大肠埃希菌MG1655 Lon蛋白酶编码基因敲除株的构建

目的构建Lon蛋白酶编码基因缺失的大肠埃希菌（E．coli MG1655）菌株。方法PCR扩增基因序列,该序列两端与Lon蛋白酶基因部分序列同源,中间部分为氯霉素抗性基因。电转化法将该片段转入大肠埃希菌MG1655。利用宿主菌-大肠埃希菌MG1655内pKIM6编码的入重组系统,以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因-Lon编码基因。氯霉素抗性平板筛选阳性重组体,琼脂糖凝胶电泳和DNA测序两种方法鉴定lon敲除突变株。结果氯霉素抗性平板成功筛选出重组菌株,基因检测结果表明Lon编码基因被氯霉素抗性基因替代。结论本研究通过该方法成功获得了E．coliMG1655蛋白酶编码基因lon敲除突变株,为探讨大肠埃希菌Lon在牙菌斑形成中的作用奠定了基础。     

入骨髓间充质干细胞定向成骨诱导分化移植修复腭裂骨缺损的初步临床研究

目的 探讨骨髓间充质于细胞(MSCs)骨向分化移植修复腭裂的可行性和临床效果.方法 临床上选取深Ⅱ度腭裂患者22例,年龄2.5 ～6.0岁,男女不限,随机分为2组,研究组:取白体髂骨MSCs扩增后联合胶原支架并进行成骨细胞定向诱导分化后,植入腭骨缺损区,腭裂手术采用两瓣法;对照组:在腭裂骨缺损区仅植入胶原支架,手术亦采用两瓣法.术后6个月复诊行鼻息计、锥形束CT(CBCT)和语音检测.结果 研究组硬腭骨缺损完全修复,实验组骨缺损未见骨组织修复.应用腭裂语音字表评测11例患者语音清晰度,4例达到优,5例结果为良,优良率约为82％;应用鼻息镜检测发现鼻漏气得到有效控制,其中5例患者,当发“i”音时腭咽闭合完全,鼻息镜无凝露产生.对照组优1例,良4例,差6例,劣0例,优良率约为45％;鼻息镜检测有10例患者发“i”音时鼻息镜均有凝露产生.结论 自体MSCs扩增并骨向分化移植能较好的修复腭裂骨组织缺损,获得较好的语音效果.     

骨劈开技术中颊侧骨板骨折发生率及其影响因素分析

目的:探究骨劈开技术中颊侧骨板骨折发生率,并分析其影响因素。方法:取新鲜猪肋骨建立骨劈开实验模型,再植入直径4.0 mm、长度10 mm种植体,根据颊侧骨板骨折情况,分为骨折组和非骨折组,比较两组颊侧骨板/皮质骨厚度、骨板挤压量、颊侧骨板位移角度、种植体偏移角度等参数,采用Logistic回归模型分析颊侧骨板骨折的影响因素。结果:共植入种植体45枚,颊侧骨板骨折发生率为33.33%(15/45)。骨折组颊侧中点松皮比、颊侧基底松质骨厚度低于非骨折组,颊侧骨板水平向位移和颊侧骨板偏移角度高于非骨折组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,颊侧骨板水平向位移是颊侧骨板骨折的独立危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析显示,颊侧骨板水平向位移与颊侧中点处松皮比、颊侧骨板偏移角度和种植体偏移角度呈正相关,与颊侧基底松质骨厚度呈负相关(P<0.05),与颊侧嵴顶骨板挤压量、舌侧嵴顶骨板挤压量等其他指标无明显相关性(P>0.05)。结论:颊侧骨板水平向位移是骨劈开技术中颊侧骨板骨折的独立危险因素,术前评估种植区骨质情况,有助于评估颊侧骨板骨...     

糖皮质激素瘤内注射和全身给药治疗婴儿腮腺血管瘤对比分析

目的 比较糖皮质激素瘤内注射给药和全身口服给药治疗婴儿腮腺血管瘤的疗效.方法 将64例腮腺血管瘤患者随机分为注射组(曲安缩松3 mg/kg)和口服组(泼尼松龙3 mg/kg),检测治疗前后肿瘤大小、并发症以评价治疗效果.结果 注射组血管瘤治疗有效率为97%;口服组血管瘤治疗有效率为93%,组间比较P＞0.05.注射组有1例患儿出现满月脸症状,口服组有27例儿出现满月脸症状,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 口服或血管瘤内注射糖皮质激素均具有较好治疗效果;经局部瘤内注射糖皮质激素较口服糖皮质激素治疗婴儿腮腺血管瘤,具有全身不良反应少的优点,局部亦未见明显严重并发症.     

人骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化条件的优化研究

目的探讨使人骨髓间充质干细胞(MSCs)向成骨细胞诱导分化的高效诱导体系。方法按照不同浓度的地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C分将实验为4组,并设立空白对照组,诱导人骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化,应用碱性磷酸酶钙钴法染色检测分化的成骨细胞的成骨特性。结果在地塞米松10-8mol/L、β-甘油磷酸钠10-2mol/L、维生素C 3×10-4mol/L时,积分光密度值最高。结论 MSCs具备较强的增值能力和良好的成骨特性,可为骨缺损修复技术优化提供基础。     

根管感染中产甲烷古细菌基于 mcrA 序列的系统发育分析

目的：分析根管感染中产甲烷古细菌的多样性,建立基于功能基因--甲基辅酶 M 还原酶（methyl coenzyme M reduc-tase,MCR）基因α亚基（mcrA）的系统发育树。方法：利用一对特异性引物选择性扩增感染根管中产甲烷古细菌的 mcrA 片段,在此基础上建立 mcrA 克隆文库。通过蓝白斑筛选的方法,筛选出阳性重组克隆子,进一步通过基因测序获得重组克隆子中的插入片段 mcrA 序列。利用 Clustalx 和 Mega 4软件包分析 mcrA 序列,对其进行同源性比较和系统发育学分析。结果：4例根管样本的其中1例检出了产甲烷古细菌;构建了基于 mcrA 序列的系统发育树。随机选出的8个 mcrA 克隆片段高度同源,均为类口腔甲烷短杆菌序列型。结论：本例根管感染中产甲烷古细菌的多样性局限于类口腔甲烷短杆菌序列型。     

牙龈卟啉单胞菌FtsZ降解试验模型-clpP基因缺失株的构建

目的 建立牙龈卟啉单胞菌分裂关键蛋白FtsZ （FtsZPg）体内降解试验模型,即构建蛋白酶编码基因clpP缺失的E.coli MG1655.方法 将一段两端含靶基因同源臂的PCR产物电转入L-阿拉伯糖诱导后表达λ噬菌体重组蛋白、具有较强重组能力、含质粒pKD46的菌株E.coli MG1655感受态细胞,以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因.结果 利用氯霉素抗性平板筛选阳性重组体,得到E.coli MG1655的ClpP蛋白酶基因敲除突变株.通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序最终鉴定阳性clpP基因缺失株.结论 本试验成功构建了E.coli MG1655 clpP敲除株;该敲除株有望在探讨重要牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌分裂关键蛋白FtsZPg与蛋白酶clpP的关系中发挥一定作用.     

骨碎补总黄酮对骨质疏松症患者牙槽骨的影响

目的: 研究骨碎补总黄酮对合并牙列缺损或缺失的骨质疏松症患者牙槽骨高度、厚度、骨密度及牙槽嵴顶宽度的影响。方法: 将符合纳入标准的46例患者随机分为实验组和对照组,每组23例,实验组服用强骨胶囊,对照组服用阿仑膦酸钠片;于药物治疗前及治疗后1、3、6个月时分别行锥形束CT（CBCT）检查,应用Anatomage invivo 5软件测量并观察牙槽骨高度、厚度、骨密度及牙槽嵴顶宽度的变化,采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。结果: 对照组牙槽骨颊(唇)侧皮质骨的骨密度在药物治疗后1个月时较实验组显著升高（P<0.05）,实验组牙槽骨的颊（唇）侧皮质骨骨密度在药物治疗后3个月和6个月时均较对照组显著升高（P<0.05）。对照组牙槽嵴顶宽度和牙槽骨的颊（唇）侧皮质骨厚度在药物治疗后3个月较实验组显著升高（P<0.05）,在药物治疗后6个月时,2组间差异无统计学意义（P>0.05）。不同时点实验组和对照组在基骨的颊（唇）侧皮质骨、松质骨、腭（舌）侧皮质骨的厚度变化均无显著差异（P>0.05）。结论: 骨碎补总黄酮能显著增加骨质疏松症患者牙槽骨骨密度,在增加牙槽骨的颊（唇）侧皮质骨的骨密度上较阿仑膦酸钠存在优势;骨碎补总黄酮能增加骨质疏松症患者牙槽骨的颊（唇）侧皮质骨厚度,对牙槽嵴顶宽度、牙槽骨高度影响不大。     

骨质疏松患者骨碱性磷酸酶、钙、磷代谢变化及与牙槽骨骨密度的相关性

目的探究骨质疏松患者血清钙、磷、骨碱性磷酸酶代谢变化及其与牙槽骨骨密度的相关性,以期通过血生化指标了解牙槽骨的代谢状况。方法 46例患者随机分为2组,观察组(强骨胶囊组)和对照组(阿仑膦酸钠片组)各23例,药物治疗前采集静脉血进行血清钙、磷、骨碱性磷酸酶水平检测,并行锥形束CT检查,测量牙槽骨骨密度,药物治疗后6月时重复以上检测和检查,观察血清钙、磷、骨碱性磷酸酶变化情况,分析以上血生化指标与牙槽骨骨密度的相关关系。结果药物治疗前及药物治疗后6月观察组和对照组血清钙、磷及骨碱性磷酸酶变化组间比较均无统计学意义(P0.05)。药物治疗前及药物治疗后6月观察组和对照组血清钙、磷变化与牙槽骨骨密度无统计学相关性(P0.05)。药物治疗前观察组和对照组BALP与牙槽骨颊(唇)侧皮质骨骨密度变化呈负相关(r=-0.440,P0.05;r=-0.419,P0.05),药物治疗后6月两组BALP与牙槽骨颊(唇)侧皮质骨骨密度亦呈负相关(r=-0.642,P0.05;r=-0.442,P0.05)。结论 (1)血清BALP与牙槽骨颊(唇)侧皮质骨BMD呈统计学负相关;(2)强骨胶囊可用以提高合并牙列缺损或缺失的骨质疏松患者牙槽骨骨密度;(3)血清骨碱性磷酸酶可作为评估合并牙列缺损或缺失的骨质疏松患者牙槽骨颊(唇)侧皮质骨骨密度变化的参考指标。     

双歧杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素系统-MazEF的分子进化分析

目的：对双歧杆菌属编码的Ⅱ类毒素-抗毒素（TA）系统MazEF进行分子进化分析。方法：利用PSI-BLAST在NCBI中搜索获得双歧杆菌编码的MazF分子序列,在NCBI蛋白数据库、核酸数据库分别下载其他菌属基因组编码的MazF蛋白序列和本研究所涉及菌属的16 S rRNA序列,应用Clustal X2和MEGA4软件对Maz F做分子进化分析。结果：共搜索到双歧杆菌株染色体编码毒素蛋白MazF 26个。分子进化分析显示：整个双歧杆菌属的MazF保守性不好;MazF与16 S rRNA的共进化仅在个别菌种中发现,大部分MazF的聚类结果与相应菌种16 S rRNA的聚类结果不同。结论：双歧杆菌中的TA系统MazEF可能是通过基因的水平转移整合入基因组中,属于菌株非核心基因组部分。