siRNA抑制HPV18 E6 基因对HeLA细胞凋亡的影响

目的 研究特异小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒（human papillomavirus, HPV）18型 E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法 针对HPV18 E6 基因设计siRNA序列，经PCR方法体外扩增，得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物，利用LipofectamineTM2000脂质体转染HeLa细胞，在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力，流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率，RT-PCR测定HPV18 E6 mRNA变化。结果 转染siRNA后细胞活力受到显著抑制（P＜0.05），光镜下出现明显的凋亡形态，72h 的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示，细胞转染24、48和72h后HPV18 E6 mRNA分别减少了57％、78％和40%，而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论 siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa 细胞内HPV18 E6基因的表达，从而可诱导肿瘤细胞凋亡。     

AQP1通过Wnt通路促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨过表达水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析其对Wnt通路的调控作用。方法:构建和包装pBabe-puro-AQP1逆转录病毒载体,建立稳定过表达AQP1基因的MCF-7细胞。细胞免疫荧光染色法检测外源性AQP1在MCF-7细胞内的定位,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测AQP1 mRNA及蛋白表达变化;采用CCK-8法检测细胞的增殖活性;流式细胞法检测细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞的侵袭能力;基因表达谱芯片、Western blot检测转染后Wnt细胞通路相关基因表达改变。结果:稳定过表达AQP1后MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加,差异有统计学意义（P＜0.001）。基因表达谱芯片结果显示,过表达AQP1后22个差异表达基因富集于Wnt细胞信号通路,mRNAs表达明显增强（P＜0.000 1）,Wnt细胞通路关键基因β-catenin及下游靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-Myc蛋白表达也显著增加。结论:AQP1可能通过激活Wnt信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭。     

沉默HERC4表达可抑制宫颈癌细胞的增殖、凋亡和迁移

目的 探讨HERC4对宫颈癌细胞生物学功能的影响及其分子机制.方法 设计特异HERC4siRNA干扰序列,Lipofectamine2000法转染Hela细胞,Western blotting检测转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白的表达水平;CCK-8法检测转染后Hela细胞的增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测转染后Hela细胞凋亡率的变化;划痕实验检测转染后Hela细胞迁移能力.Western blotting检测转染后Hela细胞CyclinD1、Bcl-2表达变化.结果 转染特异siRNA后Hela细胞HERC4蛋白表达量明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).与对照组相比,干扰组Hela细胞生长速度明显减慢,细胞凋亡率增加,迁移能力明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01).转染后Cyclin D1和Bcl-2在蛋白水平的表达显著下调(P＜0.01).结论 siRNA可有效降低宫颈癌Hela细胞中HERC4的表达,并通过抑制Cyclin D1表达抑制宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移能力,抑制Bcl-2表达增加细胞凋亡能力.     

青蒿素作用前后K562细胞基因表达谱的改变

目的:利用基因表达谱芯片研究青蒿素对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响.方法:青蒿素处理K562细胞24 h后,分别提取处理组和对照组细胞的总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用Cy3和Cv5两种不同的荧光染料进行线性扩增标记,与人全基因组基因表达谱芯片杂交,采用生物信息学方法分析青蒿素处理前后K562细胞基因表达谱的改变.结果:总共发现差异基因238个,其中上调基因136个,下调基因102个,并对其进行生物学功能分类.结论:应用全基因组表达谱芯片并结合Panther生物学软件分析差异表达基因,青蒿素作用K562细胞主要是通过细胞毒作用诱导细胞凋亡,而抑制细胞生长作用并不明显.     

siRNA抑制HPV18 E6基因及其对HeLa细胞凋亡的影响

目的研究特异小干扰RNA(sm all interfering RNA,siRNA)对宫颈癌HeLa细胞中人乳头瘤病毒(hum an pap-illom avirus,HPV)18型E6基因的抑制及其对细胞凋亡的影响。方法针对HPV18E6基因设计siRNA序列,经PCR方法体外扩增,得到含有U6启动子以及siRNA序列的PCR产物,利用L ipofectam ineTM2000脂质体转染HeLa细胞,在U6启动子的作用下于细胞内转录siRNA。针对转染后不同时间点采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力,流式细胞仪PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR测定HPV18E6 mRNA变化。结果转染siRNA后细胞活力受到显著抑制(P<0.05),光镜下出现明显的凋亡形态,72 h的凋亡率达到55.8%。RT-PCR结果显示,细胞转染24、48和72 h后HPV18E6 mRNA分别减少了57%、78%和40%,而siRNA阴性对照与未转染细胞相比差异不显著。结论siRNA可特异有效的干扰宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,从而可诱导肿瘤细胞凋亡。     

高容量血液滤过在肝移植术后多器官功能障碍 综合征病人中的应用

 【目的】 探讨高容量血液滤过(HVHF)在肝移植术后因严重感染引起多器官功能障碍综合征(MODS)患者中的应用&#65377; 【方法】 分析2003年12月至2008年12月肝移植术后因感染引起MODS进行连续性血液净化治疗74例患者的临床资料,根据超滤率是否大于35 mL/kg/h分为HVHF组(49例)和连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH)组(25例)&#65377;记录治疗前和治疗后24 h&#65380;48 h&#65380;72 h APACHⅡ评分&#65380;电解质&#65380;血流动力学和呼吸功能各项指标,以及临床转归&#65377;分别对组内治疗后各时间点与治疗前以及两组间各时间点之间的观察指标进行比较&#65377; 【结果】 HVHF组患者,APACHⅡ评分&#65380;乳酸&#65380;肌酐&#65380;心率&#65380;多巴胺用量&#65380;气道平均压和气道峰压&#65380;氧合指数等指标在治疗后24 h&#65380;48 h&#65380;72 h较治疗前明显下降(P < 0.05)&#65377;CVVH组患者,APACHⅡ评分&#65380;乳酸&#65380;气道平均压和气道峰压值治疗前后无明显变化(P > 0.05),心率&#65380;多巴胺用量和氧合指数虽较前有所改善,但程度均不如HVHF组(P < 0.05)&#65377;HVHF组死亡率为59.2%(29/49),CVVH组为84.0%(21/25),两者具有统计学差异(χ2 = 4.652,P = 0.031)&#65377;【结论】 HVHF通过维持机体内环境的稳定,为其他治疗创造有利条件,有助于提高肝移植术后危重患者的生存率&#65377;     

人红白血病K562细胞的红系终末分化研究

人红白血病K562细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系,但在体外可被多种诱导剂诱导向红系终末分化,出现红系表征:停止分裂、表达珠蛋白基因产物、核固缩直至自然排核,因此已成为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。本文就K562细胞红系分化的机制和研究进展作一综述。     

甘草酸二铵对小鼠急性肝衰竭发生过程中HMGB1表达的影响

目的：探讨甘草酸二铵对小鼠急性肝衰竭发生过程中小鼠肝组织高迁移率族蛋白 B1（HMGB1）表达的影响。方法取雄性昆明种小鼠72只,随机分为正常对照组、急性肝功能衰竭组及甘草酸二铵治疗组。模型组及治疗组予 D-Galn 500 mg／kg 及 LPS 10μg／kg 腹腔注射建立急性肝功能衰竭小鼠模型,并于建模1 h 后予以甘草酸二铵70 mg／kg 对治疗组小鼠进行灌胃处理,正常对照组及模型组予等量生理盐水灌胃。以建模后4,8,12,24 h分别取静脉血以常规生化方法检测小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）水平,HE 染色法检查肝组织病理学变化,采用免疫组织化学法及实时荧光定量 PCR 检测小鼠肝组织中 HMGB1的蛋白表达量及 mRNA 水平。结果模型组及治疗组小鼠血清 ALT 和 AST 水平均显著高于正常对照组（P ＜0．01）,且模型4,8 h 组小鼠血清 ALT 和 AST 含量均高于相应治疗组（P ＜0．05）,模型8,12,24 h 组及甘草酸二铵治疗12,24 h组小鼠血清 TBIL 水平均显著高于正常对照（P ＜0．05）。免疫组化结果发现,模型8,12,24 h 组及治疗8,12,24 h组小鼠肝组织中 HMGB1蛋白表达水平较相应正常对照组显著增加（P ＜0．01）,且随肝衰竭发展明显增加,模型8,12 h 组 HMGB1蛋白表达量高于相应甘草酸二铵治疗组（P ＜0．05）。Real time-PCR 结果显示,模型组和治疗8,12,24 h 组小鼠肝组织 HMGB1 mRNA 表达量高于正常对照组（P ＜0．05）,模型8 h、12 h 组 HMGB1 mRNA 表达量高于相应治疗组（P ＜0．05）。结论 HMGB1在小鼠急性肝功能衰竭过程中发挥了重要作用。甘草酸二铵可能通过抑制 HMGB1的产生减轻肝损伤。