Sigma-1受体在小鼠肝缺血再灌注损伤中的表达和作用

目的 研究Sigma-1受体在小鼠肝缺血再灌注损伤中的表达和作用。方法 将20只小鼠随机分为对照组和肝缺血再灌注组,建立小鼠肝缺血再灌注模型。肝缺血再灌注组分别为缺血1 h再灌注6 h、再灌注12 h和再灌注24 h组。实时荧光定量PCR及Western Blot实验分别检测各组小鼠肝组织Sigma-1受体mRNA及蛋白表达水平。进一步研究Sigma-1受体在小鼠肝缺血再灌注损伤中的作用,将20只小鼠随机分为对照组、缺血再灌注组、Sigma-1受体激动剂组、Sigma-1受体激动剂加抑制剂组。建立小鼠肝缺血再灌注模型1 h前,向激动剂组小鼠腹腔注射Sigma-1受体激动剂4-苯基-1-(4-苯丁基)哌啶,激动剂加抑制剂组小鼠腹腔注射激动剂4-苯基-1-(4-苯丁基)哌啶和抑制剂NE-100。再灌注12 h后通过实时荧光定量PCR检测肝组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素（interleukin,IL）-6和IL-10 mRNA表达水平,ELISA法检测血清TNF-α、IL-6和IL-10水平,检测血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）及谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）,苏木精-尹红染色法观察肝组织病理学变化。结果 同对照组比较,缺血1 h再灌注12 h组Sigma-1受体表达水平明显升高(P<0.05)。同肝缺血再灌注组比较,Sigma-1受体激动剂组小鼠肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达水平下降,IL-10 mRNA表达水平升高,血清TNF-α、IL-6水平降低,IL-10水平升高,血清ALT、AST水平降低,肝组织病理学损伤减轻(P<0.05)。Sigma-1受体激动剂加抑制剂组小鼠肝组织TNF-α和IL-6 mRNA表达水平较Sigma-1受体激动剂组升高,IL-10 mRNA表达水平下降。血清TNF-α、IL-6水平升高,IL-10水平降低,血清ALT、AST水平升高,肝组织病理学损伤加重(P<0.05)。结论 在小鼠肝缺血再灌注后,Sigma-1受体表达水平升高,促进Sigma-1受体活化可减轻肝缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制炎症反应有关。     

肝细胞肝癌肝移植受者术后生存及肿瘤复发临床分析

目的比较符合米兰标准和杭州标准的肝细胞肝癌(HCC)肝移植受者术后生存及肿瘤复发情况,分析移植术后生存和肿瘤复发影响因素。 方法回顾性分析青岛大学附属医院器官移植中心2014年2月1日至2018年12月31日符合米兰标准和杭州标准的119例HCC肝移植受者临床资料。符合米兰标准受者79例(米兰标准组),超出米兰标准但符合杭州标准者受者40例(杭州标准组)。所有受者肝移植术后均规律随访,收集受者性别、年龄和手术时间等临床资料。无瘤生存时间以受者移植术后发现肿瘤复发转移为观察终点,累积生存时间以受者移植术后死亡为观察终点。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用log-rank检验比较组间累积生存率和无瘤生存率。采用Cox比例风险模型进行影响累积生存时间和无瘤生存时间的单因素和多因素分析。P<0.05为差异有统计学意义。 结果截至2019年7月31日,119例受者术后中位随访时间为27个月(15～43个月),其中术后因肿瘤复发死亡11例复发转移27例。米兰标准组受者1、3和5年累积生存率分别为98.7%、90.2%和90.2%,杭州标准组分别为97.2%、73.9%和73.9%,差异均无统计学意义(χ²＝0.219、1.598和1.598,P均>0.05)。米兰标准组受者1、3和5年累积无瘤生存率分别为90.3%、82.1%和68.6%,杭州标准组分别为81.6%、56.0%和56.0%,两组受者术后1年和5年累积无瘤生存率差异均无统计学意义(χ²＝1.587和3.707,P均>0.05),3年累积无瘤生存率差异有统计学意义(χ²＝5.543,P<0.05)。多因素分析结果证实术前有无脉管癌栓是影响其累积生存率的独立危险因素,差异有统计学意义(HR＝0.159,P<0.05);术前有无脉管癌栓和病理分化类型是影响无瘤生存的独立危险因素,差异均有统计学意义(HR＝0.338和0.395,P均<0.05)。 结论符合杭州标准的HCC肝移植受者移植术后可获得较好的累积生存率及无瘤生存率,受者术前是否存在脉管癌栓及病理分化程度可以指导移植术后肿瘤复发的预防。     

NF-κB通路在神经母细胞瘤侵袭转移中的作用及机制

目的 以自主建立的有骨髓转移的神经母细胞瘤细胞系(QDDQNM1)为对象,初步探讨NF-κB通路在神经母细胞瘤(NB)转移过程中的作用及其机制.方法 本实验将细胞系(QDDQ-NM1)分为3组,即:肿瘤坏死因子干预组(Ⅰ组)、正常对照组(Ⅱ组)和PDTC干预组(Ⅲ组).利用RT PCR检测NF-κB通路主要蛋白P65 mRNA及其下游蛋白趋化因子受体4(CXCR4) mRNA的表达;Western-blot法检测P65蛋白及CXCR4蛋白的表达;Transwell小室检测各组间瘤细胞的转移侵袭能力.结果 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组P65 mRNA相对含量分别为0.7211±0.2233、0.6002±0.1822和0.5553±0.0904,CXCR4 mRNA相对含量分别为0.4128±0.0176、0.3045±0.1910和0.1829±0.0091,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组P65蛋白相对含量分别为0.9026±0.0375、0.8340±0.0379和0.8007±0.0793,CXCR4蛋白相对含量分别为0.9472±0.0193、0.9091±0.0216和0.6025±0.0384,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).瘤细胞培养48 h后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组中穿过ECM胶的细胞数分别为55.8000±2.7749、46.6000±5.9414和30.2000±7.4967,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NF-κB通路通过调节其下游蛋白CXCR4的表达来增强NB细胞的侵袭能力.通过抑制NF-κB通路来降低NB细胞的侵袭转移能力,有望成为治疗NB的新途径.     

吲哚菁绿试验联合二维剪切波弹性成像技术评估供肝质量价值初探

目的探讨吲哚菁绿(ICG)试验联合二维剪切波弹性成像(2D SWE)技术评估供肝质量的临床价值。 方法回顾性分析2018年5月至2018年11月于青岛大学附属医院器官移植中心完成脑死亡器官捐献的21例供受者临床资料。供肝获取前均于本院ICU完成ICG试验和2D SWE检查。根据受者移植术后早期肝功能恢复情况，将6例发生早期移植物功能不全受者列为观察组，将15例早期肝功能正常受者列为对照组。采用两独立样本t检验比较观察组与对照组受者年龄和移植前末次终末期肝病模型评分以及供肝冷缺血时间、吲哚菁绿15 min滞留率(ICG-R15)、吲哚菁绿血浆清除率(ICG-PDR)和杨氏模量值。采用Wilcoxon符号秩和检验比较两组受者移植前末次Child-Pugh评分和无肝期时间。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价ICG试验、2D SWE及2D SWE联合ICG试验对肝移植受者术后发生早期移植物功能不全的预测效果。P<0.05为差异有统计学意义。 结果观察组和对照组受者平均年龄分别为(38±13)岁和(54±6)岁，差异有统计学意义(t＝2.840，P<0.05)。观察组与对照组供者供肝ICG-R15分别为(5.5±3.0)%和(3.2±1.4)%，差异有统计学意义(t＝－2.386，P<0.05)；ICG-PDR分别为(21±5)%/min和(24±4)%/min，杨氏模量值分别为(5.0±1.3)kPa和(3.9±2.6)kPa，差异均无统计学意义(t＝1.655和－0.930，P均>0.05)。ICG-R15预测肝移植术后发生早期移植物功能不全的ROC曲线下面积为0.767(95%CI：0.490～1.000，P>0.05)，ICG-PDR为0.789(95%CI：0.513～1.000，P<0.05)，2D SWE为0.756(95%CI：0.5392～0.9719，P>0.05)，ICG-R15联合ICG-PDR为0.767(95%CI：0.490～1.000，P>0.05)。ICG-R15及ICG-PDR联合2D SWE预测肝移植术后发生早期移植物功能不全的ROC曲线下面积为0.822(95%CI：0.608～1.000，P<0.05)，最佳阈值为ICG-R15＝4.15%，ICG-PDR＝21.7 %/min，杨氏模量值＝3.00 kPa，敏感度为83.3%，特异度为86.7%。 结论ICG试验联合2D SWE技术对肝移植术后早期移植物功能不全的预测优于2D SWE或ICG试验，且具有无创、简便和可定量评估等优势。     

原发性肝癌术后行肝动脉化疗栓塞治疗对患者生存及肿瘤复发的影响

目的：探讨原发性肝癌术后行肝动脉化疗栓塞（TACE）对患者生存及肿瘤复发的影响。方法：对原发性肝癌行肝部分切除、临床病例资料完整的患者行回顾性分析,分为术后行TACE组（实验组,103例）及未行TACE组（对照组,118例）,分别计算2组患者1年、2年及3年的生存率及肿瘤复发率。结果：2组患者在性别、年龄、HBV感染、分化程度、肿瘤大小、有无血管癌栓及肿瘤TNM分期方面差异均无统计学意义（P〉0.05）,实验组1年、2年及3年的生存率分别为95.1%、65.0%、40.8%,对照组为71.2%、40.7%,21.2%,差异有统计学意义（P〈0.01）,实验组肿瘤1年复发率为22.3%,对照组为40.7%,差异有统计学意义（P〈0.01）,实验组2年、3年的复发率为57.3%、73.8%,对照组为61.9%、78%,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：肝癌术后行TACE可提高患者远期生存率,降低肿瘤的近期复发率。     

肝移植患者术后早期血清总胆汁酸水平对缺血性胆管损伤的预测价值

目的 分析肝移植患者术后早期血清总胆汁酸水平变化,探讨其对肝移植术后早期发生缺血性胆管损伤(ITBL)的预测价值.方法 选取原位肝移植患者92例,根据是否发生ITBL将患者分为ITBL组和非ITBL组,比较两组术后13 d内血清总胆汁酸水平的差异,并绘制ROC曲线分析血清总胆汁酸水平对ITBL发生的预测价值.结果 重复...     

仑伐替尼对肝细胞癌组织中肿瘤相关成纤维细胞自噬和迁移的影响

目的 探讨仑伐替尼对于肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)自噬和迁移的影响。方法 分离并培养HCC患者肿瘤组织中原代CAFs,分别使用等体积的DMSO和46 nmol/L的仑伐替尼处理72 h,分为DMSO组和仑伐替尼组,对两组细胞进行转录组学测序分析和药物靶点组学分析,对差异表达基因和差异表达肽段进行GO功能和KEGG信号通路富集分析;使用透射电镜观察仑伐替尼对CAF自噬的影响,通过Transwell和划痕实验检测仑伐替尼对CAFs迁移能力的影响。结果 DMSO组与仑伐替尼组之间的差异表达基因和差异肽段主要富集在细胞迁移、自噬等相关功能和通路上;透射电镜观察显示,仑伐替尼组CAFs的自噬小体明显多于DMSO组(t=5.376,P<0.05),Transwell和划痕实验结果显示,仑伐替尼组CAFs迁移能力明显弱于DMSO组(t=10.31、14.33,P<0.05)。结论 仑伐替尼可诱导HCC组织中CAFs自噬,并抑制其迁移。     

乙肝肝硬化伴前肌少症患者的代谢组学双平台研究

目的通过代谢组学双平台分析, 揭示乙型肝炎(简称乙肝)肝硬化伴前肌少症患者的代谢特征, 识别潜在的生物标志物, 为营养支持治疗提供方向。方法征集青岛大学附属医院乙肝肝硬化住院患者的临床资料和血样本。通过CT测量第三腰椎横截面的骨骼肌面积, 计算骨骼肌指数。前肌少症的诊断标准:男性骨骼肌指数<46.96, 女性骨骼肌指数<32.46。最终纳入15例乙肝肝硬化伴前肌少症的患者和14例乙肝肝硬化非前肌少症的患者。通过液相色谱-质谱和气相色谱-质谱对血浆进行代谢组学分析。结果液相色谱-质谱和气相色谱-质谱分别富集到5种和28种差异代谢通路, 其中氨基酸相关的代谢通路、尿素循环通路、乙醛酸盐和二羧酸盐代谢通路与乙肝肝硬化肌肉质量减少相关。3-羟基丙醛、苯丙酸、甜菜碱醛、(r)-3-羟基丁酸、磷酸羟基丙酮酸和肌酐的曲线下面积大于0.7, 可以作为乙肝肝硬化伴肌肉重量减少的潜在生物标志物。结论研究筛选出33条紊乱的代谢通路和多种差异代谢物, 绝大多数紊乱的代谢通路与氨基酸代谢、尿素循环和乙醛酸盐和二羧酸盐代谢通路有关。对乙肝肝硬化患者进行差异代谢物筛选, 可以尽早识别前肌少症, 开展营养...