转hCTLA4Ig树突状细胞诱导T细胞免疫耐受的实验研究

目的　通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs ,探讨转人CTLA4Ig(hCTLA4Ig)树突状细胞 (DCsRev)诱导T细胞免疫耐受的可能性。方法　通过重组逆转录病毒将目的基因hCTLA4Ig转染到大鼠骨髓来源的DCs中 ,通过流式细胞检测目的基因hCTLA4Ig表达及DCs表面分子的改变 ;通过混合淋巴细胞反应 (MLR)检测DCsRev抑制T细胞免疫反应的能力。 结果　重组逆转录病毒转染DCs的最大效率为 91 2 5 % ;在功能上 ,DCsRev不但丧失了刺激MLR的能力 ,并且能够强烈抑制MLR中反应T细胞的增殖 ,而且抑制率与加入DCsRev的数量和DCsRev预处理反应T细胞的时间长短有关。具体来说 ,DCsRev数量在 10 3 ～ 10 4之间时 ,抑制率与剂量呈正相关 ,最高为 71 96%。而当DCsRev数量达到 5× 10 4抑制率下降为 5 9 2 %。在 12～ 48h之间 ,随着预处理时间的延长 ,抑制率却不断下降 ,预处理 12h抑制率最高 ,为 99 6%。但不做预处理 ,在反应开始时同时加入DCsRev ,则抑制率明显降低 ,仅为 5 9 2 %。对腹腔注射DCsRev大鼠脾T淋巴细胞体外分析表明 ,DCsRev也能在动物体内诱导耐受 ,但这种免疫耐受状态不能维持终身。结论　通过逆转录病毒载体将人CTLA4Ig转染DCs,不但DCs表面CD86分子被CTLA4Ig有效的封闭 ,并且能够诱导抗原特异性T细胞的免疫耐受     

湖南省新生儿先天性甲状腺功能减低症和苯丙酮尿症的筛查分析

目的：了解湖南省新生儿先天性甲状功能减低症（CH）和苯丙酮尿症（PKU）的发病情况,早期诊断和治疗。方法：采用时间分辨荧光免疫法（DELFIA）测定促甲状腺素（TSH）浓度,使用盖塞利细菌抑制法或荧光法测定血苯丙氨酸（Phe)浓度。对TSH≥20μU/L或Phe≥0.26mmol/L(2mg/dl)者,进行确诊检查,确诊后给予治疗并随访。结果：湖南省部分地区46323例新生儿,确诊为CH28例（包括3例TSH延期上升型CH）,PKU患儿1例。经治疗随访患者智能体格发育正常。结论：新生儿筛查能早期发现PKU和CH患儿,及时诊断、治疗和预防智力低下发生,值得大力推广。     

胃癌患者术后NDV-ATV治疗对机体免疫功能的影响

目的 探讨新城鸡瘟病毒修饰的自体肿瘤疫苗(NDV—ATV)治疗胃病术后患者机体免疫功能的影响。方法 采用流式细胞术分析36例胃病术后(术后2、3、4、5周)NDV—ATV治疗患者外周静脉血T淋巴细胞亚群及NK细胞的变化情况，并以15例术后未接受NDV—ATV治疗的胃癌患者作对照。结果 对照组术后CD3^ 、CD4^ 、NK细胞所占百分比和CD4^ /CD8^ 逐渐升高，以术后3周内升高最为明显。NDV—ATV治疗组，术后CD3^ 、CD4^ 、NK细胞所占百分比和CD4^ /CD8^ 上升速度更快，持续时间更长。治疗结束后与治疗前比较，有非常显著性差异(P＜0．01)；且明显高于未接受NDV—ATV治疗的对照组患者(P＜0．05)。第1次治疗后和治疗结束后相比较有显著性差异(P＜0．05)。结论 NDV—ATV可同时视为1种免疫调节剂，能明显改善胃癌患者术后机体的免疫功能，提高机体抗肿瘤能力。     

腹腔镜下胃近端癌根治术的探讨

目的 探讨腹腔镜下胃近端癌根治性手术的可行性及其效果.方法 回顾性分析我们于2004年5月～2006年10月行腹腔镜下根治性胃近端癌手术53例的临床资料.其中,行D1 α/β淋巴结清扫6例,D2/D2 清扫47例.全胃切除术18例,近端胃大部切除术35例.结果 本组有49例成功进行腹腔镜手术.中转开腹4例,中转率为7.5%.根治性近端胃切除术平均手术时间(215.8±22.8)min,全胃切除手术时间(289.8±35.8)min;平均出血量(139.34±82.7)ml;清扫淋巴结(28.9±11.0)枚;肿瘤近残端(3.6±1.3)cm,远残端(6.4±1.1)cm.术后肛门排气时间(3.1±0.9)d,下床活动时间(2.8±0.6)d.无术后死亡病例.吻合口漏1例及其它并发症7例均经内科治疗痊愈.术后随访2～31月,平均18.6月.因肿瘤复发死亡11例,另3例复发病人尚健在.结论 腹腔镜胃近端癌根治术能达到胃癌标准根治术(D2)的淋巴结清扫范围,且具有创伤小、出血少、恢复快、并发症发生率低及减少开胸手术机会等优点.     

CD83+肿瘤浸润性树突状细胞在胃癌组织的表达及临床意义

目的肿瘤组织浸润树突状细胞(tumor infiltrating dendritic cells,TIDCs)数量和功能对患者预后有显著床意义,但CD83 TIDCs在胃癌组织中的表达情况尚不清楚,需要进行研究.方法采用免疫组化、原位杂交及流式细胞术检测45例胃癌TIDCs的CD83蛋白、CD83 mRNA以及S-100表达,并分析其临床意义.结果免疫组化显示胃癌组织(42/45)中有S100 散在表达;CD83主要表达于胃癌组织癌旁及正常胃黏膜上.原位杂交显示CD83 mRNA在少数标本中(7/45)表达.流式细胞术检测到低水平CD83表达(4%,45/45).S-100和CD83 mRNA表达数量与患者年龄、性别、肿瘤部位、浸润深度、病理分期及淋巴结转移情况无显著相关性.CD83蛋白免疫组化表达与胃癌TNM分期显著负相关(r=-0.924,P＜0.01);CD83流式细胞检查的表达率与胃癌TNM分期及淋巴结转移呈显著负相关(r=-0.879,P＜0.01;r=-0.782,P＜0.05).结论胃癌TIDCs CD83表达与胃癌TNM分期及淋巴结转移有关,可作为临床研究指标使用.     

模拟CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响

目的 通过建立体外模拟CO2气腹环境,研究CO2气腹对人胃癌MKN-45细胞增殖和细胞周期的影响。方法 建立体外模拟CO2的气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为12mmHg,作用时间4h。处理后用MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞周期变化。结果 MTT法检测细胞增殖结果显示,气腹组人胃癌MKN-45细胞的增殖速度与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）;流式细胞仪检测人胃癌MKN-45细胞周期,CO2气腹组增殖指数与对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论 体外模拟持续12mmHg CO2气腹环境,连续对人胃癌MNK-45细胞作用4h,不会促进胃癌细胞的增殖和生长。     

双标记流式细胞术定量分析5-FU诱导胃癌细胞早期凋亡

目的 以Annexin V-FTTC/PI双标记流式细胞术检测5－FU诱导胃癌细胞株SCG7901早期凋亡。方法 250、125、50以及25mg/L不同浓度5－FU处理SCG7901胃癌细胞0、6、12、18、24、30h,Annexin V-FTTC/PI双标记流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡。结果 早期（0－24h)瘤细胞凋亡比例随5－FU作用剂量增加和时间延长而显著提高（P＜0.01)；后期（24-30h)瘤细胞以坏死增加为主（P＜0.01)而凋亡比例反而降低。结论 5－FU诱导细胞凋亡呈时间以及剂量依赖关系。Annexin V/PI双标记法可以清楚区分正常、坏死、机械损伤以及凋亡细胞群落，是定量分析早期细胞凋亡的准确方法。     

人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定

目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中，脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig-IRES2-EGFP转染PA317细胞，在G418选择压力下，通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA317细胞克隆，MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体，生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。结论 IRES序列调控CTLA4Ig与EGFP双基因在细胞中同时独立表达。     

JAK2/STAT3途径在IL-6抑制LPS诱导的树突状细胞分化成熟中的作用

目的 观察JAK2/STAT3信号途径在IL-6抑制LPS诱导的小鼠髓源性树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)分化成熟中的作用.方法 分离小鼠骨髓细胞,采用黏附法结合GM-CSF和IL-4刺激法在体外培养BMDCs;用相差倒置显微镜观察BMDCs的形态特点;用LPS诱导DCs成熟;采用流式细胞术观察IL-6处理与否,LPS诱导的BMDCs在表型上的变化;Western blot检测BMDCs细胞质p-JAK2、总STAT3和P-STAT3的表达水平.结果 形态观察和FCM分析的结果表明:体外成功培养了纯度较高的高表达CD11c的BMDCs,LPS能明显诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达上调;而经过IL-6处理后,LPS诱导BMDCs表面MHC-Ⅱ类分子、CD80、CD86、CD40表达上调的能力被显著削弱(P＜0.01).Western blot结果显示,与单独用LPS处理的BMDCs相比,经IL-6处理后的BMDC中p-JAK2、P-STAT3表达随作用时间增加而明显上调,提示IL-6促进JAK2/STAT3信号途径活化.结论 JAK2/STAT3信号途径参与了IL-6抑制LPS诱导的BMDCs成熟过程.     

胃癌组织中gp96和增殖细胞核抗原的表达及其临床意义

目的探讨gp96在胃癌组织中的表达及其在胃癌发生、发展中的作用.方法采用免疫组化及原位杂交技术检测50例人胃癌及其癌旁正常组织gp96的表达,免疫组化检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 gp96在癌旁正常组织中存在较低的表达,在胃癌组织中表达比癌旁正常组织显著增高(P＜0.01);而且表达高低与胃癌的临床分期、分化程度及有无淋巴结转移有显著差异(P＜0.05);PCNA的表达与gp96的表达相关,PCNA表达高者gp96的表达也增高,二者呈显著正相关(r=0.744,P=0.021,P＜0.05).结论 gp96、PCNA在胃癌组织中的表达密切相关,可能在胃癌的发生、发展中起重要作用.