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1.
一种新的抗辐射性相关蛋白AAl2和CHKl相互作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究AAl2蛋白与CHKl蛋白的相互作用。方法:用在大肠杆菌中表达纯化的AAl2(LG21)蛋白制备多克隆抗体,Western印迹检测抗体的特异性;用自制的抗体在A1-5和B4细胞中进行了免疫共沉淀实验;同时将AAl2与Chkl基因克隆入酵母双杂交载体中,将重组质粒导入酵母菌AH109中,检测报告基因的表达情况。结果:Western印迹结果表明该抗体可以与AAl2蛋白特异结合;并用免疫共沉淀实验验证了从12蛋白与CHKl蛋白在哺乳动物细胞体内的相互作用。同时用酵母双杂交实验验证了AAl2蛋白与CHKl蛋白在酵母体内的相互作用,β-半乳糖苷酶活性分析和α-半乳糖苷酶活性分析结果均为阳性。结论:AAl2蛋白和CHKI蛋白之间存在相互作用,此结果为进一步研究新基因AAl2的功能奠定了基础。 相似文献
2.
乳腺癌易感基因BRCAl在乳腺癌发生、发展中起着重要作用。在其C-末段有两个串联重复的BRCT(BRCTl和BRCT2)结构域。它们与BRCAl的重要功能密切相关,BRCT结构域还存在于其它50多种蛋白中。本文用PCR方法扩增了BRCTl和BRCT2结构域编码序列,并将其以正确相位与pGEX—2T载体中的GST编码序列融合,构建成重组质粒pGST—BRCTl和PGST—BRCT2。将这两种重组质粒分别转化E.coli DH5α后,分别表达了GST—BRCTl和GST—BRCT2两种融合蛋白。Western blot检测结果表明,两种融合蛋白均能与GST抗体反应。表达的GST—BRCTl和GST—BRCT1经GST—Sepharose 4B亲和层析获得了纯化的融合蛋白,为BRCT结构域及其相关蛋白功能研究提供了有用的材料。 相似文献
3.
4.
5.
抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选 总被引:1,自引:2,他引:1
目的: 获得前列腺癌的噬菌体呈现型单链抗体库,筛选与前列腺癌特异结合的抗体,为前列腺癌的诊断和治疗奠定基础. 方法: 用两种恶性程度较高的前列腺癌细胞PC3,DU145膜蛋白混合物免疫Balb/c小鼠.取脾脏提取总RNA,用RT-PCR分别扩增抗体重、轻链可变区基因(VH和VL), 经Linker连接形成ScFv基因片段,将ScFv基因片段与噬菌粒载体pCANTAB 5E的连接产物转化大肠杆菌TG1.用辅助噬菌体M13KO7进行超感染,获得重组噬菌体抗体.以恶性程度低的前列腺癌细胞LNCap为对照,用PC3细胞对重组噬菌体抗体库进行五轮筛选后,随机挑取克隆,经phage-ELISA筛选特异性结合PC3细胞的ScFv.结果: 用所构建的库容量为3.5×106的单链抗体库筛选特异结合抗体,得到一个与PC3细胞特异结合的噬菌体-单链抗体.结论: 本研究所构建的抗体库中可筛选到与前列腺癌细胞结合特异性较好的抗体,可用于前列腺癌的诊断和治疗中. 相似文献
6.
目的 探讨曲古抑菌素A对乙型肝炎病毒HBx蛋白与组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)相互作用的影响. 方法 常规分子克隆技术构建HBx蛋白及HDAC1表达载体,Western blot分别验证蛋白质表达;谷胱甘肽转移酶沉降试验及免疫共沉淀技术分别于体内外验证HBx蛋白与HDAC1存在的相互作用. 结果成功构建了HBx蛋白及HDAC1表达载体,体内外实验均证实HBx蛋白与HDACI间存在相互作用,但HDACI抑制剂曲古抑菌素A不影响两者间相互作用.结论 HBx蛋白以曲古抑菌素A非依赖方式与HDAC1存在相互作用. 相似文献
7.
末端脱氧核苷酸转移酶(以下简称TdT)能催化脱氧核苷三磷酸在寡聚或多聚脱氧核苷酸以及DNA的3′—OH端的聚合反应,不需要模板。TdT是遗传工程试验中的重要工具酶之一,利用这种酶在一条DNA分子的3′—OH端加上一个同聚物, 相似文献
8.
目的:从幽门螺杆菌(Hp)分离热休克蛋白A基因,并实现在大肠杆菌中的融合分泌表达,方法:提取Hp染色体DNA,用PCR方法扩增hspA基因。经克隆、测序后,构建融合分泌表达载体pMAL-HspA,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达。结果:分离得到了高度保守的354bp的hspA基因片段,并在大肠杆菌中实现了该基因的融合分泌表达。在37℃诱导表达3h后,基融合分泌表达蛋白可占细菌周质总蛋白的66.6%。 相似文献
9.
快速密度梯度离心法纯化质粒DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
密度梯度离心法纯化质粒DNA是一种广泛应用的方法。经典的等密度离心法采用自成型梯度,离心时间需要48~60h。本文采用预成型两级梯度离心法,加大相对离心力,只需5h离心,就达到了纯化目的。该法纯化后的质粒DNA产量,OD_(260)与OD_(280)比值、电泳结果均与48h经典离心法的纯化效果无明显差别。 相似文献
10.