硫酸镁与氯化钠溶液灌洗对创伤性关节炎软骨损伤修复的影响

目的通过股骨髁间钻孔构建兔创伤性关节炎(PTOA)模型,比较相同渗透压下(400 mOsm/L)硫酸镁与氯化钠溶液持续灌洗对PTOA软骨损伤修复的影响。方法对18只新西兰白兔采用股骨髁间钻孔构建PTOA模型,随机分为PTOA组、氯化钠组和硫酸镁组,每组6只。ELISA检测关节腔积液白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)的表达,qPCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α、金属蛋白酶-3(MMP-3)基因表达。行软骨切片染色组织学观察及骨关节炎(OA)评分。结果关节腔积液IL-1β、TNF-α、CollagenⅡ分泌硫酸镁组少于PTOA组和氯化钠组,滑膜组织IL-1β、TNF-α和MMP-3 mRNA水平硫酸镁组低于PTOA组和氯化钠组;软骨组织切片OA评分硫酸镁组低于PTOA组和氯化钠组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与相同渗透压下氯化钠溶液相比,硫酸镁溶液有利于减轻关节内炎症,减少CollagenⅡ及蛋白聚糖丢失,对软骨退变起到保护作用,有利于延缓PTOA病情进展。     

力学信号的拮抗剂或激动剂对体外培养的C2C12成肌细胞自身抗原相关因子表达的影响

目的探讨力学信号的拮抗剂或激动剂对体外培养的C2C12成肌细胞自身抗原表达的影响。方法根据不同的处理方法将C2C12细胞分成对照组、EGTA、A23187、钙调蛋白抑制剂calmidazolium chloride、钙调蛋白(calmodulin)、一氧化氮合成酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、硝普钠(SNP)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-2抑制剂1、重组肝细胞生长因子(HGF)、抗HGF抗体、肝细胞生长因子受体C-met和抗C-met处理组。用Western blot法检测不同处理条件下NuRD脱乙酰酶复合物可重构成分(Mi-2)、组氨酰-tRNA合成酶(HRS)、DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs)和Ku-70蛋白的表达变化。结果与对照组相比,A23187、calmodulin组、SNP、重组HGF组、重组C-met处理后,自身抗原表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01),EGTA、calmidazolium chloride、L-NAME、抗HGF兔多克隆抗体、抗C-met兔多克隆抗体处理后,自身抗原蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。MMP-2组的自身抗原蛋白水平表达与对照组相比无显著性差异(P0.05)。结论细胞外钙离子和钙调蛋白、L-NAME和SNP、HGF、C-met参与介导成肌细胞自身抗原的表达。     

Notexin对小鼠体内CD8+ T淋巴细胞活性的干扰作用

目的　探讨肌肉注射Notexin是否影响C57BL/6小鼠骨骼肌引流淋巴结内的外源性CD8+ T细胞（OT-I细胞）的活性和增殖。  方法　分别采用Notexin注射或机械挤压法制备B6小鼠的胫骨前肌（TA）急性肌损伤模型,并获得性转移（adoptive transfer, i.v.）OVA特异的OT-I细胞（CFSE标记）,随后肌注可溶性OVA蛋白。收集损伤侧TA引流淋巴结 (腘、腹股沟淋巴结),流式分析OT-I细胞的增殖程度。OVA静脉内注射免疫B6鼠,收集激活的脾脏树突状细胞（cDCs）,与CFSE标记的OT-I细胞体外联合培养,并添加不同稀释度的Notexin, 流式检测OT-I细胞的活性和增殖。 结果　CFSE的荧光递减结果证实,机械挤压损伤鼠TA引流淋巴结内OT-I细胞迅速活化增殖,但Notexin诱发的肌损伤小鼠引流淋巴结内OT-I细胞在4 d时无增殖反应,7 d的增殖率与非注射组无显著差异。与活化的cDCs细胞共培养的OT-I细胞活性良好,增殖显著,但即使添加高度稀释（1：1000）的Notexin也会严重干扰OT-I细胞的活性和增殖。  结论　肌内注射Notexin注射将干扰CD8+ T细胞的活性,这表明蛇毒血清诱导的骨骼肌损伤模型不适用于肌损伤诱发的T细胞功能改变的相关研究。     

羟基磷灰石形貌对RAW264.7细胞破骨分化影响研究

目的　分析羟基磷灰石（HAp）不同形貌对小鼠单核RAW264.7细胞破骨分化性能的影响。  方法　采用水热合成及pH调节的方法获得不同形貌羟基磷灰石微米颗粒,通过扫描电子显微镜（SEM）表征材料形貌。将不同形貌HAp与RAW264.7细胞共培养,通过Live/Dead活性染色检测HAp对细胞活性有无影响;并在RANKL破骨诱导因子的作用下通过抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、实时荧光定量(qRT-PCR)分析不同形貌HAp对RAW264.7细胞破骨分化的影响。  结果　24h Live/Dead活性染色证实微棒与微球HAp均具有良好的生物相容性。qRT-PCR结果表明,两种形貌HAp均抑制RAW264.7细胞的破骨分化,而相对于微球HAp,微棒HAp抑制作用较显著。  结论　羟基磷灰石形貌的差异能够引起RAW264.7破骨分化性能的差异表达。     

胫骨骨折手术前后关节内炎症因子的变化分析

目的探讨胫骨骨折手术前后关节液中炎症因子的变化情况。方法对2015年10月至2017年5月我院收治的胫骨平台骨折患者手术前后关节内的炎症因子进行分析,共纳入41例,其中男28例,女13例。年龄23～64岁,平均42.8岁。骨折按Schatzker分型:I型9例,II型7例,III型6例,IV型4例,V型7例,VI型8例。按受伤至手术时间不同分为两组,A组:36例,受伤至手术时间为3～7天,平均5.2天;B组:5例,受伤至手术时间为12～14天,平均12.6天。手术当天及术后4天收集关节腔积液,ELISA检测IL-1β、TNF-α、TRAP、IL-6的表达情况。结果 Schatzker III型骨折关节腔积液中IL-1β的表达较其它4型都低(P=0.001,P=0.000,P=0.001,P=0.000),与Schatzker IV型相比,差异无统计学意义(P=0.607)。TRAP的表达较其它4型都低(P=0.003,P=0.042,P=0.017,P=0.032),与Schatzker IV型相比,差异无统计学意义(P=0.173)。IL-6的表达较其它5型都低(P=0.000,P=0.000,P=0.001,P=0.000,P=0.000)。而TNF-α在各分型中的表达,差异无统计学意义(P=0.134)。IL-1β和IL-6在Schatzker II、VI型骨折关节腔积液中的表达量高于Schatzker III、IV型,差异有统计学意义(P=0.001,P=0.003,P=0.001,P=0.003;P=0.000,P=0.015,P=0.000,P=0.046)。A组和B组术后4天关节腔内IL-6的表达量均较术前增高(P=0.000,P=0.002),A组术后关节腔内IL-1β、TNF-α、TRAP的表达量较术前降低(P均为0.000),而B组术后反而增高(P=0.002,P=0.007,P=0.004)。结论受伤后7天内手术恢复骨折完整性,可降低关节内炎症因子的表达,而受伤后12天以上手术,炎症因子会再度升高。     

NO抑制体外IFN-γ刺激成肌细胞/肌管NLRP3炎性小体活化

目的观察一氧化氮供体硝普钠(SNP)、一氧化氮合酶抑制剂(L-NAME)对体外炎性培养(IFN-γ刺激)成肌细胞/肌管NLRP3炎症小体活化的影响。方法利用IFN-γ刺激小鼠C2C12成肌细胞/肌管,q PCR和Western blot分析炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)的形成及活化、ELISA检测细胞培养上清IL-1β的分泌。进一步利用L-NAME和SNP处理IFN-γ诱导的C2C12细胞/肌管,分析炎性小体的形成、活化及IL-1β的分泌。结果 IFN-γ刺激培养后,成肌细胞/肌管中NLRP3、ASC和mature-caspase-1表达水平上调(P0.01)。较之未刺激的细胞,IFN-γ诱导会显著上调成肌细胞/肌管培养基中的IL-1β浓度(P0.01)。SNP处理后6 h,分化肌管(IFN-γ刺激48 h)内炎性小体(ASC、NLRP3、caspase-1)mRNA和蛋白水平较单纯刺激细胞显著下调(P0.01),L-NAME则上调ASC、NLRP3、caspase-1表达水平(P0.05)。与上述结果一致,SNP和L-NAME处理同时分别下调或上调培养基中IL-1β浓度(P0.05)。结论在炎性条件下,成肌细胞/肌管具备合成并活化NLRP3炎性小体的能力。NO对炎性小体的形成及活化有一定的抑制作用。     

成肌细胞的临床应用进展

成肌细胞是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞,来源于中胚层干细胞,胚胎发育过程中首先由间充质细胞分化为成肌细胞,然后分裂、融合成多核肌纤维,形成肌小管,再进一步分化为成熟的骨骼肌细胞。成肌细胞具有自我更新和促     

硫酸镁启动自噬对兔软骨保护作用机制研究

目的探讨硫酸镁通过启动自噬保护兔软骨的作用机制。方法取24只成年雌性新西兰兔,采用前交叉韧带切断方法制备创伤性关节炎(post-traumatic osteoarthritis,PTOA)模型,随机分为PTOA组、蒸馏水组和硫酸镁组,每组8只。术后即刻开始,蒸馏水组及硫酸镁组分别于关节腔内注射0.5 mL蒸馏水及20 mmol/L硫酸镁溶液,每周3次,连续4周;PTOA组不作处理。术后观察动物一般情况;术后4周取材,ELISA检测关节腔积液TNF-α和Ⅱ型胶原及静脉血中Ⅱ型胶原表达量,Western blot检测股骨软骨组织中瞬时感受电位V5(transient receptor potential channel vanilloid 5,TRPV5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain 3,LC3)蛋白(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)表达,实时荧光定量PCR检测滑膜组织中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinases 3,MMP-3)及软骨组织中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖(Aggrecan,AGN)、SOX9 mRNA水平,软骨组织切片行HE、Masson、阿利新蓝染色并参照改良组织学骨关节炎(osteoarthritis,OA)评分标准评分。结果各组动物均存活至实验完成。与其他两组比较,硫酸镁组关节腔积液中TNF-α以及关节腔积液及静脉血中Ⅱ型胶原表达量均降低,TRPV5蛋白表达明显降低、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高,滑膜组织中IL-1β、TNF-α、MMP-3 mRNA表达降低,软骨组织中Ⅱ型胶原、AGN、SOX9 mRNA表达升高,OA评分亦显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。PTOA组及蒸馏水组以上指标比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论关节腔内注射硫酸镁可减轻兔关节内炎症,减少Ⅱ型胶原及AGN丢失,有利于软骨再生,其作用机制可能是通过抑制钙离子通道TRPV5,进而启动软骨自噬。     

硫酸镁启动自噬对兔软骨保护作用机制研究北大核心CSCD

目的探讨硫酸镁通过启动自噬保护兔软骨的作用机制。方法取24只成年雌性新西兰兔,采用前交叉韧带切断方法制备创伤性关节炎(post-traumatic osteoarthritis,PTOA)模型,随机分为PTOA组、蒸馏水组和硫酸镁组,每组8只。术后即刻开始,蒸馏水组及硫酸镁组分别于关节腔内注射0.5 mL蒸馏水及20 mmol/L硫酸镁溶液,每周3次,连续4周;PTOA组不作处理。术后观察动物一般情况;术后4周取材,ELISA检测关节腔积液TNF-α和Ⅱ型胶原及静脉血中Ⅱ型胶原表达量,Western blot检测股骨软骨组织中瞬时感受电位V5(transient receptor potential channel vanilloid 5,TRPV5)及微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain 3,LC3)蛋白(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)表达,实时荧光定量PCR检测滑膜组织中IL-1β、TNF-α、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinases 3,MMP-3)及软骨组织中Ⅱ型胶原、蛋白聚糖(Aggrecan,AGN)、SOX9 mRNA水平,软骨组织切片行HE、Masson、阿利新蓝染色并参照改良组织学骨关节炎(osteoarthritis,OA)评分标准评分。结果各组动物均存活至实验完成。与其他两组比较,硫酸镁组关节腔积液中TNF-α以及关节腔积液及静脉血中Ⅱ型胶原表达量均降低,TRPV5蛋白表达明显降低、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高,滑膜组织中IL-1β、TNF-α、MMP-3 mRNA表达降低,软骨组织中Ⅱ型胶原、AGN、SOX9 mRNA表达升高,OA评分亦显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。PTOA组及蒸馏水组以上指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论关节腔内注射硫酸镁可减轻兔关节内炎症,减少Ⅱ型胶原及AGN丢失,有利于软骨再生,其作用机制可能是通过抑制钙离子通道TRPV5,进而启动软骨自噬。     

神经生长因子诱导后的神经元样PC12细胞与成肌干细胞共培养的实验研究

目的 探讨神经元样PC12细胞对C3H小鼠成肌干细胞C2C12增殖与分化的影响. 方法 利用Transwell建立PC12细胞和C2C12细胞共培养体系,实验分为3组:空白对照组:C2C12细胞单独培养；实验组:C2C12细胞与已分化的PC12细胞共培养；阴性对照组:C2C12细胞与未分化的PC12细胞共培养.免疫荧光染色鉴定神经生长因子(NGF)对PC12细胞的促分化效应；流式细胞仪检测共培养条件下C2C12细胞的增殖情况；逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和实时荧光定量核酸扩增(qPCR)检测与PC12细胞共培养3、7d后C2C12细胞生肌索、结蛋白基因的表达.结果 体外条件下,NGF诱导PC12细胞呈现神经元样特征:具有细长的细胞突起,并阳性表达微管相关蛋白-2.流式细胞仪检测证实:已经分化的PC12细胞抑制C2C12细胞的增殖.实验组DNA合成前期的C2C12细胞所占百分比(77.2％±0.4％)较空白对照组(71.0％±0.6％)和阴性对照组(70.8％±0.8％)高,反应增殖活力的增殖指数(22.8％±0.4％)较空白对照组(29.0％±0.6％)和阴性对照组(29.2％±0.8％)低,差异均有统计学意义(P＜0.05).实验组C2C12细胞生肌素、结蛋白基因的表达高于同一培养时间其他组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 神经化的PC12细胞抑制C2C12细胞的增殖,但促进其分化.