半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1的基因克隆真核表达及细胞定位

目的 构建带FLAG标签的半胱氨酸和甘氨酸富集蛋白1(CRP1)的真核表达载体,明确该融合蛋白在人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞和乳腺癌ZR75-1细胞中的表达及定位情况.方法 采用PCR技术从乳腺cDNA文库中扩增出人CRP1基因,并将其插入到pCMV-Tag2B表达载体中;将重组质粒转染人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞,Western blot法检测转染细胞的表达情况;荧光显微镜观察pCMV-FLAG-CRP1在人胚肾293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞中的定位.结果 双酶切和测序鉴定表明,pCMV-FLAG-CRP1真核表达质粒构建成功;Western blot法检测pCMV-FLAG-CRP1转染293T细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌ZR75-1细胞后成功表达;荧光显微镜下观察,在293T、HepG2、ZR75-1细胞中,CRP1在细胞质和细胞核中均有分布,且胞质信号强于胞核.结论成功构建pCMV-FLAG-CRP1真核表达载体,CRP1可在不同细胞中的胞质和胞核表达.     

腹腔镜、胆道镜引导下钬激光碎石术治疗肝内外胆管结石的临床体会

目的：探讨腹腔镜胆道镜引导下钬激光碎石治疗肝内外胆管结石的可行性。方法：回顾分析2008～2012年为45例肝内外胆管结石患者行腹腔镜胆道镜引导下钬激光碎石治疗的临床资料。结果：45例患者中3例中转开腹;42例成功完成手术,手术时间90～150 min,平均（110±16）min。术后残留结石7例,6例一次取石成功,1例两次取石成功;术后均有轻至中度肝功损害,对症治疗后痊愈;1例少量胆漏,经引流治愈,无切口感染、血栓等其他并发症发生。结论：腹腔镜、胆道镜引导下钬激光碎石术治疗肝内外胆管结石具有患者创伤小、术后康复快等优点,安全、实用。     

身体质量指数与肝癌患者术后肝功能预后的关系

目的 探讨身体质量指数(BMI)与肝癌患者手术后肝功能恢复的关系.方法 按照BMI把患者分为正常体质量组、超体质量组和肥胖体质量组.每组患者记录手术前后白蛋白、总胆红素、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)低...     

刺参黏多糖诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的情况,并初步探讨SJAMP对HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1表达有何作用,为其能否应用于肝癌的临床治疗提供理论依据和可行性评估.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,用不同浓度的刺参黏多糖(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0g/L)培养人肝癌细胞HepG2.采用细胞毒试验(MTT法)检测HepG2细胞抑制率,蛋白印迹法(western blot)检测相关蛋白Bcl-2和nm23-H1 的变化. 结果 (1)MTT细胞毒试验证实SJAMP能明显抑制人肝癌细胞HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.(2)western blot试验中,与空白组相比,SJAMP处理组、对照组(5-FU)及共同作用组HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达均明显降低(P<0.05),nm23-H1蛋白的表达则明显升高(P<0.05). 结论 (1)SJAMP可通过抑制细胞增生并诱导凋亡来抑制人肝癌细胞HepG2的生长;(2)SJAMP可诱导人HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1蛋白含量的改变来发挥其抗肿瘤作用.     

抓廉政建设促卫生检疫事业的发展

1 在改革开放的新形势下,党风和廉政建设是一个至关重要的大问题。我们的党是久经考验的伟大的党,得到了人民群众的信赖和拥护。但是,我们也应该清醒地看到在党内、在国家机关中存在着不正之风和消极腐败现象,有些方面还在滋长和蔓延。江泽民同志最近曾严肃地指出:“腐败现象是侵入     

腹腔镜胆囊切除术治疗急性坏疽性胆囊炎36例

目的探讨应用腹腔镜胆囊切除术治疗急性坏疽性胆囊炎的手术技巧。方法回顾性分析2008年4月至2012年1月收治的36例急性坏疽性胆囊炎患者的临床资料,均行腹腔镜胆囊切除术（LC）。结果 36例均成功完成手术,其中2例中转开腹,术后无出血、胆瘘、胆总管损伤等并发症发生,术后住院3～7d,1例术后第7天（已出院）发生下肢深静脉血栓,经溶栓治疗痊愈。结论急性坏疽性胆囊炎为LC的相对适应证,术中联合应用吸引器、纱布压迫等方法,可以减少出血,保持术野清晰,容易辨认组织结构,减少和避免术中误伤和术后并发症的发生。     

带myc标签的人HER2基因真核表达载体的构建及其生物学功能

目的构建人类HER2基因的真核表达载体,并对其促进乳腺癌细胞增殖效果及靶向药物敏感性进行验证。方法采用PCR技术扩增出HER2基因,将其插入到pXJ-40-myc载体中,酶切和测序验证后,将其转染到乳腺癌ZR75-1细胞中,Western blot法检测其表达情况;CCK8法测定细胞生长曲线;加入靶向药物曲妥珠单克隆抗体后,观察转染细胞对药物的反应。结果酶切和测序结果证实表达质粒构建成功;Western blot法结果显示,myc-HER2蛋白在转染细胞中成功表达;转染myc-HER2的乳腺癌细胞较空载体细胞生长较快;加入曲妥珠单克隆抗体后,转染myc-HER2的细胞生长明显受到抑制。结论成功构建了带myc标签的HER2基因真核表达载体,为进一步研究曲妥珠单抗的耐药奠定了实验基础。     

人FHL1各LIM结构域融合蛋白的原核表达、纯化及活性检测

目的构建人FHL1各LIM结构域的原核表达载体,获得纯化的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4融合蛋白,并对其活性进行检测。方法用PCR法从FHL1真核表达载体中扩增FHL1的LIM1/2、LIM1、LIM2、LIM3和LIM4基因编码序列,将其正确插入pGEX-KG载体,重组质粒转化大肠杆菌Rossate表达后,用GST-Sepharose 4B珠子纯化融合蛋白,并用Western blot法检测融合蛋白表达,通过GST pull-down技术检测纯化蛋白与已知结合蛋白雌激素受体α(ERα)的相互作用。结果构建得到FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因的原核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;在Rossate菌中诱导表达出与预期大小相符的目的蛋白,经Western blot法检测,融合蛋白成功表达;纯化得到GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4五个融合蛋白,GST pull-down证明FHL1全长以及FHL1-LIM1/2、-LIM2蛋白可以和ERα相互作用。结论成功克隆FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4基因,并获得了活性良好的GST-FHL1-LIM1/2、-LIM1、-LIM2、-LIM3和-LIM4蛋白,为研究FHL1在乳腺癌中的作用奠定了实验基础。     

海军舰员晕船、不晕船眼震电图各50例分析

为了解晕船的发病机制,作如下的临床研究。对象及方法我科于1981年12月～1987年2月对海军某部晕船与不晕船舰员各50名,以YZ-1型眼震电图仪检查。晕船组为6级风浪以下发生;不晕船组为7～11级风浪无晕船反应。本组均为男性,18～32岁,上舰工作1～10年,听力正常,无眩晕,无耳病史及药物中毒史。体位,平卧头高30°,灌水量50ml,灌水时间20s,水温30℃及44℃,暗室内闭目心算,双耳刺激间隔时间为5min。结果本组比较见表1-3