磷脂酶A2的活力测定与临床初步应用

磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２，ＰＬＡ２）是能催化和水解膜磷脂的磷脂酶中的一种，几乎存在于所有的细胞中，在血清、胰液、精浆、唾液、滑膜液中都可测得。酶蛋白由１２５个氨基酸的单一多肽链组成，分子量１２０００～１５０００，等电点是９．２，最适...     

二氢嘧啶酶的分离纯化与性质研究

二氢嘧啶酶产生菌Pseudomonasputida 980 1经过超声波粉碎及分级盐析 ,DEAE 纤维素和羟基磷灰石柱层析 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤得到纯化 2 49倍的酶液。SDS PAGE显示为单带 ,单体分子量为 380 0 0 ,SephadexG 2 0 0凝胶过滤测得分子量为 15 6 0 0 0。二氢嘧啶酶对苯海因的km 为 2 .39× 10 -2 mol/L ,其最适 pH和最适温度分别是 8.5～ 8.7和 34℃～ 35℃。 1mmol/L的EDTA和 β 巯基乙醇对酶活力有强烈的抑制作用。     

血清与精浆磷脂酶A2的活力测定与初步应用

用自行合成的２－硫代十六酰乙在磷酯胆碱作底物建立了磷脂酶Ａ２ＰＩＡ２）的活力测定法，健康人血清ＰＩＡ２活力的９６％可信限为０－５．６Ｕ／Ｌ，健康人精浆ＰＩＡ２活力９５％可信限为０－２．９Ｕ／Ｌ。以〉５．６Ｕ／Ｌ为血清ＰＩＡ２活力或高，急性胰腺炎患者，４名急性期者均升高，５名临床好转者为正常。其他疾病患者除个别外血清ＰＡＩ２活力均在正常范围内，以〉２．９Ｕ／Ｌ为精ＰＩＡ２活力升高，不育症男性中，４９     

国外制药公司药物研制开发动态

Abgenix和Diabetogen生物制药公司正在联合开发一种抗CD28抗原的人单克隆抗体.该产品可用于治疗I型糖尿病和其他自身免疫病.生产该抗体所采用的是Abgeinx公司的Xeno-Mouse技术.     

人精子tPA和PAI-1的测定及精子上tPA的定位研究

目的 :人精子上组织型纤溶酶原原激活因子 (tPA)的分布及精子中tPA、纤溶酶激活物抑制因子 (PAI 1)活性研究。　方法 :应用底物显色法测定 6 1例人精子中tPA及其PAI 1的活性 ,其中正常对照组 2 0例 (已婚生育男子 ,经 2次精液分析正常者 ) ,少弱畸精症组 41例 ;用免疫组化法进行精子表面膜上tPA定位分析。　结果 :正常对照组精子中tPA和PAI 1的活性分别为 (0 2 4± 0 0 4)IU/ 10 6精子和 (0 2 3± 0 0 3)AU/ 10 6精子 ,少弱畸精症组的tPA和PAI 1活性分别为 (0 12± 0 0 3)IU/ 10 6精子和 (0 35± 0 0 9)AU/ 10 6精子 ,经分析二者之间有极显著差异 (P <0 0 1) ;tPA主要分布在精子的顶体膜、赤道板、颈部和尾部。　结论 :正常健康人精子中的tPA和PAI 1活性有别于弱精症者 ,提示精子上的tPA和PAI 1活性可能与精子活力、精子形态以及精子数有关 ;精子的顶体膜、赤道板、颈部及尾部存在着tPA ,推测其与精子运行、获能等有关。     

RP-HPLC法测定人精液中维生素E的含量

目的 :建立测定人精液维生素E含量的反相高效液相色谱法。　方法 :用正己烷萃取人精液维生素E ,氮气吹干 ,以甲醇定容 ;以维生素E作外标 ,用紫外检测仪检测 ,波长为 2 0 5nm。　结果 :线性关系为y =0 .30 2 9+0 .0 0 730x,r=0 .9994,回收率在 85 %～ 115 %之间 ,检测限为 4.5 35× 10 -2 μmol/L ,测定 1份样品约需 12min。　 结论 :本法与比色法或荧光法比较 ,测定人精液中维生素E含量准确 ,特异性强 ,灵敏度高 ;结果提示不育病人精子密度越高精液维生素E含量越高。     

抗人精浆磷脂酶A2单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的 :制备并鉴定人精浆磷脂酶A2 (PLA2 )的单克隆抗体 (McAb)。　方法 :通过PEG沉淀、SephacrylS 30 0柱层析、DEAE SephadexA 2 5柱层析及羟基磷灰石 (HA)柱层析分离纯化人精浆中的PLA2 ,并以SDS PAGE鉴定其分子量及蛋白浓度 ;免疫BALB/C小鼠制备抗PLA2McAb ,通过ELISA技术、Western Blot方法鉴定其敏感性及特异性。　结果 :从精浆中提纯的PLA2的相对分子质量 (Mr)约为 3490 0 ,纯化倍数约为 2 4 5倍。制备的McAb经鼠Ig亚类分析为IgMKappa型 ,敏感性可达 1∶5 6～ 1∶5 8,Western Blot证明其特异结合的抗原即为PLA2蛋白酶。结论 :Mr为 3490 0的PLA2可能为一种新型PLA2。该PLA2的McAb的制备将为研究人精浆中PLA2与男性生殖能力的关系提供广阔的前景     

生物活性蛋白钙调素与磷脂酶A2的高效毛细管电泳纯度分析

采用高效毛细管电泳对猪脑中提取的钙调素与猪胰腺中提取的磷脂酶Ａ２进行分离分析。以Ｂｉｏ－Ｒａｄ２０ｃｍ×２５μｍｃｏａｔｅｄ石英毛细管为分离柱，ＵＶ２００ｎｍ为检测波长，选择０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ３．５）为钙调素电泳分离缓冲液体系，０．０５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ２．５，内含０．１％ＨＰＭＣ）为磷脂酶Ａ２电泳分离缓冲液体系，对多步分离纯化获得的钙调素与磷脂酶Ａ２进行纯度分析，同时为进一步研究钙调素与磷脂酶Ａ２的生物活性提供了有效的检测手段。