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目的构建编码肿瘤相关抗原MART-1融合基因的原核表达载体,在大肠埃希菌中表达His-MART-1融合蛋白,并对蛋白进行纯化和免疫原性鉴定。方法采用PCR法扩增编码MART-1的基因片段,将该基因片段克隆到含有His标签的pET-28b原核表达载体上,重组质粒经双酶切、PCR及测序鉴定正确后转化大肠埃希菌,IPTG诱导融合蛋白表达,用镍离子亲和层析法纯化融合蛋白并进行脱盐,SDS-PAGE电泳和Western blotting法鉴定。通过ELISA法检测经树突状细胞提呈后的His-MART-1融合蛋白对特异性CD4+T细胞的刺激作用。结果重组质粒经双酶切、PCR和测序鉴定证明载体构建成功。His-MART-1融合蛋白经表达纯化后,分子量约13kD,与预期值相符。Western blotting证实该融合蛋白可与抗His单克隆抗体发生特异性结合。His-MART-1融合蛋白经树突状细胞提呈后能刺激MART-1特异性CD4+T细胞分泌IFN-γ。结论成功构建了编码MART-1基因原核表达载体pET-28b-MART-1,表达及纯化获得该融合蛋白,并证实其具有良好的免疫原性。 相似文献
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目的 建立便捷的鼠疫菌文献数据库系统,从而提高文献利用效率.方法 运用EndNote X5文献管理软件进行文献收集整理,通过Perl及PHP等计算机语言规范数据格式、构建实体关系模型、搭建系统和开发网页;选择中小型网站开发中常用的Apache+PHP+MySQL组合进行动态网站的开发.结果与结论 构建了鼠疫菌文献数据库(访问地址:http://101.201.51.148/ypkd/).该文献数据库可供用户快速检索、浏览并获取鼠疫菌相关文献和著作全文,并提供自动更新的鼠疫菌新闻资讯.该数据库具有前沿性和完整性,为鼠疫菌相关科研及鼠疫疫情的预防控制提供了知识保障,并为其他重要病原文献数据库的建立提供了参考模型. 相似文献
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