夏枯草水提液对实验性自身免疫性甲状腺炎的治疗作用及机制研究

目的探讨夏枯草水提液（PVAE）对实验性自身免疫甲状腺炎（EAT）大鼠的治疗作用及机制。方法用猪甲状腺球蛋白和完全弗氏佐剂制作EAT大鼠模型,随机分为PVAE预防性治疗组(P组)、PVAE低剂量治疗组（TL组）、PVAE高剂量治疗组(TH组）、EAT模型对照组(M组）,并设立正常对照组（C组）,每组14只。P组于造模前2周开始予PVAE10g/（kg·d）灌胃给药,TL组、TH组于造模后2周开始分别予PVAE10g/（kg·d）、2.5g/（kg·d）灌胃给药,M组和C组于造模后2周开始予去离子水2ml/d灌胃,连续给药6周。实验结束后检测各组大鼠血清抗甲状腺球蛋白抗体（TgAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）-丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶B（AKt）-核转录因子（NF-资B）途经下游产物趋化因子受体3（CXCR3）和趋化因子10（CXCL10）水平;观察甲状腺组织的病理改变,检测CXCR3、CXCL10、Akt和NF-资B的mRNA、蛋白及表达水平。结果M组大鼠血清TgAb和TPOAb水平较C组呈明显升高,甲状腺组织有不同程度的滤泡结构破坏和淋巴细胞浸润,提示EAT大鼠造模成功。PVAE各干预组的甲状腺滤泡均较M组完整,间质水肿减轻,少量炎症细胞浸润,其中P组TPOAb水平较M组明显降低（P＜0.01）。PVAE各干预组的CXCL10水平均较M组下降,其中P组与C组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。PVAE治疗组（TH、TL组）的AktmRNA、CXCR3蛋白表达及TH组的NF-资BmRNA、Akt蛋白表达显著低于M组（P＜0.05或0.01）。免疫组化结果显示各组大鼠甲状腺组织Akt均呈阴性表达,NF-资B、CXCR3及CXCL10在甲状腺滤泡细胞的细胞质和细胞核中呈不同程度阳性表达。M组NF-资B表达量明显高于C组（P＜0.05）,且经PVAE干预后各组NF-资B表达量均呈不同程度下调,其中P组与C组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论PI3K途径参与EAT的形成,PVAE干预可能通过抑制PI3K途径减轻自身免疫性甲状腺炎。     

抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10的新型单克隆抗体的制备及其临床应用

目的 制备抗结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP-10)特定抗原肽的单克隆抗体,为建立结核病临床早期诊断的免疫学方法奠定物质基础.方法 设计并合成结核分枝杆菌CFP-10第53 ～ 66位氨基酸(14肽AAVVRFQEAANKQK)作为特定的抗原肽序列,经免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经酶联免疫吸附试验(ELISA)检测、多次有限稀释亚克隆建立能稳定分泌抗结核分枝杆菌特异抗原肽单克隆抗体的杂交瘤细胞系,纯化该单克隆抗体,进行免疫球蛋白亚型分析,并鉴定分析该单克隆抗体在蛋白质免疫印迹法(Western blotting)、免疫沉淀法和ELISA检测中的应用效果.共检测结核分枝杆菌培养上清样本38份,非结核分枝杆菌培养上清样本20份,结核性胸水样本32份,非结核性胸水样本24份以及健康对照血清样本20份.结果 单克隆抗体免疫球蛋白亚型分析显示该杂交瘤细胞系产生的抗体类型为IgG1和κ型.该抗结核分枝杆菌CFP-10特异性单克隆抗体可成功用于Western blotting和免疫沉淀法分析.ELISA定量检测显示,该特异性抗体检测结核分枝杆菌的敏感性为78.6％ (55/70),特异性为92.2％ (59/64).结论 CFP-10特定抗原肽单克隆抗体用于结核分枝杆菌检测有较高的敏感性和特异性,可用于结核病的早期诊断.     

杭州地区2～6岁健康儿童血清垂体-甲状腺轴激素正常参考范围调查

用化学发光法检测592名杭州地区2～6岁健康儿童的血清TSH、T3、T4、FT3、FT4浓度并作统计分析,得出总人群的正常参考范围为:TSH 1.09～4.60 mIU/L,T3 1.17～1.95μg/L,T4 57.43～99.60μg/L,FT3 5.35～7.50 pmol/L,FT4 13.96～19.70 pmol/L.不同年龄、不同性别间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).

Abstract：

Serum concentrations of TSH, total and free thyroxine, and total and free triiodothyronine in 592 healthy children aged 2-6 years were determined by means of ADVIA Centaur. The normal reference ranges were calculated. The reference ranges of TSH, T3, T4, FT3, and FT4 were 1.09-4.60 mIU/L, 1.17-1.95 μg/L,57.43-99.60 μg/L, 5.35-7.50 pmol/L, 13.96-19.70 pmol/L, respectively. There was no significant difference in the interval of thyroid hormones between males and females as well as among different age groups.     

类风湿关节炎患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达及意义

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,探讨其在RA致病中的作用.方法采用流式细胞仪检测RA患者外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HLA-DR的表达,并设立正常对照组.结果RA患者外周血表达CD25的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比明显增多(P<0.01);关节滑膜液表达CD25的B淋巴细胞和表达HLA-DR的T淋巴细胞和B淋巴细胞,与正常对照组相比亦明显增多(P<0.01).结论外周血和关节滑膜液淋巴细胞CD25、HIA-DR的表达增高,在RA发病机制中起着重要的作用.     

多囊卵巢综合征患者线粒体DNA全序列突变的筛查

目的 筛查多囊卵巢综合征患者线粒体DNA突变情况.方法 对57例多囊卵巢综合征患者和38名正常对照线粒体DNA进行全序列测定,并对变异位点的差异进行了统计学处理.结果 在患者组和对照组线粒体DNA之间共筛查到233个单碱基变异和一个重复序列变异.对于前者的233个单碱基变异,两组间差异无统计学意义(P＞0.05);后者的重复序列变异位于线粒体DNA第8281位,是由9个碱基CCCCCTCTA组成的重复序列单位片段,在患者组该位点含有这一片段的比例为93.8%,而在对照组则为71.4%,分布差异有统计学意义(P＜0.05).结论 线粒体DNA第8281位重复序列CCCCCTCTA可能与多囊卵巢综合征相关.     

虫草素体外抑制NB4细胞增殖与诱导细胞凋亡作用研究

目的观察虫草素体外对急性早幼粒细胞性白血病细胞（NB4细胞）的抑制增殖和诱导凋亡作用。方法将0.5,1.0,1.5,2.0 mg&#8226;mL 1虫草素在体外与NB4细胞共同培养,采用细胞计数、噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度虫草素在24,48,72 h对NB4细胞增殖的抑制作用;用细胞瑞氏染色法、Hoechst33258荧光染色法、DNA亚二倍体检测法和线粒体膜蛋白检测法观察虫草素诱导NB4细胞凋亡的作用。结果与对照组比较,不同浓度虫草素均能显著抑制NB4细胞增殖,并呈剂量和时间依赖的量效关系;不同浓度虫草素作用24 h后均能显著促进NB4细胞凋亡。结论虫草素在体外能明显抑制NB4细胞增殖,并诱导细胞凋亡。     

Toll样受体2、3、4、9在胎盘组织中的表达及其与自发性早产的关系

目的：探讨Tol 样受体（TLRs）2、3、4、9在不同孕期胎盘组织中的表达及其与自发性早产的关系。方法选择自发性早产患者的胎盘样本38份作为早产组（其中孕28-34周和孕35~36周各19份）。选择同期正常妊娠自然分娩产妇的胎盘样本38份（孕37-40周）作为对照组。采用real- time PCR法检测两组胎盘中TLR 2、3、4、9 mRNA的表达,并用Western blot法检测胎盘中TLRs 2、3、4、9蛋白的表达,对结果进行统计学分析。结果（1）两组孕产妇胎盘组织中均可检测到TLRs 2、3、4、9的表达。（2）早产组胎盘组织TLR 2、3、9 mRNA的表达均高于对照组,两者间差异有统计学意义（均P＜0.05）;TLR4 mRNA的表达两组间无统计学差异（P＞0.05）。（3）早产组TLR 2、3、4、9的蛋白表达均高于对照组,两者差异均有统计学意义（均P＜0.05）。（4）早产组中,28~34孕周组和35~36孕周组胎盘中TLRs mRNA表达量均无统计学差异（均P＞0.05）。结论早产患者胎盘组织中TLRs过度表达,提示TLRs介导的母胎界面的免疫反应可能是启动自发性早产的重要因素。     

融合表达IL-18BP和IL-4的重组腺病毒治疗对胶原诱导型关节炎小鼠血清IL-18表达的作用

目的:构建小鼠IL-18BP和IL-4融合表达的重组腺病毒载体(Ad mIL-18BP/mIL-4),对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠进行局部关节基因治疗,观察小鼠血清IL-18表达水平。方法:采用雄性DBA-1/BOM小鼠,建立胶原诱导关节炎的小鼠模型。将融合表达小鼠IL-18BP和IL-4的重组腺病毒载体进行局部关节腔内注射后1、2、4周,采用酶链免疫吸附检测方法(ELISA),检测血清IL-18水平。同时设AdLacZ病毒对照组和PBS组织对照组。结果:CIA小鼠关节腔注射AdmIL-18BP/mIL-4后第1、2、4周,AdmIL-18BP/mIL-4治疗组的血清IL-18平均浓度分别为(36.5±5.4)ng/L、(32.5±3.2)ng/L、(28.7±2.9)ng/L,明显低于相应时间点AdLacZ对照组[(66.2±5.1)ng/L、(69.2±4.2)ng/L、(77.7±3.9)ng/L]和PBS对照组的水平[(67.3±7.1)ng/L、(71.9±1.8)ng/L、(78.7±4.1)ng/L],P均<0.01。但治疗组血清IL-1...     

血清视黄醇结合蛋白4与绝经后女性非酒精性脂肪性肝病的相关性分析

背景　绝经后女性是非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）的危险人群,罹患该病可能导致致死性心血管疾病及其他代谢异常。但NAFLD好发于这一特定生理阶段的机制尚未完全明确。目的　检测绝经后NAFLD女性血清视黄醇结合蛋白4（RBP4）水平,探讨绝经后女性血清RBP4水平与NAFLD的关系。方法　选取2017年5-8月在浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院体检中心接受健康体检的37~66岁女性181例。根据是否处于绝经状态和是否符合NAFLD诊断标准分为4组,即绝经前对照组（n=42）、绝经前NAFLD组（n=42）、绝经后对照组（n=36）和绝经后NAFLD组（n=61）。比较各组间血清RBP4水平,应用二分类Logistic回归分析绝经后女性血清RBP4水平与NAFLD的关系,采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）及曲线下面积（AUC）分析血清RBP4的诊断价值。结果　绝经后NAFLD组女性血清RBP4水平高于绝经前对照组和绝经后对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。校正混杂因素后Logistic回归分析显示,血清RBP4水平升高〔OR=1.155,95%CI（1.059,1.260）,P<0.05〕是绝经后女性NAFLD发生的危险因素。血清RBP4水平预测绝经后NAFLD的ROC曲线的AUC为0.841,95%CI为（0.757,0.924）,最佳截断值为25.1 mg/L,灵敏度为0.78,特异度为0.79（P<0.001）。结论　血清RBP4水平升高与绝经后女性NAFLD发生相关,对绝经后NAFLD的发生具有较好的辅助诊断价值。     

夏枯草干预实验性自身免疫甲状腺炎Th1/Th2失衡的研究

目的 观察夏枯草水提取液(PVAE)对实验性自身免疫甲状腺炎(EAT)大鼠炎症及Th1/Th2细胞的干预效果。 方法 提取PVAE。Lewis大鼠分5组:正常对照(C)组、EAT模型对照(M)组、PVAE预防性治疗(P)组、PVAE低剂量治疗(TL)组和PVAE高剂量治疗(TH)组。试验后取大鼠甲状腺行组织病理学检查,检测大鼠血清促甲状腺激素(TSH),抗甲状腺抗体(TgAb和TPOAb),辅助性T细胞(Th)细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-12和IL-10)水平。 结果 ①各EAT组血浆TSH、TgAb和TPOAb水平均较C组升高,P组TPOAb低于M组(P=0.037)。②EAT大鼠Th1类及Th2类表达上调,PVAE干预Th1类上调较M组低,而Th2类较M组高,Th1/Th2比值低于M组。其中IL-12表达和IL-12/IL-10,P组与M组差异有统计学意义(P<0.05)。TL组IL-12水平也低于M组(P=0.018);IL-4水平TH组高于M组(P=0.012);TH组IFN-γ/IL-4低于M组(P=0.018)。③TPOAb、IL-10和TgAb依次对TSH有显著性影响(R2=0.868,F=191.389,P<0.001)。 结论 PVAE干预可能通过下调EAT大鼠TPOAb、减轻Th1类上调及下调Th1/Th2比值来减轻自身免疫甲状腺炎。