骨肉瘤与良性骨肿瘤差异蛋白质组学研究

[目的]比较骨肉瘤与良性骨肿瘤蛋白质组学差异,探寻骨肉瘤特异性标记物.[方法]分别提取5例骨肉瘤肿瘤标本和5例良性骨肿瘤总蛋白,进行双向电泳,重复3次;银染、扫描后进行ImageMaster 2DE软件分析以发现差异蛋白并对差异蛋白质点进行MS+ MS/MS质谱鉴定,获取肽质指纹图谱并在NCBI数据库中找到匹配蛋白质.[结果]所获得的双向电泳银染图谱重复性较好,骨肉瘤组织蛋白质点数约为1 296±179,骨良性肿瘤组织蛋白质点数约为1 098±152,明显差异的蛋白质点38个,其中12个被成功鉴定,7个蛋白质在骨肉瘤中表达上调,其中热休克蛋白60、应激诱导磷酸化蛋白1在骨良性肿瘤中表达缺失;5个蛋白质在骨肉瘤中表达下降,以锚定蛋白下降最明显.[结论]蛋白质组学的分析能成功的发现骨肉瘤与骨良性肿瘤的差异蛋白质,为寻找骨肉瘤特异标记物提供依据.     

硫酸镁联合罗哌卡因鸡尾酒应用于全髋关节置换术后早期镇痛

目的 评价加入硫酸镁的鸡尾酒麻醉混合剂在全髋关节置换术(total hip arthroplasty,THA)后早期的镇痛效果.方法 选择2019年9月至2020年11月在武汉科技大学附属孝感医院骨科行初次单侧THA病人共60例,随机分为观察组(硫酸镁250 mg+罗哌卡因50 mg+曲安奈德25 mg+0.9％生理盐...     

微小 RNA-301b-3p靶向第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系.结果 与hFOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高.与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)％比(7.48±0.78)％]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高.PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因.与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低.结论 抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.     

骨肉瘤与正常骨组织的蛋白质组学分析

目的 比较骨肉瘤与正常骨组织蛋白质组学的差异,探寻骨肉瘤特异性标志物.方法 分别提取5例骨肉瘤肿瘤标本和5例正常骨组织总蛋白,进行双向电泳,重复3次;银染、扫描后进行ImageMaster 2-DE Platinum 6.0软件分析以发现差异蛋白并对差异蛋白质点进行MALDI-TOE TOF质谱鉴定,获取肽质指纹图谱后应用NCBI数据库查找匹配蛋白质.结果 获得重复性较好的双向电泳银染图谱,骨肉瘤组织蛋白质点数约为(1 296±179),正常骨组织蛋白质点数约为(1108±162),明显差异的蛋白质点25个,其中10个被成功鉴定,6个蛋白质在骨肉瘤中表达上调,以谷胱甘肽转移酶升高最为突出;4个蛋白质在骨肉瘤中表达下降,以核苷二磷酸激酶下降最明显.结论 蛋白质组学的分析能成功发现骨肉瘤与正常骨组织之间的差异蛋白质,为寻找骨肉瘤特异标志物提供依据.     

蒲公英提取物调控程序化死亡基因 5对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的 探究蒲公英提取物通过调控程序化死亡基因5(PDCD5)的表达对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 选取2018年1月至2019年6月武汉科技大学附属孝感医院获得接受关节置换的5例骨关节炎病人骨组织,从中分离、培养骨关节炎软骨细胞,蒲公英提取物高、中、低剂量组处理软骨细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)和PDCD5蛋白表达水平,实时荧光定量PCR检测细胞PDCD5 mRNA表达水平;过表达或者沉默PDCD5基因,检测其对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响.结果 与对照组相比,蒲公英提取物2.5 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L组软骨细胞活性升高[48 h:(0.68±0.05)、(0.83±0.06)、(1.06±0.06)比(0.56±0.03);72 h:(0.97±0.07)、(1.42±0.07)、(1.89±0.07)比(0.79±0.05)],细胞凋亡率降低[(19.40±1.10)％、(12.31±0.59)％、(7.68±0.54)％比(22.10±1.20)％];P21、Bax表达水平降低,cyclin D1、Bcl-2表达水平升高,PDCD5 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-PDCD5组软骨细胞活性升高[48 h:(0.86±0.05)比(0.56±0.03);72 h:(1.33±0.07)比(0.79±0.05)],细胞凋亡率降低[(14.23±1.02)％比(21.98±1.12)％];P21、Bax表达水平降低,cyclin D1、Bcl-2表达水平升高(P<0.05).与蒲公英提取物5 g/L+pcDNA3.1组比较,蒲公英提取物5 g/L+pcDNA-PDCD5组软骨细胞活性降低[48 h:(0.70±0.05)比(0.86±0.06);72 h:(1.15±0.07)比(1.51±0.07)],细胞凋亡率升高[(16.88±1.02)％比(9.56±0.63)％];P21、Bax表达水平升高,cyclin D1、Bcl-2表达水平降低(P<0.05).结论 蒲公英提取物可促进软骨细胞的增殖,抑制其凋亡,其可能通过调控PDCD5基因的表达发挥对骨关节炎软骨细胞的增殖促进、凋亡抑制作用.     

阿仑膦酸钠联合经伤椎置钉内固定手术治疗骨质疏松性单节段胸腰椎骨折的临床研究

骨质疏松症是老年人常见的全身性骨科疾病,因老年身体各项器官功能衰退,激素平衡紊乱,尤其是绝经后老年女性,雌激素分泌不断减少,破骨细胞异常数量增加,成骨细胞减少,活性减弱,大量减少骨基质、骨钙,成骨吸收量高于新骨的形成量,进而诱发骨质疏松[1,2]。骨质疏松症主要表现为骨量减少、骨微观结构退化等,增加骨骼脆性,增加骨折风险,其中单节段胸腰椎骨折较为常见。经伤椎置钉内固定手术是临床治疗本病的常用手术方式,是在传统后路短节段椎弓根钉内固定术治疗基础上,将椎弓根钉经伤椎置入,辅助骨折复位,疗效较好[3]。阿仑膦酸钠可对破骨细胞的溶骨活性形成抑制,拮抗机体骨吸收和骨转移,维持骨量.     

原发性与复发性骨肉瘤差异蛋白质组学研究

目的 比较原发性与复发性骨肉瘤差异蛋白质,为寻找骨肉瘤复发的特异标记物提供依据.方法 分别对5例骨肉瘤标本和4例复发性骨肉瘤提取总蛋白,然后双向凝胶电泳,重复3次,银染后扫描用Image2 Master 2DE软件分析寻找差异蛋白,切除差异蛋白质点进行MS+MS/MS质谱鉴定,获取肽质指纹图谱并查询NCBI数据库寻找匹配蛋白质.结果 获得重复性较好的双向电泳银染图谱,原发性与复发性骨肉瘤组织蛋白质点数分别为(1 206±161)和(1 387±185),找到明显差异的蛋白质点42个,并成功鉴定出13个.与原发性骨肉瘤相比,5个蛋白质在复发性骨肉瘤中表达下降;8个蛋白质在复发性骨肉瘤表达水平升高,其中β2微球蛋白在原发性骨肉瘤中表达缺失.结论 原发性骨肉瘤与复发性骨肉瘤存在明显差异蛋白质,β2微球蛋白有可能成为诊断复发性骨肉瘤的分子标记物及检测指标.