落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p38丝裂原激活蛋白激酶信号传导通路的影响

目的：用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型，探讨落新妇苷对心脏移植排斥反应中活化T细胞p3S丝裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）信号传导通路的影响。方法：分离BALB／C小鼠心肌细胞（2×10^5个·mL^-1）和C57BL／6小鼠的睥细胞（1×10“个·mL^-1），前者做刺激细胞，后者做反应细胞，进行混合细胞培养，建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分3组：对照组，心肌细胞与脾细胞混合培养；落新妇苷组，在对照组基础上加入落新妇苷（15mg·L^-1）；落新妇苷加p38MAPK抑制剂组，在对照组基础上加入落新妇苷（15mg·L^-1）和p38MAPK抑制剂SB203580（5μmol·L^-1）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞p38MAPK表达情况。结果：落新妇苷组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显高于对照组（P＜0．01）。落新妇苷加p38MAPK抑制剂组T细胞凋亡指数和p38MAPK表达均明显低于落新妇苷组（P＜0．01），而与对照组相比差异无显著性（P＞0．05）。结论：落新妇苷诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其激活p38MAPK信号传导通路有关。     

落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞蛋白激酶C信号传导通路的影响

目的用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号传导通路的影响。方法分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×10~5/ml)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×10~6/ml),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇甙组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/ml);落新妇甙加PKC激动剂组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/ml)和PKC激动剂PMA(10nmol/L);落新妇甙加PKC抑制剂组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/ml)和PKC抑制剂CHE(10μmol/L)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR和Western blot法检测T细胞PKC、NF-κB,caspase-3和Bcl-2表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数和caspase-3明显高于对照组(P<0.01),PKC、NF-κB和Bcl-2表达显著低于对照组(P<0.01)。落新妇甙加PKC抑制剂组T细胞凋亡指数和caspase-3显著高于落新妇甙组,PKC、NF-κB和Bcl-2表达显著低于落新妇甙组(P<0.01)。落新妇甙加PKC激动剂组T细胞凋亡指数,caspase-3、PKC、NF-κB和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论落新妇甙诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其抑制PKC信号传导通路有关。     

落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响

目的用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞穿孔素和颗粒酶B表达的影响。方法分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105m l-1)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106m l-1),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分2组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇甙组,在对照组基础上加入落新妇甙(15μg/m l)。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。RT-PCR法检测T细胞穿孔素和颗粒酶B表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.01),穿孔素和颗粒酶B表达明显低于对照组(P<0.01)。结论落新妇甙诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡的同时也抑制了穿孔素和颗粒酶B的释放,从而有效拮抗心脏移植排斥反应。     

落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇信号通路的影响

目的探讨落新妇甙对心脏移植效应性T细胞磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（PI-3K／PKB）信号传导通路的影响。方法分离BALB／C小鼠心肌细胞（2×10s／m1）和C57BL／6小鼠的脾细胞（1×10^6／ml），前者作刺激细胞，后者作反应细胞，进行混合细胞培养，建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型。实验分4组：对照组，心肌细胞与脾细胞混合培养；3个实验组在对照组基础上，落新妇甙组加入落新妇甙（15μg/ml）；落新妇甙加P13K激动剂组加入落新妇甙（15μg/ml）和P13K激动剂IL-8（20μg/ml）；落新妇甙加P13K抑制剂组加入落新妇甙（15μg／ml）和P13K抑制剂LY294002（20μmol／L）。TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况。Western blot法检测T细胞P13K和Bcl-2蛋白表达情况。RT-PCR法检测T细胞PKB mRNA表达情况。结果落新妇甙组T细胞凋亡指数明显高于对照组[（74．2±11．7）％对（34．2±9．6）％，P〈0．01]，P13K、PKB、Bcl-2表达显著低于对照组（P〈0．01）。落新妇甙加P13K抑制剂组T细胞凋亡指数显著高于落新妇甙组，P13K、PKB、Bcl-2显著低于落新妇甙组（P〈0．01）。落新妇甙加P13K激动剂组T细胞凋亡指数和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论落新妇甙诱导心脏移植效应性T细胞凋亡与其抑制PI-3K／PKB信号通路有关。