人胎盘底蜕膜间充质干细胞抗炎特性对帕金森病模型大鼠的神经保护作用

目的 研究人胎盘底蜕膜间充质干细胞(hPDB-MSCs)抗炎特性对帕金森病(PD)模型大鼠多巴胺能神经元的影响. 方法 体外培养hPDB-MSCs,6-羟基多巴(6-OHDA)制备大鼠PD模型并按照随机数字表法分为模型组与移植组,每组32只.hPDB-MSCs尾静脉移植观察各组大鼠行为学改变.免疫组化检测移植后3d、1周、2周及4周各组大鼠损伤侧黑质酪氨酸羟化酶(TH)、离子钙接头蛋白(Ibal)表达.实时荧光定量PCR检测各时间点各组大鼠损伤侧黑质抗炎因子人白细胞介素-10 (hIL-10)、人转化生长因子-β(hTGF-β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达. 结果 hPDB-MSCs移植后1周、2周、4周,移植组大鼠阿朴吗啡诱导的平均旋转圈数明显低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫组化结果显示移植组大鼠损伤侧黑质部位TH阳性细胞数较模型组明显增加,1周、2周、4周时差异有统计学意义(P＜0.05).移植组大鼠损伤侧黑质部位Ibal阳性细胞则明显减少,4周时最为显著.mRNA水平,移植组大鼠hIL-10及hTGF-β表达均较模型组增加,而TNF-α表达量则逐渐降低. 结论 hPDB-MSCs尾静脉移植后能够通过抗炎机制抑制PD模型大鼠多巴胺能神经元丧失,改善PD模型大鼠症状.     

氩氦冷冻治疗系统对犬脑冷冻范围的超导刀直径变量和时间相关性研究

目的 探讨氩氦冷冻治疗系统(简称氩氦刀)在超导刀直径及冷冻时间变量下,正常犬脑组织冷冻坏死范围及超微组织病理学变化. 方法用直径2mm、3mm氩氦冷冻超导刀插入犬脑一侧右额叶,分别冷冻3min、5min,重复一次,48h后灌注取脑组织,在光镜和电镜下观察组织病理学变化,测量冷冻坏死区直径.结果 冷冻后48h,冷冻区脑组织均呈出血坏死状,可明显分为中央坏死区、炎性反应带、出血水肿带和交界线,冷冻边缘未发现存活的脑细胞结构.结论 采取2次冻融循环,冷冻时间为3min、5min,足以导致冷冻区脑组织死亡.     

超小超顺磁氧化铁颗粒标记对脂肪源间充质干细胞生物学特性的影响

目的 使用超小超顺磁氧化铁颗粒(USPIO)对大鼠脂肪源间充质干细胞(ADSCs)进行体外标记,研究不同浓度的USPIO对大鼠ADSCs生物学活性的影响,确定其标记ADSCs的适宜浓度. 方法 实验分为8个组,其中6组依次添加不同终浓度的USPIO(180 μg/mL、135 μg/mL、90 μg/mL、45 μg/mL、22.5 μg/mL、11.25μg/mL),另2组为阴性转染组和空白对照组.普鲁士蓝染色检测USPIO标记ADSCs的效率,同时采用CCK-8及Alamar blue法检测各组细胞增殖情况. 结果 USPIO标记浓度在45 μg/mL时,普鲁士蓝染色后ADSCs胞浆内可见大量蓝色颗粒,标记效率在95％以上；USPIO标记浓度在90 μg/mL及以上时,标记效率约100％.CCK-8及Alamar blue检测结果表明USPIO在11.25～90 μg/mL范围内对细胞活力的影响较小且差异无统计学意义(P＞0.05),故可将45-90 μg/mL确定为适宜浓度. 结论 USPIO可在体外有效标记ADSCs,并且在适宜浓度范围内对细胞生物学活性无明显影响.     

人胎盘底蜕膜间充质干细胞的分离培养及其多向分化潜能的实验研究

目的探讨人胎盘底蜕膜间充质干细胞(MSCs)体外生物学特性,并验证其多向分化潜能。方法通过酶消化和密度梯度离心法从人足月胎盘底蜕膜中获取MSCs,倒置显微镜下观察其形态变化和生长特点;CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期及表面抗原(CD29、CD44、CD73、CD90、CD34、CD45、CD14)的表达;在特定诱导条件下,使其向成骨、成脂、成软骨方向分化,鉴定其多向分化潜能。结果人足月胎盘底蜕膜中分离的MSCs呈克隆样生长,形态类似于骨髓MSCs,传代后细胞增殖迅速,细胞倍增时间为(2.21±0.21)d;大于70%的细胞处于静止期(G0/G1期),阳性表达CD29、CD44、CD73、CD90,不表达CD34、CD45、CD14;经诱导后茜素红染色、油红O染色和Alcian blue染色均呈阳性表现。结论胎盘底蜕膜中含有丰富的MSCs,易于体外分离培养,且具有多向分化潜能,有希望成为另一新颖的干细胞来源。     

腰大池置管治疗脊髓拴系松解术后并发脑脊液漏

目的评价脊髓拴系松解术后放置腰大池引流管治疗脑脊液漏的效果。方法患者脊髓栓系松解术后出现脑脊液漏合并抗药性金黄色葡萄球菌(MRSA)感染和椎管内脂肪液化,放置腰大池引流管进行治疗。结果放置腰大池引流管后密切观察,综合护理,脑脊液漏停止,伤口愈合。结论脊髓拴系松解术后发生脑脊液漏时,放置腰大池引流管可以有效治疗脑脊液漏,促进伤口愈合。     

低浓度胰酶多次差速酶消纯化乳鼠雪旺细胞的实验研究

目的 介绍一种新的简便有效的体外培养和纯化雪旺细胞(SCs)方法,以获取足够数量、高纯度的SCs.方法 取新生3～5 d的SD乳鼠坐骨神经和臂丛神经,用胶原酶消化后收集细胞进行原代培养,细胞接种浓度为3x105个/mL.在接种72 h内用胰酶分步多次消化进行提纯.结果该方法与1.25 g/L胰酶差速酶消提纯SCs相比,能更有效地将SCs和成纤维细胞分离,经免疫荧光染色显示,SCs的纯度能达到95%以上.结论 本方法简便易掌握,可重复性高,能获得足够数量、高纯度的SCs供细胞移植研究.     

氩氦冷冻治疗后的荷C6胶质瘤大鼠的磁共振成像和病理研究

目的 探讨荷C6胶质瘤大鼠经氩氦刀治疗后的影像学和病理学的变化. 方法 将51只Wistar大鼠背部皮下植入体外扩增的C6胶质瘤细胞,制作荷C6胶质瘤的动物模型,模型制作成功后按照随机数字表法分为假手术组(暴露肿瘤后只插入冷冻刀头不启动氩氦冷冻系统,n=18),外科手术切除组(将肿瘤完整切除,不进行冷冻操作,n=15)和氩氦冷冻组(暴露肿瘤后启动氩氦冷冻系统,n=18).观察各组大鼠治疗前后MRI影像变化,应用Tunel检测细胞凋亡情况.结果 外科手术成功切除胶质瘤.氩氦冷冻组MRI显示T1、W1信号较术前增强,T2WI信号较术前减低假手术组治疗后MRI无明显变化.氩氦冷冻组肿瘤组织Tunel染色可见大量凋亡细胞,外科手术切除组及假手术组可见少量散在的凋亡细胞.结论 经氩氦刀治疗胶质瘤MRI提示肿瘤细胞变性坏死,病理学提示可以介导细胞凋亡,有望成为脑胶质瘤的一种有效的辅助治疗手段.     

基于癌症和肿瘤基因图谱筛选低级别胶质瘤中潜在抑癌基因的研究

目的基于癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)计划数据库的胶质瘤标本信息,探讨较低级别胶质瘤标本中相对低表达的基因与患者预后的关系。方法在TCGA数据库中选取678例胶质瘤患者[包括低级别胶质瘤(LGG)患者512例,胶质瘤母细胞瘤(GBM)166例]的698例胶质瘤标本[包括LGG患者529例,GBM169例]以及5例正常脑组织,分析其基因表达水平数据以及患者的临床资料。用R软件分析筛选在肿瘤中低表达的基因,对其进行基因注释和基因功能富集分析,用STRING和蛋白交互作用分析(Cytoscape)软件构建蛋白相互作用网络,以R软件根据基因表达水平结合患者的临床资料进行生存分析。结果在正常脑组织和胶质瘤标本、LGG和GBM组织均低表达的基因为155个;蛋白互相作用关系中连通性值最大的前20位基因中,得到12个基因的功能富集数据,谷氨酸离子型受体NMDA可能为重要的肿瘤生长信号通路之一。生存分析结果显示,12个基因中有7个基因与患者的生存预后改善有关,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论基于TCGA挖掘数据是一种有效的探索肿瘤抑癌基因的生物信息手段;谷氨酸离子型受体(NMDA)家族可能与胶质瘤的生长和预后明显相关。     

pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体的构建及在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的构建pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体并转染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察其在MSCs内的表达。方法设计并合成SDF-1α基因引物,用RT-PCR法从小鼠平滑肌细胞中扩增出带有XhoI与EcoRI酶切位点的SDF-1α基因片段,将SDF-1α基因片段克隆到真核表达载体pDsRed2-N1上,酶切和测序鉴定。培养小鼠MSCs并Vimentin蛋白免疫荧光鉴定。通过脂质体将pDsRed2-N1-SDF-1α转染入小鼠MSCs。免疫荧光检测转染后的MSCs表达SDF-1α蛋白的情况。结果扩增出的基因片断大小与基因文库中已知的SDF-1α序列大小完全相符,酶切也得到目的基因片断,测序结果显示与已知的SDF-1α序列相同,成功构建pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体。培养的细胞经Vimentin蛋白免疫荧光检测为阳性,pDsRed2-N1-SDF-1α表达载体转染到MSCs,24h后细胞免疫荧光检测可见SDF-1α融合蛋白表达。结论pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体能够在小鼠MSCs中表达SDF-1α蛋白。     

pDsRed2-Nl-SDF-1α真核表达载体的构建及在小鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的 构建pDsRed2-Nl-SDF-lα真核表达载体并转染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察其在MSCs内的表达.方法 设计并合成SDF-1α基因引物,用RT-PCR法从小鼠平滑肌细胞中扩增出带有Xhol与EcoRI酶切位点的SDF-1α基因片段,将SDF-1α基因片段克隆到真核表达载体pDsRed2-N1上,酶切和测序鉴定.培养小鼠MSCs并Vimentin蛋白免疫荧光鉴定.通过脂质体将pDsRed2-N1-SDF-1α转染入小鼠MSCs.免疫荧光检测转染后的MSCs表达SDF-1α蛋白的情况.结果 扩增出的基因片断大小与基因文库中已知的SDF-1α序列大小完全相符,酶切也得到目的 基因片断,测序结果 显示与已知的SDF-1α序列相同,成功构建pDsRed2-Nl-SDF-1α真核表达载体.培养的细胞经Vimentin蛋白免疫荧光检测为阳性,pDsRed2-N1-SDF-1α表达载体转染到MSCs,24 h后细胞免疫荧光检测可见SDF-1α融合蛋白表达.结论 pDsRed2-N1-SDF-1α真核表达载体能够在小鼠MSCs中表达SDF-1α蛋白.