食管癌前病变及原位癌组织中Ki67、p53、iNOS的异常表达

目的研究食管癌高发区癌前病变及癌活检组织标本中Ki67、p53蛋白的异常表达,探讨其与食管癌变的关系及作为早期癌变生物学标志物的可能性。方法对来自食管癌高发区河北磁县的正常食管黏膜组织和轻度、中度、重度不典型增生上皮以及原位癌活检组织共366例,应用免疫组化技术对食管癌变过程中Ki67、p53蛋白的异常表达进行研究。结果在正常黏膜、轻度、中度、重度不典型增生及原位癌组织中,Ki67异常表达检出率分别为0(0/25)、40.5%(30/74)、61.3%(65/106)、76.5%(39/51)和90.0%(72/80),其中异常表达程度在中度以上者分别占0(0/25)、2.7%(2/74)、11.2%(12/106)、41.2%(21/51)和58.8%(47/80);p53蛋白异常表达的阳性率分别为4%(1/25)、39.1%(27/69)、57.5%(61/106)、52.9%(27/51)和67.9%(53/78),其中异常表达程度在中度以上者分别占0(0/25)、10.1%(7/69)、24.5%(26/106)、39.2%(20/51)和48.7%(38/78)。p53蛋白及Ki67在正常黏膜中的表达,与不典型增生总体及原位癌组织的差异均有显著性(P＜0.001)。等级相关分析结果显示,p53、Ki67表达异常与组织学分级均显著相关（相关系数r分别为0.3597和0.5837,P值均＜0.001),而且p53蛋白与Ki67表达之间也具有显著相关性（r=0.5432,P＜0.001）。结论Ki67、p53蛋白异常表达与食管癌癌变过程显著相关,p53基因表达异常及细胞增殖异常与食管上皮的早期癌变有关。p53及Ki67表达改变的时相分布,有可能成为在食管癌前人群中确立高危个体和选择重点化学预防个体的分子生物学标记。p53改变可促使上皮细胞增殖。     

吉西他滨缓释微球间质化疗治疗胰腺癌的实验研究

目的 研究(聚乳酸-乙醇酸共聚物)PLGA-吉西他滨(GEM)缓释微球间质化疗应用于胰腺癌的治疗效果.方法 将80只胰腺癌荷瘤鼠随机分为8组,每组10只.A1、A2、A3组瘤内注射PLGA-GEM缓释微球,给药剂量分别为5mg/kg、2.5mg/kg和1.25mg/kg;B组瘤内注射GEM(5mg/kg)对照;C组腹腔内注射GEM 5mg/kg;D 组瘤内注射PLGA-5-Fu缓释微球5mg/kg;E组为PLGA载体5mg/kg对照;F组不接受任何治疗.于给药前、给药后4、8、12、16、20、24天观察裸鼠生存状况、称体重、测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;24天时处死动物,称瘤重,计算抑瘤率;行免疫组化染色,了解VEGF表达情况.结果 PLGA-GEM缓释微球瘤内给药高、中剂量组(A1、A2组)抑瘤率分别达到了66%和40%,与其他组相比结果 具有统计学差异(P＜0.05);随着PLGA-GEM 缓释微球剂量的增加,VEGF表达降低,A1、A2组与F组相比,结果 具有统计学差异(P＜0.05).各组体重在治疗后各观察点与治疗前比较,没有统计学差异.结论 PLGA-GEM缓释微球能有效抑制胰腺癌移植瘤的VEGF表达,能显著抑制肿瘤的生长,且无明显的毒副作用,该制剂具有一定的潜在临床应用价值.     

pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗对裸鼠肿瘤的作用

目的：探讨pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF-305裸鼠的抗肿瘤作用的适宜照射剂量和质粒注入量。方法：不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒(10,20,30μg)注入接种JF305胰腺癌细胞的裸鼠体内,测定各组裸鼠体积以观察各种处理抑瘤效应的差异,并用RT-PCR检测放射治疗后48h各组肿瘤局部p16 mRNA水平。结果：质粒注入后接受20Gy X射线照射组照射后4~28d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组（P<0.05）。质粒注入量为20μg或30μg的联合治疗组照射后4～28d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组（P<0.05）。单纯接种pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒组和接种pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒照射组小鼠的肿瘤组织内有p16 mRNA表达,且pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒照射组的p16 mRNA水平明显高于单纯pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒组（P<0.05）。结论： pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜射线照射剂量为20Gy,质粒注入量为20μg; pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗的抗肿瘤作用明显优于单纯放射治疗或单纯基因治疗,这可能与辐射激活Egr.1p基因后增强抑瘤基因p16的表达有关。     

p16基因转染对胰腺癌细胞生长及辐射敏感性的研究

目的 探索p16基因转染对胰腺癌细胞生长辐射敏感性的作用。方法 将外源野生型p16基因连接到pCDNA3.1^＋载体构建pCDNA3.16＋ -p16重组质粒,利用Lipofectamine^TM介导转染胰腺癌JF305细胞,筛选阳性克隆。照射后,RT-PCR检测p16基因表达,Western blot检测蛋白表达;用MTT法测定细胞生长曲线和肿瘤细胞杀伤率。结果 转染p16基因的JF305细胞有外源p16基因的整合及表达,生长速度明显减少,对辐射的敏感性增强。结论 导入外源野生型p16基因可抑制胰腺癌细胞恶性增殖,提高胰腺癌细胞对辐射的敏感性。     

体外构建靶向脂质体靶向杀伤肿瘤血管内皮模型

目的 :于体外构建靶向脂质体标杀肿瘤血管内皮的小鼠模型并进行验证。方法 :利用肿瘤细胞分泌的IFN γ刺激内皮细胞表达MHCⅡ ,以连有抗MHCⅡ抗体的免疫载药脂质体靶向杀伤内皮细胞。内皮细胞的MHCⅡ阳性率由细胞流式仪监测。免疫脂质体识别靶细胞的能力由结合实验验证。细胞毒实验采用的是MTT检测法。结果 :肿瘤细胞分泌的IFN γ可刺激内皮细胞表达MHCⅡ。内皮细胞SVEC与转染IFN γ基因的神经母细胞瘤C130 0 (Muγ)的上清培养 2d后 ,约有 2 3%的上皮细胞表达MHCⅡ。连有抗MHCⅡ抗体的脂质体可与表达MHCⅡ抗原的内皮细胞特异结合。结合率可达非特异性脂质体的 3倍。载药的抗MHCⅡ脂质体可特异杀伤MHCⅡ阳性内皮细胞。结论 :免疫靶向脂质体可于体外特异杀伤因肿瘤分泌的细胞因子的作用而呈递抗原的内皮细胞。     

辐射诱导pcDNA3.1-Egr.1p-p16对JF305细胞周期和凋亡的影响

目的 检测pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒对胰腺癌细胞JF305凋亡和细胞周期变化的影响.方法 进行人胰腺癌JF305细胞培养,脂质体LipofectamineTM000转染pcDNA3.1-Egr.1p-p16重组质粒,6MV-X射线4 Gy照射(剂量率2.50 Gy/min),流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况.结果 pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒转染组和pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒转染 4 Gy照射组的JF305细胞中早期凋亡细胞分别占6.4%、10.4%,晚期凋亡或继发性死亡细胞分别占16.8%、33.8%,均较阴性对照组显著升高(P＜0.05).质粒转染 4Gy照射组总的凋亡率高于单纯质粒转染组(P＜0.05).辐射明显导致JF-305细胞G2期阻滞.pcDNA3.1-p16质粒和pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒基因转染,可使JF-305细胞阻滞于G1期.当给予细胞4 Gy照射后,两质粒转染组,阻滞于G1期细胞变化不大,阻滞于G2期的细胞有所增加.结论 pcDNA3.1-Egr.1p-p16可致JF-305细胞凋亡,与放射联合增加了细胞凋亡率.转染pcDNA3.1-Egr.1p-p16可使细胞阻滞于G1期,联合辐射,增加了细胞的G2期阻滞.     

索拉非尼联合脂质体阿霉素治疗甲状腺低分化癌裸鼠移植瘤的疗效观察

目的 评估索拉非尼、脂质体阿霉素及两者联合应用治疗甲状腺低分化癌裸鼠移植瘤的疗效.方法 用脂质体阿霉素和索拉非尼治疗甲状腺低分化癌裸鼠皮下移植瘤模型,裸鼠按随机数字法分为7组,为空白对照组、溶剂对照组、单药脂质体阿霉素组、索拉非尼组、低剂量联合组、中剂量联合组和高剂量联合组,观察肿瘤生长情况,评估两种药物的疗效.结果 利用索拉非尼和脂质体阿霉素对甲状腺低分化癌模型进行化疗,空白对照组、溶剂对照组、单药脂质体阿霉素组、索拉非尼组、低剂量联合组、中剂量联合组、高剂量联合组化疗结束后的最终肿瘤体积分别为(1274.13±393.76) mm3、(1060.00±469.05) mm3、(726.76±488.22) mm3、(451.54±97.75) mm3、(518.37±164.44) mm3、(310.51±210.53) mm3和(228.44±129.21) mm3,各组移植瘤最终瘤体质量分别为(1.13 ±0.42)g、(0.91 ±0.39)g、(0.78 ±0.45)g、(0.55 ±0.17)g、(0.52±0.19)g、(0.34±0.21)g和(0.19 ±0.09)g,单药脂质体阿霉素组、索拉非尼组、低剂量联合组、中剂量联合组、高剂量联合组的抑瘤率分别为30.8％、40.8％、42.3％、62.9％和72.6％,高剂量联合组抑瘤率除与中剂量联合组差异无统计学意义外(P =0.357)均高于其余各组,中剂量联合组优于单药脂质体阿霉素组(P=0.001),而与索拉非尼组差异无统计学意义(P =0.192).各治疗组平均瘤体质量均明显低于空白对照组(F=9.985,P＜0.05).各治疗组均无荷瘤鼠死亡,高剂量联合组荷瘤鼠体质量在治疗过程中较其余各治疗组有明显减轻(F =14.792,P＜0.05).结论 脂质体阿霉素和索拉非尼无论是单药还是联合应用对甲状腺低分化癌移植瘤模型均有明显的抑瘤作用,中剂量联合疗效明显且副作用小.