生长分化因子5在小鼠肢体骨骼发育中的表达规律

目的:检测生长分化因子5在小鼠肢芽组织的表达,分析该基因在肢体骨骼发育中的表达变化,从而进一步认识生长分化因子5基因在肢体发育过程中的作用。方法:实验于2005-05/07在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。选取清洁级2～3月龄昆明种小鼠30只,雌性20只,雄性10只,于每天下午6时按雌雄2∶1合笼,次日晨8时取出,查见阴道栓者定为孕期第0.5天。分别在胚胎11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d颈椎脱臼处死孕鼠,无菌条件下分离出胚胎,解剖显微镜下用眼科剪取肢芽组织备用。分别采用反转录聚合酶链反应和Westernblotting免疫印迹法检测生长分化因子5在小鼠胚胎发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果:①小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5mRNA的表达:孕11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d胚胎肢芽组织均可见一条219bp的生长分化因子5特异扩增条带,其与β-actin吸光度的比值分别为0.521±0.023,1.210±0.014,1.221±0.008,0.556±0.014,0.510±0.019。孕12.5d和孕13.5d生长分化因子5mRNA的相对含量与孕11.5,14.5,15.5d相比有极显著性差异(P<0.01)。②小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5蛋白的表达规律:孕11.5,12.5,13.5,14.5,15.5d胚胎肢芽组织均观察到相对分子质量为13700的蛋白条带,其与β-actin蛋白吸光度的比值分别为0.589±0.021,1.103±0.124,1.112±0.041,0.601±0.015,0.552±0.006。孕12.5d和孕13.5d生长分化因子5mRNA的相对含量与孕11.5,14.5,15.5d相比有极显著性差异(P<0.01)。结论:生长分化因子5mRNA及其蛋白表达的变化趋势一致,在小鼠肢体骨骼发育早期阶段持续表达,孕12.5d和孕13.5d呈高表达,继而减弱。表明生长分化因子5是肢体骨骼发育早期的一个关键因子,在小鼠肢体骨骼发育和关节形成中具有重要作用。     

重组小鼠pcDNA3.1(+)/GDF-5真核表达质粒的构建及其意义

根据基因库中小鼠生长分化因子-5（GDF-5）序列设计并合成引物，提取孕14d小鼠胚胎肢芽组织总RNA，行RT—PCR扩增，将扩增产物GDF-5基因片断插入至pcDNA3．1（＋）载体并转化大肠杆菌DH5α，提取重组质粒，酶切鉴定及测序。结果：DNA琼脂糖凝胶电泳和双酶切均显示出一长约1603bp的带；测序结果与基因库中的序列完全相同。认为重组小鼠pcDNA3．1（＋）／GDF-5真核表达质粒构建成功，为进一步研究其在软骨发育中的作用奠定了基础。     

生长分化因子5在小鼠肢体骨骼发育中的表达规律

目的：检测生长分化因子5在小鼠肢芽组织的表达，分析该基因在肢体骨骼发育中的表达变化，从而进一步认识生长分化因子5基因在肢体发育过程中的作用。方法：实验于2005-05／07在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。选取清洁级2—3月龄昆明种小鼠30只，雌性20只，雄性10只，于每天下午6时按雌雄2：1合笼，次日展8时取出，查见阴道栓者定为孕期第0．5天。分别在胚胎11．5，12．5，13．5，14．5，15．5d颈椎脱臼处死孕鼠，无菌条件下分离出胚胎，解剖显微镜下用眼科剪取肢芽组织备用。分别采用反转录聚合酶链反应和Western blotting免疫印迹法检测生长分化因子5在小鼠胚胎发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果：①小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5mRNA的表达：孕11．5，12．5,13．5，14．5，15．5d胚胎肢芽组织均可见一条219bp的生长分化因子5特异扩增条带，其与β-actin吸光度的比值分别为0．521&;#177;0．023，1．210&;#177;0．014．1．221&;#177;0．008，0．556&;#177;0．014，0．510&;#177;0．019。孕12．5d和孕13．5d生长分化因子5 mRNA的相对含量与孕11．5，14．5，15．5d相比有极显著性差异（P〈0．01）。②小鼠胚胎肢芽组织生长分化因子5蛋白的表达规律：孕11．5，12．5，13．5，14．5：15．5d胚胎肢芽组织均观察到相对分子质量为13700的蛋白条带，其与β-actin蛋白吸光度的比值分别为0．589&;#177;．021，1．103&;#177;0．124，1．112&;#177;0．041，0．601&;#177;0．015，0．552&;#177;0．006。孕12．5d和孕13．5d生长分化因子5mRNA的相对含量与孕11．5，14．5．15．5d相比有极显著性差异（P〈0．01）。结论：生长分化因子5mRNA及其蛋白表达的变化趋势一致，在小鼠肢体骨骼发育早期阶段持续表达，孕12．5d和孕13．5d呈高表达，继而减弱。表明生长分化因子5是肢体骨骼发育早期的一个关键因子，在小鼠肢体骨骼发育和关节形成中具有重要作用。     

GDF-5在大鼠肢体早期发育中的表达规律与作用

目的 研究生长分化因子-5（GDF-5）在大鼠肢体早期发育过程中的表达规律，探讨GDF-5调控肢体发育的相关机制。方法 采用半定量RT-PCR和Westernblotting分别检测GDF-5在大鼠胚胎早期发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果 大鼠胚胎肢体发育的早期阶段GDF-5mRNA呈持续表达，其中在胚胎13、14d（E13、E14）呈高表达，继而表达减弱，GDF-5蛋白表达规律与mRNA变化趋势一致。结论 GDF-5在大鼠胚胎早期肢体发育中对调控软骨发育和关节形成有很重要的作用。     

软骨分化形成蛋白-2体外诱导小鼠骨髓基质干细胞向软骨分化

目的 研究软骨分化形成蛋白-2(CDMP-2)对小鼠骨髓基质干细胞软骨分化的作用.方法 体外培养小鼠骨髓基质干细胞(MSCs),贴壁细胞传代,取第3代细胞,以不同浓度(0、10、20、50、100 ng/ml)CDMP-2因子干预培养14d后,倒置相差显微镜观察细胞形态,RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测不同浓度CDMP-2对Ⅱ型胶原表达的影响,阿尔辛蓝(Alcian)染色蛋白多糖.结果 RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学显示经CDMP-2因子干预后,MSCs有Ⅱ型胶原mRNA和蛋白的表达,呈剂量依赖性;Alcian染色结果显示CDMP-2诱导细胞分泌蛋白多糖基质,高浓度组可见细胞小结区域呈明显的异染性.结论 CDMP-2能够在体外定向诱导小鼠骨髓基质于细胞向软骨方向分化,50～100 ng/ml为最佳剂量,为进一步探讨其在软骨发育机制中的作用提供了实验基础.     

钛合金支撑架结合自体骨和DBM治疗股骨头坏死

【目的】探讨空心钛合金支架植入结合自体松质骨和脱钙骨基质（DBM）治疗成人股骨头坏死初步疗效。【方法】采用经大转子下通过股骨颈钻隧道至股骨头骨坏死区，将装有自体松质骨和DBM的空心钛合金支架经隧道置入骨坏死区直至软骨下骨约5mm处，髓道远端用自体髂骨填塞。【结果】经临床应用13例。15个髋关节，随访14-36个月，并按成人股骨头缺血性坏死疗效百分评价法进行评价，优良率为93．3％。【结论】空心钛合金支架植入结合自体松质骨和DBM治疗成人股骨头坏死具有以下优点：（1）手术操作简单，不破坏患者股骨头本身的血液供应，创伤小。（2）将具有骨诱导活性的DBM直接放入骨坏死区，成骨作用强。（3）增加股骨头负重区软骨下骨的机械支撑，降低局部应力，有利于股骨头坏死的修复及重建。     

GDF-5在小鼠肢体骨骼发育中表达规律的研究(英文)

目的研究GDF-5在小鼠肢体骨骼发育中的表达规律,探讨肢体发育的相关机制。方法采用RT-PCR和Western blotting分别检测GDF-5在小鼠胚胎发育过程中肢芽组织mRNA和蛋白表达的变化。结果小鼠肢体骨骼发育的早期阶段GDF-5mRNA持续表达,E11.5天肢芽组织刚刚形成时有少量表达,E12.5和13.5天呈高表达,继而表达减弱,E12.5和13.5天GDF-GDF-5mRNA的相对含量与其余3天相比有极显著性差异(P<0.01),GDF-5蛋白表达规律与mRNA变化趋势相一致。结论GDF-5在小鼠肢体骨髂发育和关节形成中有很重要的作用。