p16基因的表达上调对鼻咽癌细胞恶性表型的影响--p16基因在鼻咽癌中的改变系列研究(Ⅱ)

目的:探讨上调p16基因的表达对鼻咽癌细胞恶性表型逆转的作用,为p16基因在鼻咽癌发病过程中具有一定的作用提供直接的证据.方法:本文采用电穿孔的方法向p16基因表达下调的鼻咽癌细胞系HNE1中导入全长野生型的p16cDNA,通过G418筛选获得可以稳定传代的转染细胞系.对其中4个转染细胞系以PCR和Northern杂交鉴定转染细胞系中外源p16cDNA整合以及p16基因表达的状况.并借助比较细胞倍增时间,流式细胞计数和裸鼠接种的方法对转染细胞的恶性表型进行了检测.结果:在所鉴定的4个转染细胞系中有一个转染细胞?#4-2)不仅整合了外源p16cDNA,且p16基因的表达明显增高.与未转染的鼻咽癌细胞系HNE1及未整合外源p16cDNA的转染细胞系相比,#4-2细胞的倍增时间延长,停滞于G1期的细胞数明显增多,接种裸鼠后肿瘤形成的潜伏期延长.结论:以上实验结果证实p16基因在鼻咽癌的发生过程中确实具有一定的作用,它的表达上调可以促进鼻咽癌细胞恶性表型的逆转.     

EB病毒活化细胞周期的机制

ＥＢ病毒潜伏感染细胞后表达１０种潜伏蛋白,但只有４种可能与细胞周期的活化有关。这４种潜伏蛋白活化细胞周期的机制各不相同,且与小分子量肿瘤相关ＤＮＡ病毒也不完全相同。其中ＥＢＮＡ２和ＥＢＮＡＬＰ可共同增强周期素Ｄ２的表达,ＥＢＮＡ３Ｃ与ｐＲＢ结合使其释放Ｅ２Ｆ,而ＬＭＰ１则可能通过激活ＮＦκＢ来活化细胞周期。     

Alterations of the p16 gene in nasopharyngeal carcinogenesis

Objective To investigate whether inactivation of p16 gene is frequent in nasopharyngeal carcinoma (NPC) biopsies and whether the p16 gene may play a role in NPC carcinogenesis.Methods In the present study, the expression of the p16 gene in 14 NPC biopsies was detected by immunohistochemistry method, and the possible deletion of the exon 1α and 2 of the p16 gene was also detected in these biopsies by comparative multiplex PCR-Southern blotting with an attempt to understand the mechanism of p16 gene down regulation. To further understand the role of the p16 gene in NPC carcinogenesis, a full-length wild-type p16 cDNA was introduced into NPC cell line HNE1 with p16 gene down-regulation by electroporation. Seven G418-resistant clones were isolated. PCR was used to detect the integration of the exogenous p16 cDNA and Northern blotting was used to detect the expression of the p16 gene in 4/7 clones. Finally the growth suppression of the positiveclone was detected twice by cytometry and xenografts.Results It was found that 12/14(85%) NPC biopsies lacked p16 expression, but only 2/14(14%) biopsies contained exon 2 deletion. In four stable transfectant clones, only one showed integration of exogenous p16 cDNA with p16 mRNA expression increasing. Comparaed to the HNE1 cell line and the transfectant clones without integration of exogenous p16 cDNA, this transfectant clone showed: (a) a longer doubling time; (b) an accumulation of cells in G1 phase; (c) longer latent period of tumor formation in nude mice.Conclusion These data suggested that the p16 gene is frequently inactivated in NPC, but the deletion of exons 1α and 2 of the p16 gene can not account for high frequent lack of p16 expression. In addition to the deletion, methylation and mutation must contribute to the alteration of the p16 gene expression. The direct evidence that the p16 gene may play a role in NPC was provided by the gene transfer experiment. Up-regulation of p16 expression can inhibit the growth and tumor formation of NPC cells. All these data show that the p16 gene is a functional tumor suppressor gene in NPC and takes part in promoting the malignant phenotype reversion of NPC cells.     

凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-Xl和BaX Mrna在大鼠缺血预处理脑组织中的表达

目的 检测脑缺血预处理大鼠脑组织中凋亡调控基因Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ的表达。方法 假手术对照组、预处理对照组、预处理缺血组和缺血组Ｗｉｓｔａｒ大鼠分别再灌２４ｈ，４８ｈ和７２ｈ，采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和原位分子杂交（ＩＳＨ）方法对脑组织Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ ｍＲＮＡ的表达进行检测。结果 半定量ＲＴ－ＰＣＲ显示：与假手术对照组相比，预处理对照组大鼠再灌２４     

p16基因在鼻咽癌中缺失和表达改变的研究：p16基因在鼻咽癌中的改变系列研

目的：探讨ｐ１６基因是否在鼻咽癌活检组织中存在高频的失活，以确定该基因在鼻咽癌发病过程中所起的作用。方法：首先利用免疫组化的方法检测了１４例鼻咽癌活检组织中；ｐ１６基因的表达状况。并用比较多重ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的方法检测了这１４例鼻咽癌活检组织中ｐ１６基因外显子１α和外显子２可能的缺失，以了解导致ｐ１６基因表达下调的机制。     

p16基因的表达上调对鼻咽癌细胞恶性表型的影响：p16基因在鼻咽癌中的改变

探讨上调Ｐ１６基因的表达对鼻咽癌细胞恶性表型逆转的作用,为Ｐ１６基因在处鼻咽癌发病过程中具有一定的作用提供直接的语气方法,本文采用电穿孔的方法向Ｐ１６基因表达下调的鼻咽癌细胞系ＨＮＥ１中导入全长野生型的Ｐ１６ｃＤＮＡ,通过Ｇ４１８筛选获得可以稳定传代的转当细胞系,对其中４个转染细胞系以ＰＣＲ和Ｎｏｒｈｅｒｎ杂交鉴定转染细胞系中外源Ｐ１６ｃＤＮＡ整合以及Ｐ１６基因表达的状况,并借助比较细胞倍增时间,     

p16基因在鼻咽癌中缺失和表达改变的研究--p16基因在鼻咽癌中的改变系列研究(Ⅰ)

目的:探讨p16基因是否在鼻咽癌活检组织中存在高频的失活,以确定该基因在鼻咽癌发病过程中所起的作用.方法:首先利用免疫组化的方法检测了14例鼻咽癌活检组织中p16基因的表达状况.并用比较多重PCR-Southern杂交的方法检测了这14例鼻咽癌活检组织中p16基因外显子1α和外显子2可能的缺失,以了解导致p16基因表达下调的机制.结果:在14例鼻咽癌活检组织中有12例(～85%)缺乏p16蛋白的表达,但其中只有2例鼻咽癌活检组织存在外显子2的缺失.结论:以上的数据显示p16基因在鼻咽癌中存在高频率的失活,提示该基因在鼻咽癌发病过程中具有一定的作用,同时,上述结果也提示p16基因的缺失并不是鼻咽癌中造成p16基因表达下调的主要原因.     

p16,cyclin D1, cdk4基因在卵巢癌中的表达及其意义

目的探讨p16, cyclin D1, cdk4在卵巢癌中的表达及其意义.方法免疫组织化学检测p16, cyclin D1, cdk4蛋白在卵巢癌中的表达,原位杂交检测p16和cyclin D1在卵巢癌中的存在状况.结果 p16在卵巢癌中低表达,cyclin D1和cdk4过度表达;p16 与 cdk4呈负相关关系(P＜0.05),cyclin D1与cdk4呈正相关关系(P＜0.05).结论卵巢癌发生机制可能涉及p16, cyclin D1, cdk4调节环路中多个基因的异常,p16低表达和cyclin D1高表达一起在卵巢癌发生中起协同作用.     

p16、CyclinD1、Cdk4、Rb基因在胰腺癌中的表达及其意义

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p16、CyclinD1、Cdk4、Rb基因在胰腺癌中的表达及其意义

目的：探讨ｐ１６,ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｃｄｋ４,Ｒｂ在胰腺癌中的作用及其相互关系。方法：免疫组织化学检测ｐ１６,ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｃｄｋ４,Ｒｂ蛋白在胰腺癌中的表达,原位杂交检测ｐ１６和ＣｙｃｌｉｎＤ１在胰腺癌中的存在状况。结果：ｐ１６在胰腺癌中低表达,ＣｙｃｌｉｎＤ１呈正相关关系。结论：胰腺癌发生机制涉及ｐ１６,ＣｙｃｌｉｎＤ１,Ｃｄｋ４和Ｒｂ调节环路中多个基因的异常,ｐ１６低表达和ＣｙｃｌｉｎＤ