方法收集2011年至2016年在武汉大学中南医院接受胰腺癌手术的患有长程2型糖尿病或无糖尿病患者的标本83例。采用免疫组织化学法分析组织切片中CD68和CD163的表达。运用Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验分析生存曲线, Cox回归模型进行单因素和多因素分析。结果长程2型糖尿病(DM)组的CD68+ TAMs (P<0.05)、CD163+ TAMs (P<0.01)及CD163+/CD68+比例(P<0.01)均高于非糖尿病(NDM)组, 差异有统计学意义。长程2型糖尿病与患者的组织分化程度、局部浸润和CA19-9的水平明显相关(P均<0.05)。长程2型糖尿病和CD163+/CD68+比例是无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)的独立影响因素(P均<0.05), 长程2型糖尿病明显缩短患者的RFS和OS。结论长程2型糖尿病与胰腺癌的恶性程度明显相关, 并吸引更多的巨噬细胞聚集于肿瘤中, 这些巨噬细胞同时大量极化为M2型...     

硒抑制长链非编码RNA HOXB-AS1表达调控胃癌增殖的作用及其机制

目的探讨硒抑制长链非编码RNA HOXB cluster antisense RNA1(HOXB-AS1)表达调控胃癌增殖的作用及其机制。方法对人胃癌HGC-27、SNU-1, KATO Ⅲ细胞和人胃黏膜上皮细胞使用实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内HOXB-AS1基因表达水平;根据亚硒酸钠添加的浓度将高表达HOXB-AS1基因的细胞分为空白组、5 μmol/L组、10 μmol/L组、15 μmol/L组、20 μmol/L组、25 μmol/L组、30 μmol/L组, 分别培养24、48、72 h后采用细胞计数试剂(CCK-8)检测各组细胞活力, 筛选亚硒酸钠的最佳作用浓度;用30 μmol/L亚硒酸钠干预人胃癌HGC-27细胞, 采用RT-qPCR检测细胞内HOXB-AS1基因表达水平, 采用CCK-8检测细胞活力, 采用流式细胞术检测细胞凋亡比例变化, 运用蛋白质印迹法(Western blot)法检测蛋白激酶B(Akt)及雷帕霉素的哺乳动物靶标蛋白(mTOR)的表达水平。组间比较采用t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 RT-PCR检测结果表明, 与其他细胞...     

微小RNA-519d-3p靶向DCAF4L2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620, 同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示, 采用两样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降, 其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍, t=7.783, P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍, t=15.72, P<...