改良分光光度法测定rhEPO-Fc注射液中聚山梨酯20含量

目的研究建立改良的分光光度法测定重组人红细胞生成素（Fc）融合蛋白（rhEPO-Fc）注射液中聚山梨酯20含量的方法。方法供试品经与三氯甲烷、硫氰钴铵反应,并65℃水浴静置后,直接取样测定吸光度值。结果供试品的聚山梨酯20测定含量与添加量基本一致,回收率在95％-105％之间,RSD为2．71％。结论本法的优点系无需对样品进行反复抽提后离心分离、浓缩,操作简便、可靠。     

长效化GLP-1类似物研究进展

<正>糖尿病是一种严重的自身代谢紊乱性疾病。据WHO预测,到2025年全球糖尿病患者人数将达3亿,其中90%以上是2型糖尿病,2型糖尿病容易导致胰岛素缺乏和血糖过高[1]。胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide 1,GLP-1)     

MTT比色法与ELISA法测定rhEPO体外生物学活性比较

红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是人体内调控红系祖细胞的重要造血生长因子,它能刺激红系前体细胞的分化、增殖及成熟.重组人红细胞生成素(rhEPO)是运用基因工程方法,把人EPO基因转入CHO细胞内进行分泌表达,再经过纯化工艺获得的活性蛋白.rhEPO在治疗慢性肾性贫血及肾功能衰竭方面具有良好的疗效.rhEPO生物活性测定方法分体外法与体内法,现就两种体外测定rhEPO生物活性方法进行研究与比较.MTT比色法,运用四甲基偶氮唑盐(MTT)在活细胞线粒体琥珀酸脱氢酶作用下可被还原成蓝紫色结晶-甲形成量与细胞增殖程度成正比,从而通过rhEPO依赖株UT-7形成的甲量来定量测定rhEPO活性.双抗夹心ELISA法,用抗体包被固相载体后加rhEP0标准品与样品,使相应抗原与固相抗体结合后加入酶标抗体,最后再与该酶的底物反应生成有色物质,通过标准曲线精确测得rhEPO样品生物活性单位.     

溶栓药APSAC的制备和鉴定

重组链激酶（ｒ－ＳＫ）由工程菌提取液经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱纯化，比活性达１０５ＩＵ／ｍｇ，十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ的一条带。人新鲜血浆经Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５凝胶过滤制备纤溶酶原（ｐｌｇ），比活性达２３．７ＩＵ／ｍｇ，活性回收率为１３．６％，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ的一条带。对－茴香酸－对－脒基ｒ－ＳＫ和ｐｌｇ的混合物经苯酯盐酸盐（ＡＰＡＮ）修饰后制备茴香酰纤溶酶原链激酶激活剂复合物（ＡＰＳＡＣ），产物经Ｌ－ｌｙｓｉｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示分子量为７８．０２４７×１０－２４ｋｇ和１４７．７４８９×１０－２４ｋｇ两条带，其拟一级水解速率常数为１．２６×１０－４ｓｅｃ－１。体外溶栓实验证明其有溶栓活性。     

重组人甲状旁腺激素1-34的纯化研究

重组人甲状旁腺激素(rhPTH(1-34))在工程菌pET(32a+)-PTH(1-34)/BL21(DE3)中以胞内可溶性融合蛋白形式高效表达。经过高压匀浆破菌处理,取上清经过亲和层析、酶切、阴离子交换层析、反相层析和阳离子交换层析进行分离纯化,得到rhPTH(1-34)原液样品纯度在98%以上,比活性达到1.05×104U/mg。     

乳糖诱导重组人甲状旁腺素（1-34）高密度发酵研究

利用乳糖诱导工程菌pET(32a+)-PTH(1-34)/BL21(DE3) 高效表达人甲状旁腺激素1-34融合蛋白.并对乳糖浓度、诱导温度、诱导时机等参数进行优化,得到目的蛋白高表达乳糖诱导高密度发酵工艺.三批实验结果表明,人甲状旁腺激素1-34融合蛋白表达量在33%左右,工程菌生物量在55 g/L左右.     

Exenatide及其类似物的研究进展

Exenatide是由Amylin Pharmaceuticals与礼来（Eli Lilly）公司共同开发的胰高血糖素样肽-1(glucogan-like peptide-1，GLP-1)受体长效激动剂。研究证实，exenatide具有促进胰岛β细胞增殖、抑制β细胞凋亡、抑制食物摄取、减慢胃排空和减轻体质量等生理作用，有着传统治疗糖尿病药物不可比拟的优点，因而近年exenatide及类似物已经成为糖尿病治疗领域的研究热点。     

c-jun反义核酸消除人体卵巢癌细胞的抗药性研究

目的:c-jun反义核酸消除人体卵巢癌细胞抗药性探讨.方法:采用c-jun反义核酸处理抗药型人体卵巢癌细胞,观察c-jun,γ-GCS以及GSH在两种细胞内的表达水平.结果:c-jun反义核酸可抑制c-jun基因的表达并降低谷胱苷肽合成的关键酶γ-GCS的mRNA表达量,使抗药型细胞内GSH含量降低大约75%.ATT分析结果也表明,经c-jun反义核酸处理后,抗药型细胞对顺铂的IC_(50)从40μmol/L降低到1.0μmol/L,对敏感型细胞无明显影响(0.2μmol/L).结论:c-jun反义核酸可特异地抑制抗药型细胞内c-jun基因的表达并间接抑制γ-GCS的表达,最终抑制GSH的合成,从而消除卵巢癌细胞的抗药性.