Zeste基因增强子同源物2基因对于人多发性骨髓瘤细胞的影响及其机制

目的研究Zeste基因增强子同源物2(EZH2)在人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226中的作用和分子机制。方法采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测3株人多发性骨髓瘤细胞和20名多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中EZH2的表达水平。以RPMI8226细胞为代表,采用小干扰RNA(siRNA)沉默EZH2基因,蛋白质印迹法(Western blot)检测EZH2沉默后RPMI8226细胞中EZH2的表达水平,RT-qPCR法检测EZH2的mRNA表达水平,确定基因沉默的效果。EZH2沉默组分别设置对照组(Control)、siRNA阴性对照组(siRNA-NC)和EZH2 siRNA组(siRNA-EZH2)。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期的改变及凋亡水平,Transwell小室法检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡抑制蛋白(Survivin)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3/7(Caspase-3/7)、基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)的表达水平。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA),并用Bonferoni校正的t检验进行组间两两比较。结果3株人多发性骨髓瘤细胞中EZH2的表达水平显著高于正常人骨髓细胞(分别为0.38±0.08、0.25±0.05、0.22±0.06和0.12±0.03),而多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中EZH2的水平也显著高于正常人骨髓细胞的水平(4.25±0.85比0.15±0.05)。在EZH2沉默的实验中发现siRNA-EZH2组的细胞活力显著低于Control组细胞(0.02±0.01比0.41±0.01)。siRNA-EZH2组细胞S期的比例为(10.22±3.21)%,显著低于Control组细胞[(52.31±3.33)%,t=16.310,P<0.01],差异有统计学意义。siRNA-EZH2组细胞存活率为(49.15±2.11)%,显著低于Control组细胞[(98.22±1.22)%]。siRNA-EZH2组细胞侵袭能力相比Control组显著降低(106.78±5.62比358.63±7.90),且siRNA-EZH2组细胞中Survivin、MMP-2/9的蛋白水平显著低于Control组(分别为0.86±0.12比2.15±0.15、3.61±0.07比1.06±0.02和2.24±0.11比0.47±0.08),Caspase-3/Caspase-7的水平显著高于Control组(分别为2.98±0.03比0.67±0.04和1.96±0.24比0.42±0.02)。结论EZH2在人多发性骨髓瘤中高表达,其作用与增强人多发性骨髓瘤细胞生长、抗凋亡、促侵袭有关。     

微创截骨手术方案对内侧间室膝关节骨关节炎患者的疗效及满意度的影响

目的探讨微创截骨手术方案对内侧间室膝关节骨关节炎(KOA)患者疗效及满意度的影响。方法研究对象选取该院2016年1月-2017年6月收治的内侧间室KOA患者共140例,以随机数字表法分为对照组(70例)和试验组(70例),分别采用常规截骨手术和关节镜下截骨手术治疗;比较两组术后满意度、手术前后内侧间隙、外翻角、WOMAC评分、Lysholm评分、血清基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)水平及术后并发症发生率。结果两组术后满意度比较,差异无统计学意义(P0.05);两组术后内侧间隙和外翻角比较,差异无统计学意义(P0.05);试验组术后WOMAC和Lysholm评分均明显优于对照组和术前(P 0.05);试验组术后血清MMP-1和MMP-3水平均明显低于对照组和术前(P 0.05);同时两组早期膝关节无力发生率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论微创截骨手术方案治疗内侧间室KOA能够有效缓解相关症状,改善肢体活动功能,且有助于降低血清MMPs水平,价值优于常规截骨手术方案。     

日柏醇通过内质网应激途径诱导软骨肉瘤细胞凋亡的体外研究

摘 要：［目的］ 探索日柏醇体外杀伤软骨肉瘤细胞系SW1353的疗效及可能涉及的作用机制。［方法］ 不同浓度日柏醇处理软骨肉瘤细胞后,根据MTS实验绘制细胞杀伤曲线;以Hoechst染色观察细胞凋亡细胞核形态改变。流式细胞术行凋亡双染检测明确凋亡分布情况。通过装载ER Tracker探针荧光显微镜下观察内质网应激状态下细胞内质网肿胀情况。透射电镜观察细胞内质网肿胀的亚显微结构。Western blot分析内质网应激及凋亡相关蛋白表达的改变。通过应用内质网选择性通路抑制剂Salubrinal反向验证PERK-eIF2α信号通路在治疗中所起作用。［结果］ 日柏醇体外诱导软骨肉瘤细胞凋亡,并且呈浓度梯度及时间梯度依赖。日柏醇诱导软骨肉瘤细胞发生内质网应激,出现内质网肿胀。Western blot检测到内质网应激时PERK-eIF2α相关信号通路分子蛋白表达改变,活化Caspase cascade级联反应,活化凋亡效应蛋白cleaved PARP,诱导细胞发生凋亡。使用eIF2α选择性抑制剂能明显阻断日柏醇诱导软骨肉瘤细胞凋亡作用。［结论］ 日柏醇在体外诱导软骨肉瘤细胞发生内质网应激,激活未折叠蛋白反应,进而通过激活PERK-eIF2α信号通路,最终启动Caspase cascade级联反应,诱导软骨肉瘤细胞凋亡。