利用粘附式细胞仪测定培养巨噬细胞内pH值

用ｐＨ值敏感荧光探针Ｓｎａｆｌｃａｌｃｅｉｎ－ＡＭ标记体外培养４８小时的小鼠腹腔巨噬细胞，５７０型粘附式细胞仪观察巨噬细胞在对刀豆素Ａ进行受体介导内吞过程中细胞内ｐＨ值的变化。结果显示，开始内吞后细胞内ｐＨ值即降低，内吞进行到第５分钟细胞内ｐＨ值降到最低，在此后的６分钟内均维持于这一较低水平。本法灵敏度高，简便快捷，适用范围广，可无损伤观察活细胞或细胞器ｐＨ值的变化。     

利用激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞呼吸爆发

用过氧化物和超氧化物荧光探针ＤＣＦＨ－ＤＡ标记巨噬细胞后，在激光扫描共聚焦显微镜下，用最适发射波长为５３０ｎｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，结果显示：检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，经ＰＭＡ作用后，巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度增强，而且各细胞增强的幅度不同。表明：通过检测ＤＣＦＨ－ＤＡ荧光强度变化可原位实时观察单个或多个活细胞内呼吸爆发     

受体介导内吞引起的巨噬细胞膜磷脂流动性的改变

用光敏感磷脂荧光探针NBD－C6－HPC和FRAP（FluorescenceRecoveryAfterPhotobleaching）技术，测量了刀豆素A（ConA）、麦芽凝集素（WGA）、酵母多糖（Z．A）3种配体刺激前后巨噬细胞膜磷脂扩散系数及荧光恢复率的变化．结果显示，静息状态下膜磷脂的扩散系数D＝（11．37±1．22）×10－10cm2／s，荧光恢复率R＝86．2±7．7（％，漂白后200s）；3种配体刺激30min后，膜磷脂扩散系数和荧光恢复率（漂白后200s）分别为D＝（3．24±1．38）×10-10，R＝80.5±9．5（ConA）；D＝（5．30±1．55）×10－10，R＝50．9±9．8（WGA）;D＝（1．45±1．4）×10－10，R＝56.4±8．7（Z.A）．膜磷脂扩散系数的降低，与配体-受体复合体流动性的降低相关．     

寻常型银屑病受累表皮细胞在增殖与终末分化中DNA量的变化

我们已应用吖啶橙标记组织切片细胞DNA通过粘附式细胞仪(ACAS570)测试了正常人表皮细胞DNA在各层中的变化犤1犦,现采用同样的方法对银屑病受累表皮各层细胞DNA含量、浓度、分布范围等作了初步的测试,试图揭示银屑病表皮细胞在增殖分化各阶段中DNA的异常变化规律。     

动脉粥样硬化发病机制的生物电学说

本学说是根据血成分和动脉壁相互作用的生物电原理。在正常生理条件下,动脉内皮细胞由于粘多糖的硫酸基而带很强的负电。在生理pH(7.4)时,血细胞和蛋白质也带负电。这样就引起相互排斥,使血流畅通。在肺活量减少引起慢性低氧的条件下,血液pH降低,因而血成分的负电荷减少了。pH值的急剧降低,引起主要是高分子量纤维蛋白原、低密度和极低密度脂蛋白的电荷中和和血管内沉积。钙离子和蛋白质正离子的存在也有利于这种不溶性大分子复合物的形成。钙离子和蛋白质正离子是由应激引起的刺激从血小板中释放的或从一些食品(例如牛、羊肉)中摄取的。然而,只要动脉壁的粘多糖能被释出,随后与钙离子和蛋白质正离子结合,并将低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白及纤维蛋白原释放回血液循环中,则这些复合物就不会形成斑块。动脉粥样硬化斑块初发于动脉壁上失去保护性负电荷的地方(在此处粘多糖仍共价地与胶原纤维结合)。缺少抗氧化剂维生素C和E时,由于过氧化反应导致低密度脂蛋白-胆固醇同蛋白质及粘多糖交联,更有助于斑块的增大。根据这个学说,动脉粥样硬化可以通过下列方法预防:高效肺通气和吸入富有负离子的空气,以保持血液合适的pH值;摄入维生素C和E以抑制过氧化反应;食用富有负电荷的食物(例如,各种各样的果胶,洋葱和大蒜)来补偿动脉负电荷的损失。     

虎杖甙可引起腹腔巨噬细胞膜部分去极化

应用亲脂性阴离子荧光染料DiBAC4（3）标记小鼠腹腔巨噬细胞，以粘附式细胞仪观察虎杖甙对腹腔巨噬细胞膜电位的影响。结果：10mg／L虎杖甙并不能引起细胞内荧光强度的明显改变，而50mg／L及100mg／L虎杖甙可使细胞内荧光强度明显增强。结论：一定浓度的虎杖甙能引起腹腔巨噬细胞细胞荧光值升高即膜的部分去极化。     

荧光探针Fluo-3/AM和FuraRed 测量单细胞中比率钙

应用ACAS570激光扫描共聚焦显微镜（laserscanningconfocalmicroscope,LSCM简称共焦显微镜）和钙离子指示剂Fluo－3／AM、FuraRed荧光探剂双标记技术,测定了单个活细胞内比率钙的动态变化。结果显示37℃,Fluo－3／AM浓度10μmol／L,FuraRed浓度10μmol／L的条件下,昆明小鼠巨噬细胞负载1h左右即可获良好的标记效果。用比率探针测量细胞内Ca~2＋的动态变化,使Ca~2＋的定性定量测定不受染料浓度、细胞大小、照射光强度以及一定程度的光漂白和染料泄漏等因素的影响,提供了一种准确定性定量细胞内Ca~2＋的实时、动态、原位变化的新方法。     

Concanavalin A-induced changes in lysosomal morphology of macrophages under confocal microscope

Macrophageshavehighphagocytoticcapacityfordifferentmaterials-Thephagocytosedparticles[lreflnallydeliveredtolysosomeswhichwerecellu-l[lr`llgestiveorganelles.Lysosomesaregenera1ly;l>>umedtohaveaninternalpHof4-O-5.5de-l)enClingonprotonpumpsL',,].ThisissupportedbytileobservationthatmanylysosomalenzymeshaveanacldicpHoptimumforactivityL'.'J.However,xvIlenmacrophagesarestimulatedbyligands,thel}sosomalpHischanged.Inthepresentstudy,wen1easuredthelysosomalpHofthelivingn1acrophages,observedthelysoso…     

利用共焦镜检测凋亡早期巨噬细胞内pH的变化

用激光扫描共聚焦显微镜（ACAS570）和pH荧光探针SNARF－1／AM实时检测地塞米松处理巨噬细胞胞浆pH的动态变化。结果显示，加入地塞米松，巨噬细胞炮装发生快速、短期碱化，随后脑浆pH值缓慢降低。结果表明，胞浆酸化是细胞凋亡发展的必然过程，胞浆碱化则很可能与细胞凋亡的发生相关。     

凋亡淋巴细胞细胞器变化的电镜观察

凋亡淋巴细胞细胞器变化的电镜观察黄行许朴英杰鲍永耀霍霞乔东访（第一军医大学中心实验室）通常认为凋亡细胞内细胞器变化不明显。我们用透射电镜和Ｇｏｍｏｒｉ法观察了按３ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射放线菌酮４ｈ后，体重１８０～２００ｇ的雌性ＳＤ大鼠胸腺、脾脏和肠系...