人肝、肾ABO血型抗原表达差异的初步研究

目的比较人肝、肾ABO血型抗原表达的差异,探索ABO血型抗原在血型抗体介导排斥反应中的作用。 方法ABO血型为A型和B型血的公民逝世后器官捐献供者各4例,O型血对照2例。获取供者肝脏和双肾后,留取肾动脉、肾静脉、肾组织、肝动脉、肝静脉、门静脉和肝组织标本,运用蛋白质印迹法(WB)和免疫组织化学法检测ABO血型抗原的含量和分布。 结果WB检测结果显示,同一供者不同部位ABO血型抗原含量并不一致。在同一个体内,A型抗原在肾组织和门静脉含量最高,在肾动脉含量最低;B型抗原在肝静脉及肾组织含量最高,在肾动脉、肾静脉及肝组织含量最低。不同个体之间,同一部位血型抗原含量差别也较大。通过免疫组织化学法检测,进一步发现血型抗原在肝、肾组织和血管中的分布与WB结果基本一致。 结论ABO血型抗原在不同血型、个体和器官之间均存在不同程度差异,这种差异也可能会影响ABO血型不相容器官移植的结局。     

SIRT3/MnSOD/ROS参与调控脂肪源性干细胞成骨分化的机制研究

目的:研究脂肪源性干细胞成骨分化过程中,SIRT3/MnSOD/ROS信号通路的调控作用.方法:提取SD大鼠脂肪源性干细胞(adipose derived stem cell,ADSC)并通过细胞表面标志物(CD29、CD44、CD34、CD45)及成骨、成脂多向分化鉴定.体外诱导其成骨分化,检测SIRT3表达情况;利用慢病毒转染抑制SIRT3表达,用茜素红染色检测ADSC成骨分化情况,qPCR检测成骨相关基因Runx2、ALP、OCN的表达,同时利用试剂盒检测锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)的活性及胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平.结果:ADSC成骨分化过程中,细胞内SIRT3 mRNA表达(7 d:1.71±0.03,15.21 ±0.17,P=0.014,n=5;14 d:1.44±0.04,9.70±0.18,P=0.002,n=5)及蛋白质表达(7 d:0.70±0.01,2.99±0.07,P=0.012,n=5;14 d:1.00±0.08,2.74±0.50,P=0.009,n=5)增加.转染SIRT3慢病毒可抑制SIRT3 mRNA表达(7 d:1.02±0.05,0.36±0.01,P=0.011,n=5;14 d:1.04±0.08,0.30±0.02,P=0.002,n=5)及蛋白质表达(7 d:0.88±0.04,0.29±0.01,P=0.034,n=5;14 d:1.18±0.03,0.43±0.01,P=0.014,n=5),导致ADSC成骨分化能力降低,MnSOD活性减弱(0.91±0.13,0.29±0.01,P=0.002,n=5),细胞内ROS水平升高(7 d:1.00±0.10,2.66±0.32,P=0.013,n=5;14 d:1.24±0.10,2.59±0.31,P=0.014,n=5),与成骨相关的相应靶基因Runx2、ALP、OCN表达下降(Runx2:1.07±0.02,0.19±0.01,P=0.001,n=5;ALP:1.09±0.02,0.53±0.01,P=0.001,n=5;OCN:0.95±0.02,0.33±0.01,P=0.004,n=5).加入NAC预处理细胞,可逆转敲减SIRT3对ADSC成骨分化的抑制作用(ROS:2.63±0.20,1.07±0.19,P=-0.010,n=5).结论:ADSC成骨分化过程中,线粒体内SIRT3表达增加.SIRT3通过增强MnSOD的活性来降低胞内ROS水平,从而介导ADSC成骨分化.     

预处理对ABO血型不相合肾移植受者免疫功能的影响

目的:探讨预处理对ABO血型不相合(ABOi)肾移植受者免疫状态的影响。方法:本研究纳入2018年3月至2018年9月在华西医院接受ABOi活体肾移植的9例受者及同时期ABO血型相合(ABOc)肾移植受者18例,收集和比较两组受者在预处理前后、移植前后T细胞(CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞)、B细胞计数(CD19~+CD5~+)、细胞因子[白细胞介素2(IL-2)受体、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE、IgG4)和补体(C3、C4、备解素因子B)水平。结果:ABOi组受者在移植后7d、14d及1个月时外周血B细胞计数均显著低于ABOc组受者(2.56±2.40 cell/μl vs 342.06±216.59 cell/μl,P0.001;11.67±19.02 cell/μl vs 273.42±221.07cell/μl,P=0.002;1.50±1.73cell/μl vs 363.75±385.82cell/μl,P=0.03);ABOi组受者术后7d IgG、IgA及IgM水平显著低于ABOc组(6.90±1.75 g/L vs 10.18±2.50 g/L,P=0.002;1 355.55±502.11 mg/L vs 2 169.44±719.71 mg/L,P=0.006;650.44±340.08mg/L vs 1 008.83±448.15 mg/L,P=0.04);两组受者血清肌酐和估算的肾小球滤过率(eGFR)无差异。随访期间没有患者死亡、移植肾丢失、排斥反应及感染的发生。结论:ABOi肾移植受者外周血B细胞显著减少,IgG、IgA及IgM水平短暂下降,但T细胞、细胞因子及补体水平并不受ABOi的影响,ABOi肾移植未增加受者短期内排斥和感染等的风险。