两株牛肝菌内生真菌的分离鉴定及活性初步研究

目的 从牛肝菌中分离内生真菌,并对其活性进行初步研究.方法 采用组织培养法从秦巴山区牛肝菌子实体中分离内生真菌,基于形态特征及ITS系统发育分析对内生真菌进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌为指示菌,检测内生真菌发酵产物的抑菌活性,并对其绿豆芽的抑制活性进行了研究.结果 分离获得2株内生真菌L3和L5,L3和黄瘤孢菌(Hypompces chrysosperums)序列同源性为99％;L5和毛霉属序列同源性为100％;两株菌的形态学特征分别与黄瘤孢菌和毛霉属形态特征一致.结论 内生真菌L3和L5,分别鉴定为黄孢瘤菌和毛霉属;这两株菌发酵液对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,对绿豆芽生长均具有抑制作用.     

3种猪苓营养菌丝酯酶和过氧化物酶的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)对3种猪苓营养菌丝中的酯酶(EST)与过氧化物酶(POD)的同工酶进行了分析.结果表明,3种猪苓营养菌丝的酯酶同工酶和过氧化物酶同工酶活性相近.酯酶同工酶共显一种谱型,5条谱带,Rf值集中在0.22～0.78间;过氧化物酶同工酶共显3种谱型,酶谱条带数在4～9条间,P.umbellatus LBZ,P.umbellatus LBJ,P.umbellatus LBT的过氧化物酶酶谱条带数依次为8条,4条,9条,Rf值集中在0.08～0.69间.聚类分析显示,P.umbellatus LBJ较其他2种猪苓亲缘关系较远,P.umbellatus LBZ和P.umbellatus LBT亲缘关系较近.     

猪苓多糖超声提取工艺条件优化

采用超声提取方法研究了猪苓茵核多糖提取的优化工艺条件.结果表明,在超声功率为100W时,其最佳提取条件为60℃,料液比为1 g:30 mL,pH值为7.0,提取时间为40 min,P.umbellatus LBZ多糖的量为20.3 mg/g.与常规的沸水浴提取法比较,超声提取能显著提高猪苓多糖含量、缩短提取时间、减小料液比和降低提取温度.     

应用UV-X-IP分析酿酒酵母HSF和靶DNA的相互作用

利用紫外激光交联和免疫沉淀技术(UV laser crosslinking and immunoprecipitation, UV-X-IP)分析原核表达的酿酒酵母热激因子(heat shock factors,HSFs)和片段化的基因组靶DNA的相互作用.分别在ScSSA1、ScSSA4启动子区和编码区设计引物对免疫沉淀的DNA 进行PCR分析.结果发现,紫外激光交联和免疫沉淀DNA库中富集了ScSSA1、ScSSA4启动子区HSF结合的DNA片段,而没有编码区DNA,表明HSF特异结合了靶DNA.从未经紫外激光交联样品的免疫沉淀DNA库中未获得相应PCR扩增产物,说明紫外激光在酿酒酵母HSF与靶DNA之间形成共价结合中起重要作用.