人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探

目的构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用。方法将人MEPEcDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱（camptothecin,CPT）处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性。结果经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高。结论成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础。     

人细胞外基质磷酸糖蛋白MEPE的表达纯化及抗体制备

目的 原核表达、纯化人细胞外基质磷酸糖蛋白(Mepe)基因,并制备多克隆抗体.方法 设计出扩增人Mepe全长基因的特异引物,通过PCR扩增出该基因片段,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-KG中,以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;用纯化的蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western印迹鉴定抗体的特异性.结果 原核表达了人Mepe全长基因,纯化了MEPE蛋白,并获得了抗MEPE的多克隆抗体,抗体效价达到1∶25 600,Western印迹结果显示,该抗血清能够特异识别原核及真核细胞表达的MEPE蛋白.结论 MEPE蛋白能够诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础.     

尤瑞克林防治蛛网膜下腔出血迟发性脑血管痉挛的临床研究

目的研讨蛛网膜下腔出血(sa H)患者接受尤瑞克林治疗对防治迟发性脑血管痉挛(dc Vs)的临床价值。方法以我院收治的50例sa H患者为观察对象并随机分组,Ⅰ组按常规疗法处理,Ⅱ组在常规处理下施加尤瑞克林治疗,观察分析两组对dc Vs的防治情况。结果Ⅱ组在施治后发生dc Vs的概率为4.0%,与Ⅰ组的24.0%相比,差异显著(P0.05)。治疗前,两组检测VMca,检测值相比,差异不显著(P0.05);治疗后,Ⅱ组的VMca检测值相比Ⅰ组更接近于正常值,比较差异显著(P0.05)。两组的Hunt-Hess分级结果相比,差异不显著(P0.05)。结论对sa H患者施加尤瑞克林治疗,能够有效预防dc Vs的发生,且对脑血流速度有一定的改善作用,值得推荐。     

短暂性全面遗忘症13例临床分析

<正>短暂性全面遗忘症是一种临床上比较少见的,主要发生于中老年人群的椎基底动脉系统的短暂性脑缺血发作。我院自2000年1月～2009年1月共收治13例短暂性全面遗忘症,现报告如下。1临床资料1.1一般资料:本组13例患者,男8例,女5例,年龄43～78岁,平均62.5岁。合并高血压病者8例,合并冠心病5例,     

脑桥出血致一个半综合征1例报告

1 病历摘要 患者男,38岁.因头晕、复视、右上肢麻木2h于2004年8月1日入院.既往高血压病史5年,查体:Bp220/140mmHg(1mmHg=0.133kPa),神志清醒,讲话流利,双侧眼睑无下垂,双瞳等大同圆,对光反射存在.     

出血性脑梗死32例临床分析

出血性脑梗死（HI）系指脑梗死后由于梗死区血流再通而发生颅内出血。常发生于累及皮层的大、中等面积的脑梗死,以往多为病理性诊断,随着CT、MR的广泛应用,HI已能得到及时的诊断和治疗,临床上并非少见,病死率也较高[1]。现将我院1997年1月至2009年1月收治的32例HI患者总结分析,报告如下。