人胚中脑神经干细胞的体外分离培养及分化的研究

本对人胚中脑神经干细胞体外分离培养及分化进行了初步研究．以期为神经干细胞临床应用提供实验依据。     

不同胚龄人神经干细胞的分离和培养

目的 探索不同胚龄人神经干细胞分离和培养的适宜条件。方法 在多种培养条件下，采用无血清培养和单细胞克隆技术，从7周和13周人胚脑中分离和培养神经干细胞，应用免疫荧光染色予以鉴定。结果 从两个不同胚龄的人胚脑中分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞，未包被组7周的人胚脑除高密度县浮培养法生长不良，其它密度及培养法均有克隆球形成；13周的人胚脑仅中等密度悬浮培养法及高密度贴壁培养法有克隆球形成；包被组各种密度培养均生长不良。结论 人胚脑中存在具有自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞，随着胚龄增大，培养难度逐渐加大，高密度贴壁培养法适宜各胚龄神经干细胞的分离培养。     

人胚神经干细胞在大鼠脊髓内的分化研究

目的　人胚神经干细胞 (neuralstemcellsNSCs)经全反式维甲酸 (retinoicacid)预处理后移植入大鼠脊髓内 ,观察细胞的分化情况。方法　分离 10周左右流产人胚皮层组织中的神经干细胞 ,进行体外增殖 ,部分细胞在移植前 6d加入全反式维甲酸共培养。SD大鼠 3 0只 ,随机分为 2组 :实验组移植经维甲酸预处理后的NSCs ;对照组移植未经维甲酸预处理后的NSCs。移植后 5周取出脊髓 ,应用免疫组化技术检测Brd U标记的NSCs在大鼠脊髓内的生存和分化情况。结果　大鼠脊髓内可见大量Brd U阳性细胞 ,部分能够分裂增殖 ,向注射点远处迁移。实验组的NSCs能分化出NF、GFAP、Gal c阳性细胞 ;对照组的NSCs不能分化出NF阳性细胞。结论　人胚NSCs可在宿主脊髓内生存、分裂、迁移 ;经维甲酸预处理后的NSCs能分化成神经元和神经胶质细胞 ;人胚神经干细胞可作为 1种理想的移植材料 ,而具有重要临床应用价值     

持续性腰大池外引流加全身应用抗菌药物治疗颅脑术后颅内感染

目的探讨持续性腰大池引流加全身应用抗菌药物治疗颅脑术后颅内感染的疗效。方法回顾分析43例采用蛛网膜下腔持续外引流加全身应用抗菌药物治疗的颅脑术后颅内感染患者的临床资料。结果本组患者均治愈出院,均获得随访,随访时间3～12个月,均未见复发。1例患者穿刺处皮肤感染致颅内逆行感染,予更换穿刺部位继续行脑脊液持续外引流后感染得以控制,9例患者后期因脑积水行脑室腹腔分流术。结论持续性腰大池外引流加全身应用抗菌药物治疗颅脑术后颅内感染方法简便,疗效确切。     

人胚脑皮层神经干细胞的分离培养及鉴定

目的 从人胚脑皮层中分离培养并鉴定神经干细胞，方法 利用无血清培养和单细胞克隆技术在人胚脑皮层中分离出具有单细胞克隆能力的细胞，并进行培养、传代、分化观察，采用间接免疫荧光检测克隆细胞的神经巢蛋白（Nestin)抗原和分化后特异性成熟神经细胞抗原的表达。结果 从胚龄10周的新鲜人胚脑皮层中成功分离出神经干细胞，该细胞具有连续克隆能力，可传代培养，表达神经巢蛋白抗原，分化后的细胞表达神经元细胞，胶质细胞和少突胶质细胞的特异性抗原。结论 人胚脑皮层中存在具有自我更新能力和多分化潜能的神经干细胞。     

移植维甲酸诱导的人胚神经干细胞在受损大鼠脊髓内的分化及作用

目的 将维甲酸(RA)诱导的人胚神经干细胞移植入受损的大鼠脊髓内，观察大鼠后肢运动功能的变化及细胞的分化情况。方法 实验大鼠30只遭受脊髓中度损伤后7天作移植治疗，实验组分两组：一组移植经维甲酸诱导后的细胞，另一组移植未诱导的细胞；对照组注射等量PBS液。每周一次观察大鼠后肢运动情况，移植后4周，应用免疫组化技术检测移植细胞在大鼠脊髓内的生存和分化情况。结果 实验组大鼠脊髓内见许多移植细胞存在，部分可分化出神经元样细胞，其后肢运动功能优于对照组。其中维甲酸诱导组能分化出神经元样细胞，其促进脊髓功能恢复的能力较另一组更强。结论 维甲酸预处理的神经干细胞在体内能替代缺失的神经细胞，促进受损的脊髓功能恢复．在脊髓损伤的临床治疗中具有潜在的应用价值。     

高-低密度法分离培养大胚龄人神经干细胞

目的 从大胚龄人胚脑中分离培养并鉴定神经干细胞。方法 采用高—低密度培养、无血清培养和单细胞克隆技术分离培养出神经干细胞，并应用免疫荧光染色鉴定。结果 从13周龄胚脑中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞，它们具有连续克隆能力，可传代培养，表达神经巢蛋白抗原，分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少校胶质细胞的特异性抗原。结论 高—低密度培养法能成功地分离和培养大胚龄入神经干细胞。     

正常成人脑脊液诱导人胚来源的神经干细胞分化的实验研究

目的　观察人胚来源的神经干细胞在正常成人脑脊液中的分化情况并探讨其机制。方法　将原代培养的人胚来源的神经干细胞置入含有正常成人脑脊液培养基 (DMEM/F12 +B2 7+ 3 0 %脑脊液 )使其分化 ,在分化的不同时间对分化的细胞进行免疫细胞化学染色 ,计数产生的各类神经细胞的比例。结果　正常成人脑脊液能诱导人胚来源的神经干细胞分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 ,与其在胎牛血清中的分化相比星型胶质细胞比例增多 (P <0 0 5 ) ,而其他类型细胞比例无显著性差异。结论　正常成人脑脊液能诱导人胚来源的神经干细胞分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 ,神经干细胞在脑脊液中可以存活和分化 ,为神经干细胞的移植治疗提供有力的依据     

微创穿刺治疗重症高血压脑出血69例临床分析

目的评价微创血肿腔穿刺抽吸外引流治疗重症高血压脑出血的疗效。方法CT定位下以多侧孔硅胶管垂直穿刺颅内血肿腔，术后予以血肿腔内注入尿激酶以促血肿溶解流出，对侧脑室予以外引流。结果69例患者，术后随访3个月，无死亡及植物生存病例，29例恢复日常生活，20例日常生活自理，11例生活需帮助，可扶行，9例患者卧床不起，但有意识。结论微创血肿腔穿刺术手术简便，对患者创伤小，患者术后恢复快且并发症少。     

决定神经干细胞分化的内外因素

神经干细胞 (NSC)的发现和培养成功是近十年来神经科学领域的重大突破 ,也是近年来研究的一大热点。神经干细胞是一类存在于中枢神经系统内的具有自我更新、持续分裂增殖、多向分化能力的细胞。在体外诱导条件下 ,它分化成神经元、星型胶质细胞、少突胶质细胞 ,移植入动物体内它能分化成神经元和胶质细胞并能迁移、增殖 ,与宿主细胞形成突触联系。基于这些特点 ,神经干细胞成为移植入脑内进行细胞替代治疗和转基因治疗 ,从而达到神经修复的最有前景的细胞来源之一[1～ 3 ] 。本文对近年来决定神经干细胞分化的外部条件及内在机制研究进展…