TMEM33 mRNA 3′-UTR报告基因载体的构建及功能验证

目的:根据microRNA-146a(miR-146a)预测靶点构建荧光素酶报告基因重组质粒并进行功能验证,为研究吸入性损伤中miR-146a通过靶向跨膜蛋白33(TMEM33)对Toll样受体/核因子-κB(TLRs/NF-κB)信号通路的调控作用提供前期的工作基础。方法:通过生物学软件预测TMEM33mRNA 3′端非翻译区(TMEM33mRNA 3′-UTR)可能是miR-146a的作用靶点,将设计合成的TMEM33及其突变序列TMEM33-mu序列分别克隆至荧光素酶报告质粒,采用脂质体法将这两种重组荧光素酶报告质粒pMIR-TMEM33和pMIR-TMEM33-mu分别与miR146amimics共转染HEK-293T细胞,以pMIR-TMEM33+miR-control转染HEK-293细胞作对照,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。结果:TargetScan和miRanda软件预测显示,miR-146a与TMEM33mRNA 3′-UTR存在互补结合位点,构建的荧光素酶报告质粒经酶切及测序鉴定正确。双荧光素酶报告基因检测系统显示,miR-146a对TMEM33mRNA 3′-UTR具有靶向作用,pMIR-TMEM33+miR146amimics组较pMIR-TMEM33+miR-control组荧光素酶活性降低62%左右,差异具有统计学意义(P<0.01);而miR-146a对TMEM33-mu 3′-UTR无靶向作用,pMIR-TMEM33-mu+miR-146a组与pMIR-TMEM33+miR-control组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建TMEM33mRNA 3′-UTR荧光素酶报告载体,证实miR-146a对TMEM33mRNA 3′-UTR具有靶向调控作用,为从基因水平深入揭示吸入性肺损伤发病机制提供实验室数据和方法。     

胸壁结核性创面外科治疗进展

胸壁结核一般是结核菌侵犯胸壁组织所致,占全身结核的1%～2%,近年来有上升趋势[1]。胸壁结核性创面是肺外结核发展至胸壁皮肤、软组织乃至胸骨而引发的创面,常表现为慢性溃疡或窦道,即形成慢性结核性创面。由于前期无明显全身症状（如长期的低热、盗汗等）,常被其他病症所掩盖,早期诊断较难,漏诊及误诊率极高,导致治疗延误,也会影响局部脏器的功能造成残疾甚至危及生命,加之目前临床治疗手段不统一、不规范、疗效不确定、复发率高等因素,常给患者及家属带来痛苦和危害。本文就胸壁结核性创面的诊治,尤其是外科治疗进展进行综述,以期为今后胸壁结核性创面的临床规范化、系统化治疗提供参考。     

高频超声对腹股沟肿块的诊断与鉴别诊断分析

因腹股沟区解剖结构比较复杂,该区肿块常难以准确触诊,高频超声具有高清晰、分辨率强的特点,能准确显示腹股区肿块的形态、大小、数量、位置、深度,及与男性生殖器官的关系等。彩色多普勒可显示肿块的血供情况,并能及时做出诊断。现将我院于1993年1月-2005年2月对198例腹股沟区肿块的超声诊断情况分析如下。     

微小RNA-155对脂多糖所致小鼠急性肺损伤的干预作用

目的 探讨微小RNA (miR)-155对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤的干预作用.方法 将30只小鼠按照随机数字表法分为LPS致伤组、miR-155抑制组、miR对照组、miR-155增强组、空白对照组5组各6只.LPS致伤组和其他3个处理组麻醉后行气管穿刺给予5μl LPS(浓度为20 μg/μl,4 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,致伤后30 min起,LPS致伤组气管给予生理盐水;miR-155抑制组、miR对照组、miR-155增强组分别气管给予miR-155抑制剂,miR对照剂,miR-155增强剂,空白对照组不做任何处理.24 h后收集各组肺组织:HE染色观察组织形态,绿色荧光染色法检测各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β (IL-1β)的mRNA表达水平,Taqman法检测miR-155抑制组、miR对照组、miR-155增强组中miR-155的表达含量,Western印迹法检测各组环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达,并对数据进行统计学分析.结果 LPS致伤组、miR-155抑制组、miR对照组、miR-155增强组、空白对照组的TNF-α mRNA相对表达量分别为24.49±3.64、38.92±3.40、36.00±3.86、12.56±2.06、1.04 ±0.41;IL-1β mRNA相对表达量分别为55.96±4.87、62.90±6.41、59.99±6.48、25.33±3.50、1.11±0.44,miR-155增强组与LPS致伤组、miR-155抑制组、miR对照组差异均有统计学意义(均P＜ 0.05),而LPS致伤组、miR-155抑制组、miR对照组间差异均无统计学意义;上述5组COX-2蛋白相对表达量的灰度值分别为0.94±0.06、0.96±0.09、0.91 ±0.03、0.79±0.04、0.63±0.07,空白对照组均显著低于其他各组(均P＜0.05).结论 miR-155可有效减弱LPS所致小鼠急性肺损伤炎症反应.     

超声引导下行人工流产清宫术238例观察

在人工流产术,清宫术中单凭妇科医师手感及经验操作,易发生子宫穿孔、漏吸、宫刮不全等并发症。随着现代医学及科学技术的发展,特别是电子计算机的飞速进步,影像医学在临床诊疗疾病过程中发挥着越来越重要的作用,并在治疗选择中具有指导意义。超声监测下行宫腔操作,使其能直观、准确、     

急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征相关微RNA研究进展

微RNA(miRNA)是一组高度保守的长度约22个核苷酸的非编码RNA,通过靶定相应的互补序列导致mRNA的沉默或者抑制翻译以调节基因和蛋白的表达。急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)的发病机制错综复杂,涉及失控性炎症反应、细胞凋亡及肺泡液体清除异常等多个层面,而且各个层面相互影响形成复杂的细胞网络和细胞因子网络,其通过不同的信号转导通路调控机体炎症反应。ALI发病过程中miRNA表达异常,miRNA可通过与靶mRNA部分结合在转录和转录后水平调节靶基因表达,参与ALI的整个发病过程。本文总结了国内外ALI发病过程中相关miRNA的研究进展,旨在寻找和验证miRNA在ALI炎症激活和信号转导途径中的作用,为ALI的诊疗提供新靶点。