粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抑制氟尿嘧啶诱导的胃癌细胞凋亡增强耐药性的实验研究

目的通过检测粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）对氟尿嘧啶（5-FU）诱导后胃癌细胞凋亡的影响,初步探讨GM-CSF参与胃癌细胞耐药性的相关机制。 方法体外培养胃癌SGC7901细胞,MTT法检测5-FU作用于胃癌细胞的半致死剂量;将GM-CSF添加到5-FU处理的胃癌细胞中,MTT法和平板克隆实验检测其对细胞活性和克隆增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达差异。 结果5-FU对胃癌细胞的半致死剂量为（16±0.4）mg/L。5-FU对胃癌细胞的活性和增殖能力有明显的抑制作用,GM-CSF能有效减弱5-FU的抑制效果（P<0.05）。5-FU能显著诱导胃癌细胞凋亡,Bax/Bcl-2比值显著升高,而加入GM-CSF后,5-FU诱导的凋亡被抵抗,Bax/Bcl-2比值升高趋势被抑制（P<0.05）。 结论GM-CSF能够促进胃癌细胞增殖并有效抑制5-FU诱导的胃癌细胞凋亡,在增强胃癌细胞化疗耐药性方面具有重要作用。     

黄芪多糖对X射线辐射所致BMSCs全基因组低甲基化的防护作用

目的 研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对多次X线电离辐射(ionizing radiation,IR)所致骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)全基因组甲基化水平的影响。方法 采用APS作用于5次每次2 Gy X射线辐射的BMSCs,将BMSCs分为对照组、APS组、IR组和APS+IR组。采用胞质分裂阻断法测定微核形成率;细胞染色体核型分析检测细胞核损伤;EPIGENTEK试剂盒检测各组BMSCs全基因组甲基化程度;Westernblotting检测各组BMSCs甲基转移酶DNMT3a、DNMT3b,甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)、甲基化CpG结合域蛋白2(MBD2)和各组BMSCs癌基因c-Myc、H-ras,抑癌基因P53、P16的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,IR组微核数目和染色体畸变明显增加(P<0.01),BMSCs全基因组甲基化程度明显降低(P<0.01);与IR组比较,APS+IR组微核数目和染色体畸变减少(P<0.05),BMSCs全基因组甲基化程度升高(P<0.01)。在蛋白表达上,与对照组比较,IR组DNMT3a和MeCP2均明显降低(P<0.01),c-Myc、H-ras的表达明显升高,P53、P16的表达显著降低(P<0.01);与IR组比较,APS+IR组DNMT3a和MeCP2明显升高(P<0.01或P<0.05),c-Myc、H-ras的表达降低(P<0.01),P53、P16的表达显著升高(P<0.01)。结论 黄芪多糖能够防治多次X线辐射所致BMSCs全基因组甲基化水平,降低BMSCs的恶化风险。     

基于数字图像处理的初级纤毛定量分析

初级纤毛是一种由微管构成并突起于细胞表面的细胞器。初级纤毛的结构在某些疾病中会发生改变,特别对肿瘤的发生发展具有重要的影响。基于显微影响,分析初级纤毛的形态结构,有助于相关疾病的研究和诊断。传统分析方法主要采用Photoshop软件画线量取其长度指标,因此存在准确度低、重复性差、分析效率低等问题。本研究结合数字图像处理技术,应用色彩分离技术,将细胞与初级纤毛有效分离;并对比分析中值滤波、均值滤波、Sobel、Roberts、Prewitt、Log算子多种算法对初级纤毛形态边缘的保持效果,选取Prewitt、Log算子,改进并提升边界提取效果;再利用最大类间方差法去除杂质;最后通过连通域标记获得每个初级纤毛的周长与面积参数。与传统方法对比,本研究方法测量初级纤毛结构参数的时间由50~80 min减少为2 s,相对误差ω提高了19.08%以上,达到了快速精确测量的目的。     

当归多糖防护X线辐射对大鼠肝脏损伤的研究

目的研究当归多糖对X线辐射所致大鼠肝脏损伤的防护作用。方法将40只雄性SD大鼠常规饲养14 d后随机分为对照组,模型组,当归多糖高、中、低剂量(254、127、63.5 mg/kg)组,药物组ig给予不同质量浓度的当归多糖,对照组和模型组ig给予等量蒸馏水,每日1次,每次2 m L,连续给药7 d,从第8天起,除对照组外其余各组大鼠均用X线仪进行全身照射,连续照射2 d,辐射总剂量为6.0 Gy,末次照射后72 h股动脉采血并处死大鼠。检测血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)的活性,以及肝脏组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及过氧化脂(LPO)的量;HE染色观察肝脏组织的形态变化;Western blotting法检测大鼠肝脏组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中AST、ALT的活性升高,MDA和LPO量明显升高,SOD和GSH-Px活性明显降低,Nrf2蛋白表达上调(P0.05);HE染色可见肝细胞核缩小、部分消失以及肝细胞浆空泡样变性。与模型组比较,当归多糖高、中、低剂量组大鼠血清中AST、ALT活性降低,肝脏组织中MDA和LPO量降低、SOD和GSH-Px活性增加,Nrf2蛋白表达下调(P0.05),HE染色可见肝细胞核萎缩以及细胞浆空泡样变性减轻。结论当归多糖对X线辐射导致SD大鼠的肝脏损伤具有保护作用,可能是通过减少肝脏组织中自由基的形成,并提高肝脏组织对自由基的清除能力实现的。     

黄芪皂苷对X线诱发骨髓间充质干细胞的基因损伤的保护作用

目的 研究黄芪皂苷(AS)对X线辐照骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖水平影响及其诱发DNA损伤的保护作用.方法 将细胞分为4组:空白组、AS组(50μg·mL-1 AS)、辐射组、辐射+AS组(50μg·mL-1 AS).药物干预3 d后,辐射组、辐射+AS组用2 Gy X线进行照射.用CCK-8法检测各组细胞的增殖...     

基于循环血miRNAs评估空间铁离子辐射暴露的新方法

目的寻找具有作为空间铁离子辐射生物标志物潜力的循环血microRNAs(miRNAs)分子,并探索基于这些分子的辐射暴露风险评估新方法。方法利用重离子加速器产生的高能铁离子束对小鼠进行全身照射,通过定制miRNA PCR array芯片检测了13种辐射相关的循环血miRNAs表达水平,筛选出4种miRNAs作为候选标志物进行验证。利用实时定量PCR技术检测了候选miRNAs在铁离子束照射下的剂量效应和时间效应关系。此外,利用多元线性回归的方法建立了结合4种辐射敏感miRNAs预测辐射暴露程度的数学模型,并通过受试者工作特征曲线对模型准确性进行了评估。结果铁离子束照射后,循环血中miR-21a、miR-200b表达水平上调,miR-574、miR-342表达水平下调,且具有较强的剂量效应关系,在6～72h内,其表达差异能稳定维持。结合4种候选miRNAs建立的多元线性回归方程在预测不同程度的辐射暴露方面具有很好的特异性和敏感性。结论循环血辐射敏感miRNAs具有作为空间铁离子辐射生物标志物的潜力,而基于这些循环血miRNAs的多元线性回归模型可应用于评估空间辐射暴露风险。     

归芪白术方对放射性脾损伤大鼠的防护作用

目的 探讨中药复方归芪白术方对大鼠放射性脾损伤的防护作用机制.方法 用随机数字表法将大鼠分为3组:正常组、模型组和实验组,每组13只.用6 Gy X线全身照射制作大鼠放射性脾损伤模型.造模前14 d,实验组给予归芪白术方8.4 g·kg-1灌胃,正常组和模型组给予等量的生理盐水灌胃,1次/天.在照射后3d动物取材,苏木...     

蛇床子素对模拟微重力引起的骨质流失的防治作用

目的研究蛇床子素对模拟微重力导致大鼠骨质流失的防治作用。方法将Wistar大鼠随机分为3组:对照组(Ctrl)、尾吊组(HLS)、尾吊给药组(OST)。4周后取后肢骨用双能骨密度仪及万能试验机分别测量各组股骨骨密度及生物力学,并通过micro CT分析骨小梁参数;用Van Gieson(VG)染色观察胫骨形态变化。通过qRT-PCR检测胫骨骨保护素(OPG)和核因子-κB受体激活剂配体(RANKL)mRNA表达水平。用ELISA试剂盒检测血清中骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OCN)和抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)的含量变化。结果与对照组相比,尾吊组大鼠股骨骨密度及生物力学参数显著降低(P0.05),与尾吊组相比,尾吊给药组骨密度及生物力学显著上升(P0.05);尾吊组骨小梁体积分数(BV/TV)、厚度(Tb.Th)显著降低(P0.01),间距(Tb.Sp)显著升高(P0.01),尾吊给药后BV/TV、Tb.Th及Tb.Sp显著降低(P0.01);VG染色观察尾吊组胫骨骨小梁间隙变大,数量减少,而尾吊给药组骨小梁骨髓腔减少,数量增多;尾吊组血清BALP和OCN浓度显著降低(P0.05),TRACP-5b浓度显著升高(P0.05),当给予蛇床子素后,BALP浓度显著升高(P0.05),而TRACP-5b浓度显著降低(P0.05);尾吊组胫骨OPG/RANKL比值显著降低(P0.05),尾吊给药后,OPG/RANKL比值显著升高(P0.05)。结论蛇床子素可通过促进骨形成和抑制骨吸收两方面有效防治模拟微重力导致的骨质流失。     

黄芪不同有效成分对电离辐射致BMSCs DNA损伤防护作用的比较研究

目的:比较黄芪不同有效成分对电离辐射致人骨髓间充质干细胞(BMSCs)DNA损伤的防护作用。方法:采用2 Gy X射线直接辐照BMSCs建立辐射细胞模型。采用CCK-8法检测不同质量浓度(25、50、75、100μg/m L)黄芪多糖、黄芪皂苷、黄芪黄酮辐射前干预1 d+辐射后干预1～5 d对辐射BMSCs增殖的影响,筛选给药浓度和辐射后继续干预时间。将辐射BMSCs分为辐射组、黄芪多糖组、黄芪皂苷组、黄芪黄酮组,后3组辐射前后均使用适宜的相应药物进行干预,另设空白组进行比较;采用胞浆分裂阻滞微核法检测辐射后干预适宜时间的微核细胞率和细胞微核率,免疫荧光法检测辐射后干预适宜时间细胞中53BP1焦点簇数量,并对不同时间点(0.5、2、12、24 h)的53BP1焦点簇数量进行比较。结果:与空白组比较,辐射组BMSCs的OD值显著降低(P<0.05或P<0.01);与辐射组比较,50μg/m L黄芪多糖、黄芪皂苷、黄芪黄酮继续干预2～3 d时BMSCs的OD值均显著升高,其余剂量组仅部分时间点有显著差异(P<0.05或P<0.01);综合考虑确定给药浓度为50μg/...