肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立

【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠，为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠。以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用，为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础，更为丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV-C）的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40polyA的转基因载体pTRE-HCV-C．以显微注射的方法将l_153kb的转基因片段注人BALB／C母鼠的受精卵．出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性．再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和胛A基因的另一品系转基因小鼠杂交，得到子代F1小鼠，通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠，以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后，得到子代F1小鼠。特定时问与DOX作用后，小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明，TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠，可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用，为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础．也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。     

运用国产安必平与进口TCT耗材行宫颈液基细胞学检查的检测效果比较

目的对比观察国产安必平与进口TCT耗材行宫颈液基细胞学检查的检测效果。方法选取500例符合条件的患者同时采用两种耗材进行宫颈液基细胞学检查。阳性诊断包括意义不明的不典型鳞状细胞(ASC-US)以上病变。细胞学诊断阳性者,全部在阴道镜下取宫颈组织作病理检查。结果国产安必平与进口TCT耗材阳性率分别为14.4%(72/500)、15.2%(76/500),鳞状上皮内高度以上病变(>HSIL)相同,均为0.8%(4/500);鳞状上皮低度病变(LSIL)分别为3.8%(19/500)、4.0%(20/500),差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用国产安必平与进口TCT耗材行宫颈液基细胞学检查,检测效果大致相同,但国产安必平耗材成本大大降低,值得推广。     

IgA肾病进展中MMP-2、TIMP-2与VEGF的表达变化

目的 探索在IgA肾病进展过程中MMP-2、TIMP-2与VEGF的表达变化、相互关系及其对逐渐进展的肾纤维化的影响.方法 收集60例确诊为IgA肾病的肾穿刺活检标本,将其分为5级,随机选取10例同期的肾小球微小病变作为对照组.利用免疫组化技术和图像分析技术检测病例组与对照组中MMP-2、TIMP-2、VEGF的表达.结果 随着IgA肾病进展,MMP-2和VEGF表达均在早期出现表达增强,随病变发展逐渐下降,TIMP-2表达强度则逐渐增加,MMP-2/TIMP-2的比值亦在短暂上升后出现下降.MMP-2与TIMP-2呈负相关关系,与VEGF呈正相关关系.结论 MMP-2/TIMP-2系统及VEGF的表达变化对于IgA肾病的进展具有重要影响,MMP-2/TIMP-2自然平衡的破坏对于肾纤维化过程具有关键性作用.     

肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立

 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠，为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠。以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用，为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础，更为丙型肝炎病毒核心蛋白（HCV-C）的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40polyA的转基因载体pTRE-HCV-C．以显微注射的方法将l_153kb的转基因片段注人BALB／C母鼠的受精卵．出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性．再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和胛A基因的另一品系转基因小鼠杂交，得到子代F1小鼠，通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠，以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后，得到子代F1小鼠。特定时问与DOX作用后，小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明，TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠，可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用，为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础．也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。     

MMP-2与肾脏疾病

MMP-2是基质金属蛋白酶家族的重要成员之一,可以参与调节生理和病理状态下细胞外基质的合成和代谢平衡,亦可发挥其类细胞生长因子样的作用,调节系膜细胞的增殖与分化.在不同组织类型的肾脏疾病与同一疾病的不同病理发展阶段,MMP-2可发挥不同的致病机制,导致疾病进展.     

nm23,P53,PCNA表达与恶性黑色素瘤浸润及转移的关系

目的：探讨nm23,P53,PCNA表达与恶性黑色素瘤（MM）浸润及转移的关系。方法：应用免疫组织化学LSAB法对30例MM组中nm23,P53,PCNA表达进行研究,分析其与MM浸润范围及淋巴结转移的关系。结果：30例MM组织中原位及浅表浸润型6例,中等及强阳性表达分别为：nm23 4例,P53 3例,PCNA4例;浸润型MM（浸润皮下组织）24例分别nm23 22例,P53 21例,PCNA 22例,伴有淋巴结转移组：nm23 14例,P53 17例,PCNA 17例无淋巴结转移组;nm23 10例,P53 8例,PCNA 9例。结论：nm23,P53,PCNA的高表与MM的侵袭程度相关（P＜0．05）,PCNAP53高表达与MM淋巴结转移相关（P＜0．05）,提示PCNA的中等及强阳性表达在MM的肿瘤细胞增殖及淋巴结转移中起重要作用。     

红花黄色素对阿霉素心肌损伤小鼠缝隙连接蛋白的影响

【目的】探讨红花黄色素对阿霉素心肌损伤模型中缝隙连接蛋白(Cx43)的影响。【方法】选用SPF级昆明小鼠随机分为5组,正常对照组每天腹腔注射生理盐水,其他各组均腹腔注射阿霉素(ADR)3 mg/kg,隔日1次。同时每日给药:模型组腹腔注射生理盐水,中药高、中、低剂量组腹腔注射红花黄色素(剂量分别为10、5、2.5 g·kg-1·d-1)。第15天解剖取小鼠左心室组织,观察各组心肌组织病理变化,采用免疫组织化学法检测心肌Cx43蛋白表达水平。【结果】在阿霉素心肌损伤模型组中,心肌损伤明显,心肌Cx43的表达水平显著降低,与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。中药中、高剂量组对阿霉素心肌损伤具有保护作用,均能显著增加心肌Cx43表达水平(P0.05),而中药低剂量红花黄色素抗阿霉素心肌损伤的作用不明显。【结论】红花黄色素对阿霉素心肌损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与上调心肌缝隙连接蛋白的表达有关。     

桃红四物汤对浸润性乳腺癌Bcl-2、Bax及Ki-67蛋白表达的影响

目的:研究桃红四物汤对乳腺浸润性导管癌病例凋亡蛋白Bcl-2、Bax及细胞增殖核抗原Ki-67表达的影响,探讨其抗癌的可能机制。方法:将本院同期收治的60例浸润性乳腺癌患者分成3组,其中20例为对照组,20例行单纯术前化疗的为化疗组,20例给予术前化疗及桃红四物汤的为复合药物组,用免疫组化检测Ki-67蛋白,用流式细胞仪检测Bcl-2、Bax蛋白,并比较Bcl-2/Bax比值。结果:化疗组及复合药物组Ki-67蛋白表达减少,但不存在组间差异;两组均见Bcl-2蛋白下降,Bax蛋白升高,Bcl-2/Bax比值减小,与对照组对比有显著差异,且复合药物组较化疗组效果更为明显。结论:桃红四物汤联合用药可通过下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白,降低Bcl-2/Bax比值来促进肿瘤细胞凋亡,可能是其抗癌作用的机制之一。     

原发胃B细胞淋巴瘤PIK3CA基因扩增检测及其对AKT通路的影响

目的:检测30例原发胃B细胞淋巴瘤石蜡包埋标本中PIK3CA扩增及蛋白表达,并观察PI3K/AKT通路中AKT激活状况。方法:实时荧光定量PCR检测PIK3CA基因拷贝数,逆转录PCR检测PIK3CA mRNA拷贝数,免疫组化法检测PIK3CA蛋白表达及p-AKTT473的表达水平。结果:30例患者中,11例（36.7%）患者出现PIK3CA基因扩增,其中MALT淋巴瘤2例（28.6%）,套细胞淋巴瘤4例（57.1%）,DLBCL 5例（31.3%）。5例（16.7%）患者出现PIK3CA mRNA基因扩增,8例（26.7%）PIK3CA蛋白阳性表达。PIK3CA基因DNA扩增与PIK3CA蛋白表达之间存在统计学相关性（P=0.007）,但与mRNA扩增无关（P=0.865）。PIK3CA蛋白与磷酸化AKTT473表达之间存在统计学差异（P=0.012）。结论:原发胃B细胞淋巴瘤中存在PIK3CA扩增和蛋白表达,并可能进一步激活下游的AKT分子。