1α,25(OH)_2D_3对大鼠关节软骨细胞润滑素表达的影响

目的在细胞水平,探讨1α,25(OH)2D3对软骨细胞润滑素合成和分泌的影响。方法使用炎性因子TNF-α对大鼠关节软骨细胞进行炎症干预,分别添加不同剂量1α,25(OH)2D3至正常及炎症状态下的软骨细胞,使用ELISA及Western Blot方法分别检测细胞上清中和细胞内润滑素分泌表达的变化,从而评估1α,25(OH)2D3对大鼠关节软骨细胞润滑素的调节作用。结果 TNF-α可以明显降低细胞活性,以及细胞内和细胞上清液中润滑素的表达分泌。1α,25(OH)2D3可以升高正常软骨细胞以及炎症状态下软骨细胞的活性,但是不能调节正常软骨细胞上清和胞内润滑素的分泌和表达。对于炎症状态的软骨细胞,1α,25(OH)2D3可以明显提高润滑素在细胞上清及细胞内的分泌表达,并有一定剂量依赖性。结论 1α,25(OH)2D3能够促进炎症状态下的软骨细胞润滑素的表达分泌,从而更好的保护软骨表面。     

microCT下钩骨骨内微小动脉三维构筑的临床解剖学研究

目的：获得钩骨内微小动脉三维构筑模型,为钩骨骨折后血供保护提供解剖学基础。方法：将红色氧化铅研磨至40 μm以下,按铅丹和松节油1 g ∶1.5 mL、1 g ∶1 mL和1 g ∶0.5 mL比例混匀制成铅造影剂。3个新鲜上肢肱动脉插管,灌注铅造影剂。钩骨取材,使用microCT扫描钩骨,扫描设置为Binning 1,系统分辨率为high-med,重建设置为Down sample factor 2,图像最终分辨率为27.30 μm。最终获得钩骨周围与钩骨内血管在各个切面的图像,重建形成钩骨内微动脉分支分布的三维构筑。结果：钩骨表面血管分布密集,主要分布在钩骨周围的韧带和肌腱内。钩骨表面主要有4大血管分布区域,分别位于钩骨体掌侧平台、钩骨背侧、钩骨尺侧和钩骨钩顶端。钩骨钩接受了来自钩骨钩顶端、钩骨体掌侧平台和钩骨尺侧动脉网的骨内分支,钩骨体接收了钩骨掌侧平台、钩骨背侧和钩骨尺侧的动脉骨内分支,并且骨内动脉相互吻合。结论：钩骨体和钩骨钩的骨内微小动脉各自存在多个来源并有丰富的吻合,出现缺血性钩骨坏死的概率较小,钩骨钩骨折后骨折不愈可能是由于对线不良等其他原因造成的。     

基于大鼠OVX模型研究雌激素缺乏对终板软骨细胞退变的影响

目的 探究雌激素缺乏对终板软骨细胞退变的影响。方法 选取6月龄大鼠40只,分为两组：双侧卵巢切除实验组(OVX)和假手术对照组(SHAM)。术后9周取材,分别进行软骨终板组织的提取和原代终板软骨细胞的培养。免疫组化实验对比SHAM组和OVX组的软骨终板组织II型胶原(COL-II)的表达情况。倒置相差显微镜和甲苯胺蓝细胞染色观察细胞形态来鉴定终板软骨细胞。CCK-8法对比两组终板软骨细胞的活力情况。罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色观察OVX后终板软骨细胞F-actin的改变情况。细胞免疫荧光检测终板软骨细胞在雌激素缺乏后COL-II的改变情况。RT-qPCR法对比两组的SOX9、ACAN、ADAMTS-5、MMP13和COL-X的表达有无差异。结果 与对照组相比较,OVX组的软骨终板的COL-II蛋白表达减低。终板软骨细胞的形态大多呈多角形和梭形,铺路石样排列。OVX的终板软骨细胞活力降低,细胞骨架更加紊乱,应力纤维增多,迁移能力下降,COL-II表达降低。与对照组相比,OVX组的终板软骨细胞SOX9和ACAN表达降低,MMP13、ADAMTS-5和COL-X表达升高。结论 雌激素缺乏会使...     

力学刺激在椎体软骨终板退变中的作用及机制

终板的重要功能是传递应力和供给营养。终板退变可能会诱发或促进椎间盘退变,引起一系列严重影响人们健康和生活质量的脊柱疾患。终板软骨细胞可以感受力学刺激。力学刺激是影响终板退变的重要因素,不适宜的力学刺激会加速终板退变。本文回顾力学刺激对终板软骨细胞凋亡、合成抑制、钙化及细胞外基质降解诸方面的影响,并总结力学刺激导致椎体终板退变的相关机制。力学刺激诱发的终板退变是由各种信号转导因子构成的复杂信号通路网络精细调节,包括NF-κB、Wnt、Hedgehog、MAPK、RhoA/Rock-1、AKT/mTOR、TGF-β、miRNA相关信号通路。同时,本文对这些通路相互联系进行梳理总结。多个信号通路可以共同作用调节终板软骨细胞代谢,并导致终板退变。本文希望通过相关机制系统回顾,给终板退变早期诊断及针对性治疗带来有益的启示。     

骨质疏松大鼠尾椎局部单次注射辛伐他汀强化骨骼的实验研究

目的 研究骨质疏松大鼠尾椎局部注射辛伐他汀刺激成骨的效果，探索疏松椎体局部给药，重 点强化，预防脆性骨折的治疗方法。方法 36只3月龄雌性SD大鼠双侧卵巢切除后加低钙饮食3 个月，制备大鼠骨质疏松模型。实验大鼠随机分为3组，每组12只，分别在实验大鼠的第5、6、7尾椎 内（C5-C7)单次注射空白载体、辛伐他汀溶液1mg、2mg。分别在术后12天及24天每组随机处死半数大鼠（n=6 )并取材。Micro-CT扫描并定量分析骨组织形态改变、骨生物力学测试研究骨骼力学性能的变化。结果 辛伐他汀局部注射后仅12天辛伐他汀注射组骨微结构参数如骨皮质厚度、骨小梁 密度及连接率明显优于对照组，椎体力学性能明显高于对照组，术后24天效果依然明显。结论 骨质疏松大鼠尾椎单次注射小剂量辛伐他汀（1mg与2 mg)可快速、强效地促进皮质骨形成及骨小梁改 建，改善骨骼微结构，提高骨强度，可作为强化局部、防治椎体骨质疏松骨折的新选择。     

正畸与咬合力作用下大鼠牙槽骨内液体流动的数值模拟

目的研究正畸力和动态咬合力作用下牙槽骨内的液体流动情况,为阐明牙槽骨结构重建的调控机理提供基础数据。方法构建正畸牙齿移动的大鼠动物模型,利用micro-CT技术扫描并三维重建得到牙齿-牙周韧带-牙槽骨整体及第1磨牙近中牙根根尖及颈缘处牙槽骨的真实几何结构。计算正畸力或咬合力作用下牙槽骨的应变分布,并以此为基础,利用流固耦合的数值模拟方法,分析咬合与正畸加载下不同位置处牙槽骨内液体的流动情况。结果正畸及咬合力作用下,牙槽骨内液体流速主要分布在0～10μm/s,流体剪切应力(fluid shear stress,FSS)主要分布在0～10 Pa,高流速及高FSS出现在孔隙内的固液交界面上。根尖处牙槽骨表面FSS水平高于颈缘处牙槽骨。结论正畸力及咬合力的联合作用在牙槽骨不同位置引起不同水平FSS,进而可能刺激牙槽骨骨小梁表面的细胞发生响应,并最终调控牙槽骨结构重建和发生正畸牙移动。研究结果可为牙齿正畸的临床治疗提供理论指导。     

1α,25（OH）2D3调控关节软骨Ⅱ型胶原降解的实验研究

背景背景:维生素D代谢水平与关节炎的关系仍存在争议,且维生素D对关节软骨Ⅱ型胶原代谢的调控机制尚不明晰。深入了解维生素D对骨关节炎软骨代谢的作用,有助于了解骨关节炎的病因及发病机制,为预防、治疗骨关节炎提供参考。目的目的:在细胞水平和组织块水平,探讨维生素D对关节软骨Ⅱ型胶原代谢的调控作用。方法方法:使用炎症因子OSM和TNF-α诱导软骨Ⅱ型胶原降解,对大鼠关节软骨细胞以及牛关节软骨组织块分别进行1α,25(OH)2D3干预,通过ELISA检测细胞上清中Ⅱ型胶原羧基末端肽(CTX-Ⅱ)水平,从而评估维生素D对软骨Ⅱ型胶原代谢的调控作用。结果结果:1α,25(OH)2D3可以提高未经OSM和TNF-α诱导的以及OSM和TNF-α诱导后的软骨细胞的活性。在细胞水平,1α,25(OH)2D3对正常细胞上清中的CTX-Ⅱ的水平没有显著影响。OSM和TNF-α诱导显著增加了细胞上清中CTX-Ⅱ的水平。1α,25(OH)2D干预降低了OSM和TNF-α诱导的软骨细胞上清中CTX-Ⅱ的水平。在组织块水平,对于正常软骨组织块,1α,25(OH)2D3增加了CTX-Ⅱ水平。OSM和TNF-α诱导显著增加了体外培养关节软骨组织块软骨的降解,细胞上清中CTX-Ⅱ水平显著增高。对于OSM和TNF-α诱导的软骨组织块,1α,25(OH)2D3干预降低了软骨组织块Ⅱ胶原的降解,CTX-Ⅱ水平显著降低。结论结论:1α,25(OH)2D3能够抑制OSM和TNF-α诱导的Ⅱ型胶原降解作用。维生素D可能通过抑制关节炎软骨的降解起到保护关节软骨的作用。     

局部单次注射辛伐他汀增强大鼠疏松骨骼内固定强度的实验研究

 目的 探讨疏松骨骼局部注射辛伐他汀对内固定强度的影响及其作用机制。方法 取3月龄雌性SD大鼠24只,切除双侧卵巢制备大鼠骨质疏松模型。3个月后将动物随机分为三组。右侧股骨髁植入钛合金螺钉后于髓腔内分别注射5 mg、10　mg辛伐他汀或空白PBS缓冲液。术后1个月行骨密度测定、螺钉周围骨微结构定量分析,测定螺钉最大载荷,通过免疫组织化学染色观察BMP-2的表达。结果 辛伐他汀5 mg组、10　mg组骨密度分别为(201±23.3)、(207.9±23.5) mg/cm²,与空白PBS缓冲液组(170.8±13.8) mg/cm²比较差异有统计学意义;螺钉骨整合率分别为51.4%±3.0%、52.6%±4.1%,较空白PBS缓冲液组(27.3%±4.9%)增加,螺钉周边各项骨微结构指标均改善,差异有统计学意义;螺钉的最大载荷分别为(161.5±9.4)、(161.9±11.4) N,高于空白PBS缓冲液组(145.7±9.6) N,差异有统计学意义;BMP-2的表达较空白PBS缓冲液组增强。结论 疏松骨骼局部单次注射小剂量辛伐他汀可促进内植物周边的骨整合,增强内固定的稳定性;其作用机制与局部注射辛伐他汀促进BMP-2的高表达有关。     

维生素D与骨关节炎

骨关节炎(OA)是一类以渐进性软骨磨损、骨赘形成为主要特征的退行性疾病。最近的研究认为,OA的发生与进展是多因素的,涉及软骨、关节下骨、滑膜组织、神经肌肉组织等多方面。OA的确切病因和发病机制仍不清楚,尚无法从根本上阻止和治疗。在世界范围内,维生素D缺乏的状况愈发严峻,越来越多的证据显示维生素D与骨关节炎的发病和进展存在密切的联系。本文回顾性地总结与分析维生素D与骨关节炎的相关文献,展示维生素D缺乏的现状,探讨维生素D与骨关节炎之间的关系及其相应的作用机制。     

基因沉默组织型转谷氨酰胺酶抑制SaOS-2细胞成骨分化

目的 研究组织型转谷氨酰胺酶（tissue transglutaminase, TG2）是否参与人SaOS-2细胞系成骨分化过程。方法 使用携带短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）的慢病毒转染SaOS-2细胞以敲减TG2表达，以SaOS-2细胞及转染了含阴性对照shRNA病毒的SaOS-2作为对照组，分别进行体外成骨诱导培养，并进行以下检测：1）诱导14 d后各组矿化情况（茜素红染色），2）诱导4 d、7 d后碱性磷酸酶活性及I型胶原、骨钙素、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）的mRNA表达，并与诱导前的表达水平相比较。结果 SaOS-2细胞组及转染阴性对照shRNA组在体外成骨诱导过程中I型胶原、骨钙素、BMP-2的mRNA表达和ALP活性逐渐增加，14 d时形成明显矿化结节，而TG2敲减后的SaOS-2细胞在诱导14 d时矿化水平显著低于对照组，诱导7 d时ALP活性及I型胶原、骨钙素、BMP-2的mRNA表达水平显著低于对照组。结论 组织型转谷氨酰胺酶参与SaOS-2细胞体外成骨分化及矿化。