动态种植法提高在去细胞猪瓣支架上种植内皮细胞效率和均匀性的研究

目的:尝试使用简单的动态种植方法来提高内皮细胞在去细胞牛心包支架上的种植效率和均匀性,以更有效地构建组织工程瓣膜.方法:采用胰酶-去垢剂法制备去细胞牛心包. 内皮细胞以下列方式在去细胞牛心包支架进行种植和培养: ①振荡种植振荡培养(OO);②振荡种植静止培养(OS);③静止种植静止培养(SS). 定期取样品进行电镜、组织学检测及细胞计数分析. 结果:细胞加入24 h后振荡种植的样品比静止种植的样品细胞在支架内分布更为均匀,同时振荡种植的样品细胞贴壁率[ (36±3) %]高于静止种植的样品细胞贴壁率[(21±2)%, P<0.05]. 振荡种植振荡培养的样品在培养过程中细胞脱离支架而死亡,因此放弃了这些样品的继续培养. 振荡种植静止培养的样品和静止种植静止培养的样品细胞一直保持正常的伸展状态. 在培养过程中支架上的活细胞总数振荡种植静止培养的样品一直高于静止种植静止培养的样品. 结论:采取振荡种植的方式种植细胞可明显提高内皮细胞在三维支架上种植的效率和分布均匀性.     

不同浓度硫化氢托马斯液心脏保存效果的实验研究

目的探讨含有各种浓度硫化氢(H2S)的HST(H2S St.Thom asⅡsolutions)液对大鼠离体心脏的保存作用。方法将32只SD大鼠随机平均分为4组,分别用托马斯(St.Thom asⅡsolutions,STH)液(Ⅰ组)、含4×10-2mmol/L NaHS的HST液(Ⅱ组)、含4×10-1mmol/L NaHS的HST液(Ⅲ组)和含4mmol/L NaHS的HST液(Ⅳ组)对心脏进行保存。采用Langendorff心脏灌注和工作模型装置进行心脏功能测定,比较6 h后心功能恢复率以及能量变化、心肌含水量,观察心肌超微结构改变。结果心脏保存6 h后,Ⅳ组左心室功能损伤严重,Ⅱ、Ⅲ组左心室功能损伤较轻,其中Ⅲ组最轻。Ⅲ组冠状动脉流量(CF)恢复率较Ⅰ、Ⅳ组好;Ⅰ组心肌中ATP、乳酸(LD)、糖原含量及心肌含水量与其它3组比较,差异有统计学意义;Ⅳ组心脏复跳时间较Ⅰ组为长;心肌超微结构Ⅲ组损伤最轻;Ⅲ组心肌保存良好。结论HST保存液对大鼠心脏的保存在6 h内有明显的保护作用,效果优于STH液;含4×10-1mmol/L NaHS的HST液保存效果较好,而高浓度H2S对心肌有损害作用。     

不同试剂脱除猪主动脉瓣细胞的对比研究

目的 用不同方法去除猪主动脉瓣的细胞并比较效果，为组织工程瓣膜提供良好的实验材料。方法 采用十二烷基硫酸钠（SDS）、脱氧胆酯酸钠（SD）、曲拉通（Triton）X-100制备猪主动脉瓣脱细胞基质。标本进行大体、光镜、电镜观察，DNA提取、力学性能的检测并比较。结果 SD无法完全脱除主动脉瓣瓣根内的细胞。TritonX-100和SDS可以完全脱除瓣膜细胞。TritonX-100较好的保持了主动脉瓣胶原纤维和弹性纤维的原有排列和分布，并有较好的力学性能。而SDS对瓣叶和瓣根血管壁中的纤维支架都造成了一定的损伤。SDS和TritonX-100脱细胞时间无明显差别。结论 TritonX-100可以成功脱除猪主动脉瓣细胞，并较好的保持了主动脉瓣的结构和力学性能。     

不同手术方法治疗先天性主动脉瓣上狭窄的临床研究

目的：探讨先天性主动脉瓣上狭窄外科纠治的手术适应证选择、不同手术方法的近、中期疗效。方法：回顾性分析西京医院2005年2月至2020年2月先天性主动脉瓣上狭窄外科治疗病例27例,年龄1.4～13.5y（4.1±3.2）,合并染色体异常（Williams综合征）19例（70.4%）。术前主动脉瓣上峰值压差45～98(72.3±13.4)mmHg,其中。其中局限型24例(88.9%),弥漫型3例(11.1%)。主动脉瓣不同程度增厚24例,瓣窦发育不均衡9例,合并少量或微量主动脉瓣反流5例,无主动脉瓣狭窄。合并左、右肺动脉分支狭窄9例。手术均在中低温体外循环下实施,采用单片（McGoon）法7例(25.9%),双片(Doty)法11例(40.7%),三片法9例(33.3%),其中Brom法4例,Myers法5例。肺动脉狭窄同期补片加宽纠治。结果：全组无住院死亡。术后主动脉瓣上峰值压差14～54(21.6±8.4)mmHg,其中单片组20～54(30.6±11.9)mmHg,双片组14～23(19.3±2.9)mmHg,三片组14～22(17.6±2.5)mmHg,单片组与其他两组差异明显（p?0.01）,双片组与三片组无明显差异（p?0.05）。主动脉瓣少量反流2例,微量6例。随访21例,失访6例,随访3月～11年（平均3.7年）,主动脉瓣上峰值压差17～46(24.1±7.4)mmHg,其中单片组26～46(33.4±10.5)mmHg,双片组19～31(22.3±2.7)mmHg,三片组17～26(19.1±2.1)mmHg,单片组与其他两组差异明显（p?0.01）,双片组与三片组无明显差异（p?0.05）。无远期死亡和再次手术干预。主动脉瓣少量反流4例,微量7例。结论：手术纠治先天性主动脉瓣上狭窄是安全的,近、远期疗效满意。双片和三片法手术疗效无明显差异,但均优于单片法,应作为首选手术方法。     

胸部爆炸伤致肺损伤的机制研究

目的:研究原发和继发因素在胸部爆炸伤后肺损伤中的作用。方法:应用兔胸部爆炸伤模型检测伤后肺功能改变,观察肺损伤伤情,检测BALF中IL-6、IL-8、TNF-α和肺组织NFκBP65和p38MAPKmRNA表达,并进行相关分析。结果:100%的家兔发生肺冲击伤,56.7%碎片伤;胸片示两肺纹理增粗、模糊;伤后PaO2、Pa(A-a)O2、SaO2明显下降,肺含水量增加;IL-6、IL-8和TNF-α含量明显升高(P<0.05或P<0.01);肺组织NFκBP65、p38MAPKmRNA表达阳性。NFκBP65、p38MAPKmRNA表达与PaO2、Pa(A-a)O2、IL-6、TNFα水平正相关(P<0.05)。结论:胸部爆炸伤时冲击波和高能碎片引起肺原发损伤,继发因素肺组织p38 MAPK、NFκB P65和IL-6、IL-8和TNFα加重肺功能损害。     

环氧氯丙烷处理对瓣膜组织结构及表面性状的影响

目的 通过研究环氧氯丙烷（ECH）处理对瓣膜组织结构及表面性状的影响，探究ECH处理生物瓣膜后防钙化的机制。方法 通过测定ECH处理瓣膜组织的抗酶消化能力、茚三酮值、热皱缩温度，以及血浆蛋白吸附实验、血小板黏附实验评价ECH处理瓣膜组织的表面性状。结果 经ECH处理后，抗酶消化能力增加，茚三酮值下降，热皱缩温度升高（P〈0．01），且对血浆蛋白和血小板的黏附减少，表面性状改善。结论 ECH处理能够增加瓣膜组织的交联，且改善瓣膜的表面性状，是ECH处理瓣膜组织防钙化、防衰坏的机制之一。     

严格血糖控制对瓣膜置换术后脏器功能及预后的影响

目的 观察严格血糖控制对体外循环下瓣膜置换术后脏器功能以及预后的影响.方法 245例瓣膜置换术病人作为强化治疗组从手术开始即行强化胰岛素治疗,将血糖严格控制于3.9-8.3mmol/L;并以早期265例血糖控制在10.0-11.1 mmol/L的常规治疗病人作为对照.瓣膜置换术后检测病人的肝、肾功能并进行心脏功能评估,同时记录呼吸机辅助通气时间、ICU停留时间、术后住院天数、院内感染病死率.结果 两组病例的一般情况无明显差异.强化治疗组术后峰值谷丙转氨酶>80 U/L、谷草转氨酶>80U/L、肌酐>221 umol/L及尿素氮>19.3 mmol/L的病人例数明显减少,与常规治疗组比差异有统计学意义,并明显缩短了呼吸机辅助通气时间和术后住院天数(P<0.05);ICU停留时间虽有所减少,院内感染率和病死率有所下降,但差异无统计学意义.结论 瓣膜置换手术中严格血糖控制可显著改善病人术后的肝、肾功能及缩短呼吸机辅助通气时间和术后住院天数,改善预后.     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨胰岛素对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响 .方法　体外进行大鼠血管平滑肌细胞的培养 ,以 5～ 10代细胞为实验对象 ,随机分成空白对照组和胰岛素组 ,胰岛素组又按浓度 1× 10 - 9、1× 10 - 8、1× 10 - 7和 1× 10 - 6 mol· L- 1分为 4小组 ,在加药后 2 4 h、4 8h和 72 h用 MTT法分析细胞增殖活力 ,免疫细胞化学观察细胞核增殖抗原 (PCNA)的表达 ,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的 d UTP缺口末端标记法检测 H2 O2 诱导的细胞凋亡 .结果　加药 4 8h后 ,1× 10 - 9mol· L- 1胰岛素组的 MMT A值 (0 .4 2± 0 .0 4 )高于空白组(0 .30± 0 .0 2 ) ,P<0 .0 5 ,低于 1× 10 - 6 mol· L- 1 胰岛素组(0 .5 2± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ;1× 10 - 9mol·L- 1胰岛素作用 4 8h后细胞的 MMT A值比空白组增加 4 0 % ,高于 2 4 h细胞的MMT A值增加率 (2 7% ) ,P<0 . 0 5 ;1× 10 - 9～ 1× 10 - 6mol· L- 1 胰岛素作用 4 8h后细胞 PCNA的表达率 (5 0 %～80 % )均高于空白对照组的 (30 % ) P<0 .0 5 ;加药 2 4 h后 ,1× 10 - 6 mol· L- 1胰岛素组细胞凋亡率 (30 % )低于空白组(70 % ) P<0 .0 5 .结论　胰岛素有明显促 VSMC(vascularsmooth m uscle cells)增殖的作用 ,并且这种作用时间和浓度依赖性 ;同时胰岛素     

内皮祖细胞和去细胞猪主动脉瓣构建组织工程瓣膜的研究

目的将内皮祖细胞(EPCs)诱导分化为内皮细胞后种植在去细胞猪主动脉瓣膜(APV)上,以期为组织工程瓣膜(TEHV)的研制提供一个新的思路。方法采用去垢剂联合胰蛋白酶法去除猪主动脉瓣膜细胞。采用密度梯度离心法从羊骨髓中分离出EPCs,并诱导分化后,免疫组织化学染色鉴定。将诱导分化得到内皮细胞种植到APV上。采用光镜和电镜检测猪主动脉瓣膜的去细胞效果。对内皮细胞在APV上的生长效果进行观察。结果猪主动脉瓣内的细胞完全去除。EPCs经定向诱导后,具有表达CD-31,CD-34,von Willebrand因子等内皮细胞特征。诱导分化后的EPCs可以在APV表面黏附生长,并且表达CD-31和yon Willebrand因子。结论EPCs可以定向诱导分化为内皮细胞并可以在APV上种植生长。     

bFGF对犬隐静脉间质细胞体外培养细胞内钙及钙化的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对作为组织工程瓣间质种子细胞的犬隐静脉间质细胞（SVICs）,体外培养细胞内钙及钙化的影响。方法:分离培养犬隐静脉间质细胞,以免疫组织化学方法鉴定其特征。将36代传代细胞分为2组:对照组,细胞在正常标准条件下培养;bFGF组,细胞在含5μg/L浓度bFGF条件下培养。2周后激光共聚焦显微镜检测细胞内钙,流式细胞仪检测细胞凋亡率,原子吸收法测定细胞层钙沉积及von kossa染色。结果:犬隐静脉间质细胞主要由平滑肌细胞、肌纤维母细胞和成纤维细胞组成。培养2周后,对照组有细胞结节形成,bFGF组细胞呈极性密集生长,无明显细胞结节形成。对照组von kossa染色呈弱阳性,bFGF组阴性。对照组细胞内游离钙浓度相对比值高于bFGF组（45±3vs19±7,P<0.01）,bFGF组细胞凋亡率及细胞层钙沉积显著低于对照组[（7.6%±0.88%vs25.4%±1.68%,P<0.01;0.192±0.024μmol/gvs2.198±0.173μmol/g,P<0.01）]。结论:bFGF具有维持犬隐静脉间质细胞内游离钙的平衡,抑制细胞凋亡及钙化的作用。