用PCR插入突变法扩增和克隆HIV—env282肽基因

本文报道借助于微机分析设计并合成了2个引物,通过聚合酶链反应插入突变法扩增出含有4个功能区(T肽区,与NLK部分同源区,显性中和位点及与CD4结合区)的HIV-env282肽基因,其5′端连有EcoR Ⅰ酶切位点和翻译起始码,3′端与终止码和BamH Ⅰ酶切位点相连。通过基因重组将其插入到大肠杆菌表达载体pBV220内并转化至宿主菌DH5α中,经电泳初筛、酶切分析和PCR鉴定,确定了一株含目的基因的重组菌,称之为pXW1。     

艾滋病毒核酸探针的制备

有超级癌症之称的获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)对人们的危害日趋严重,其扩散范围也越来越广。为了淮确而特异地检测引起艾滋病的病原体一人免疫缺陷病毒(humen immunodeficiency virus,HIV,也称HIV-1),我们采用基因工程的办法研制了艾滋病毒核酸探针。 HIV有很有的遗传变异性,不同毒株基因组的     

以痘苗病毒为载体表达乙型肝炎病毒表面抗原

含有乙型肝炎表面抗原(HBsAg)基因的重组痘苗病毒,一方面表达时能将HBsAg分泌到组织培养上清液中,另一方面它本身可能发展成一种新的活疫苗,故颇受学者们的重视.我们将pA01-HBV质粒酶切回收含有HBsAg基因的BamHI片段,插入至PGJP-5痘苗载体质粒的P7.5启动子之后,使插入的方向与P7.5转录方向一致,构成P_5-S_(40)重组痘苗转移载体质粒.用P_5-S_(40)质粒DNA通过磷酸钙沉淀法转染已感染TK~+天坛株痘苗病毒的CV-1细胞,使重组质粒DNA与痘苗病毒基因组在CV-1细胞体内进行同源重组.以痘苗病毒TK基因的插入灭活为筛选标记,得到的重组病毒应为TK~-表型,在5溴脱氧尿苷(BUdR50μg/ml)存在条件下,以人TK_(143)~-细胞筛选出单个的TK~-噬斑,于人TK_(143)~-细胞(含BUdR)传2～3代,再繁殖一代(不含BUdR),当细胞出现病变时,吸取上清以     

聚合酶链式反应扩增艾滋病毒-env 26肽基因

聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)或称为体外基因倍增,是1985年由Saiki等创建的。催化反应进行的酶现多使用Taq DNA聚合酶,该酶具有热稳定性。核酸杂交技术目前已被应用于HIV的检测,能早期准确地检测出患者所携带的病毒。制备核酸探针的关键是     

制备高纯度质粒DNA的简易方法

参照前人经验,经过反复试验,初步建立了温和裂解-电泳纯化法制备质粒DNA的一种简易方法。本法制得的质粒DNA纯净度高、生物活性好;经电泳、酶切以及转化等试验鉴定,结果较为满意。虽获得率不高,但仍可做为遗传工程及基因研究工作中制备质粒DNA的一种行之有效的方法。     

奈瑟氏菌属IgA1蛋白酶中和表位基因位点可能集中存在于iga的2601—2722序列

奈瑟氏菌属ＩｇＡ１蛋白酶中和表位基因位点可能集中存在于ｉｇａ的２６０１—２７２２序列许福明，马文煜，项秉懿，阎岩，白光春（西安第四军医大学微生物学教研室，西安第四军医大学生化教研室，西安７１００３２）ＩｇＡ１蛋白酶是病原性奈瑟氏菌属产生的一种与致病作...     

产生流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用JEV-SA,免疫BALB/C小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NS_1)在PEG作用下融合,以ELISA、HI、IF 3种方法检测抗体,建立了1株针对JEV-SA_4的单克隆抗体杂交瘤细胞系。该细胞系染色体在74～98之间,含中着丝点标志染色体,经4次克隆化,连续传代5个月仍持续分泌特异性抗体,该抗体为IgG_3亚类。     

淋球菌IgA蛋白酶基因中和表位片段的克隆、表达和鉴定

目的 克隆和表达编码淋球菌ＩｇＡ蛋白酶中和表位的基因。方法 通过ＰＣＲ扩增淋球菌ＩｇＡ蛋白酶编码基因１６０１～２７２２位序列，克隆后在大肠杆菌中表达，表达产物用重组淋球菌ＩｇＡ蛋白酶免疫血清作Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹。并用表达产物免疫小鼠血清与产ＩｇＡ蛋白酶的标准菌株培养上清作用，观察免疫血清对酶活性的影响。结果 所克隆的基因在大肠杆菌中获得高效表达，表达产物能与重组淋球菌ＩｇＡ蛋白酶免疫血清反应，表达     

体外基因扩增制备艾滋病毒核酸探针

作者利用DNA合成仪合成艾滋病毒ARV—2前病毒序列6 310～6 328,6 666～6 684及HT_LV-Ⅲ前病毒序列6339～6374,6385～6419两对寡核苷酸引物,应用体外基因扩增(Polymerase chainreaction,PCR),以pARV-2/7A质粒为模板扩增出两个DNA片段。~(32)P标记后,以pCP10(含HBV基因)、M56(含出血热汉坦株M片段cDNA)、人染色体DNA乙型脑炎病毒(JEV)为对照,经Southern杂交及斑点杂交,证明PCR扩增制备HIV核酸探针特异性强、敏感性高。     

Chemical Synthesis and Cloning of Overlapping Concatenated Human Atrial Natriuretic Factor Gene with Gene Engineering

Eight oligonucleotide fragments were designed with the aid of a computer and synthesizedaccording to the amino add sequcnce of human atrial natriuretic factor(ANF).By means of an-nealing and ligation,these fragments were assembled into an overlapping concatenator consisting oftwo ANF genes ligated by TGATG for termination and initiation of translation.Theconcatenator was omserted into plasmid pRC23 and the recobinant DNA was transformed into E.coli strain TAP106.Analysis by restriction enzyme mapping,hybridization and DNA sequenongshowed that the orientation and reading frame of the gene were correct.