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基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
基于质粒载体的转基因小鼠突变研究模型的建立黎怀星,李建秀,杨桦,胡以平,王肖鹏,傅继粱(上海第二军医大学生物教研室200433华西医科大学分子生物学研究室成都610041)本研究拟建立一个以LacI作为诱变靶基因,pSPORTI(4.1kb)作为载体... 相似文献
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目的 建立一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的突变机理的实验模型。方法 以脂质体转染法将线性化的pMCLacI/Neo质粒导入NIH3T3细胞,用G418筛选,造反一个药物抗性细胞克隆进行扩增,用基因组Southern杂交,RT-PCR及RT-PCR Southern杂交进行了分子鉴定。结果 (1)在此细胞克隆的基因组中整合有pMCLacI/Neo质粒;(2)该质粒上的两个lacI靶 相似文献
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目的:观察三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)患者痛支神经的有髓纤维脱髓鞘处是否有河豚毒素不敏感型(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)hNav1.8通道蛋白的异常表达,探讨其与三叉神经痛的关系.方法:以6例原发性TN第三支痛经保守治疗无效行手术治疗患者的下牙槽神经为研究对象,以舌颌颈联合根治术患者的耳大神经、下牙槽神经为阴性和正常对照,以鼠脊神经为阳性对照,运用免疫组化的方法观察hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支神经与对照神经标本超微结构中的表达.结果:hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支神经的有髓纤维脱髓鞘处有大量表达,鼠脊神经轴突内有少量表达,而正常下牙槽神经及耳大神经中无表达.结论:hNav1.8通道蛋白在TN患者痛支有髓纤维脱髓鞘处的异常表达可能与TN的发病有关. 相似文献
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小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:设计小鼠Retn基因特异性的siRNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些siRNAs的表达质粒,以便为在体外研究Retn基因的功能打下基础.方法:(1)设计并合成小鼠Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段,并克隆到pSilencerEM1.0-Neo载体;(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能稳定表达相应siRNAs的一组3T3-L1细胞克隆;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用RT-PCR分析这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平.结果:设计并构建了4个小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达质粒,并证明其中的2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的siRNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内Retn基因的mRNA水平.结论:本研究设计并构建出的小鼠Retn基因特异性的siRNAs表达载体,所表达的siRNAs具有较强的RNA干涉功能,为Retn基因的功能研究奠定了实验基础. 相似文献
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目的:构建2个分别由p53基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒,并探讨其用于检测遗传毒性化学物质的可行性.方法:通过PCR扩增人p53基因启动子片段,然后采用重组DNA技术克隆入pGL3-BASIC的荧光素酶报告基因的上游而获得phP53-luc表达质粒.用脂质体转染法将phP53-luc转染入NIH 3T3细胞并分别用5-氟尿嘧啶(5-FU)处理,最后裂解细胞用Dual-Luciferase Reporter Assay System检测荧光素酶报告基因表达.结果:构建了2个分别由p53基因启动子和核心启动子驱动的荧光素酶报告基因表达质粒,位于这2个质粒上的荧光素酶报告基因在NIH 3T3细胞内的表达显著地受遗传毒性化学物质的诱导,其表达比对照的pGL3-BASIC载体上的荧光素酶报告基因高近240倍.结论:基于人p53基因启动子的荧光素酶报告基因分析系统可以用于快速检测环境毒物的遗传毒性. 相似文献
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红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤的保护作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨红景天苷对疲劳小鼠氧化损伤保护作用的机制。方法:32只昆明种雄性小鼠按体质量随机分为正常对照组、红景天苷组、运动组及红景天苷+运动组。红景天苷组及红景天苷牟运动组小鼠予红景天苷180mg/(kg·d)灌胃给药,正常对照组及运动组予相同体积[0.02mL/(g·d)]蒸馏水灌胃,连续灌胃15d。末次给药后30min,运动组及红景天苷+运动组小鼠无负重游泳120min。游泳后立即取材,全自动生化仪检测血浆乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)及肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase—myocardial band isoenzyme,CK—MB)活性;采用试剂盒检测肝组织匀浆中过氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH—Px)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;电子显微镜观察心肌和骨骼肌超微结构变化。结果:与不运动比较,长时间运动可明显提高小鼠血浆LDH、CK、CK—MB活性(P〈0.01,P〈0.05),而红景天苷可降低小鼠血浆CK及CK—MB活性(P〈0.05,P〈0.01);红景天苷与长时间运动有交互作用,红景天苷可拮抗长时间运动导致的血浆LDH、CK及CK—MB活性升高(P〈0.05)。与不运动比较,长时间运动可显著降低小鼠血浆SOD及GSH—Px活性(P〈0.01),升高小鼠血浆MDA含量(P〈0.01);红景天苷可明显升高小鼠血浆SOD及GSH—Px活性(P〈0.01,P〈0.05),显著降低小鼠血浆MDA含量(P〈0.01);红景天苷可拮抗长时间运动导致的小鼠血浆SOD活性降低(P〈0.05)。电子显微镜结果表明长时间耐力运动后骨骼肌和心肌出现明显的损伤,运动组小鼠骨骼肌及心肌超微结构损伤较红景天苷+运动组明显。结论:红景天苷对运动所导致的氧化损伤具有一定的保护作用。 相似文献
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基于pSPORTl质粒的转基因小鼠家系的建立 总被引:3,自引:3,他引:3
目的:建立在基因组中整合有pSPORT1质粒的转基因小鼠家系,为体内基因突变研究提供有效的动物模型。方法和结果:将2594个经显微注射pSPORT1质粒DNA的小鼠受精卵分别移入103只受体母鼠的输卵管中,共产下237只仔鼠,采用PCR、PCR-Southern和基因组Southern杂交三级筛选法鉴定仔鼠。最后选择8只体质健壮,并经Southern杂交证实在基因组中pSPORT质粒结构完整的小鼠 相似文献
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蒋 《四川大学学报(医学版)》1999,30(2)
作者以β-萘黄酮诱导FL细胞表达细胞色素P450同工酶系,利用穿梭质粒pWB1研究了黄曲霉B1和苯并(α)芘在人新生儿羊膜上皮FL细胞中的诱变作用。结果:均以比自发突变频率(7.61×10-6)高两个数量级(10-4)的频率,检出了黄曲霉B1和苯并(α)芘诱发的SupF基因突变子,其中黄曲霉素B1表现了明显的剂量效应,从而为穿梭质粒pWB1结合β-萘黄酮诱导FL细胞表达细胞色素P450同工酶系在FL细胞内检测间接致癌物的可行性提供了证据。 相似文献