抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选

构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征 ,scFv基因拼接正确     

重组人肝细胞生成素的理化性质研究

目的 :研究重组人肝细胞生成素 (hepatopoietin ,HPO)的理化性质。方法 :在大肠杆菌中表达的人HPO ,经凝胶过滤和离子交换柱层析进行纯化 ;通过还原型SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、非还原型SDS PAGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MAIDI TOF MS)等方法分别测定了人HPO的相对分子质量 ;采用等电聚焦电泳测定了人HPO的等电点 ;采用内源荧光光谱和圆二色光谱法研究了人HPO的稳定性。结果与结论 :复性后的重组人HPO主要以双体形式存在 ,其相对分子质量为 30 0 0 0 ,等电点在 5.2～ 6 .0之间。在 70℃以下、pH 2 .6以上 ,人HPO分子内部构象基本不变     

利用siRNA抑制HER-2表达的研究

目的利用siRNA抑制人乳腺癌MCF-7细胞中HER-2基因的表达。方法针对HER-2mR-NA设计了5条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染MCF-7乳腺癌细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR分析siRNA对细胞中HER-2mRNA的降解作用;利用流式细胞术分析细胞表面HER-2蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,用免疫组化法检测瘤组织中HER-2的表达。结果siRNA3P能明显降低MCF-7细胞中HER-2mRNA的丰度;流式细胞分析表明,其中siRNA2P和3P稳定转染的MCF-7细胞表面HER-2的表达明显降低;五种表达不同siRNA的MCF-7细胞在裸鼠体内的成瘤性均有所降低,并且瘤组织中HER-2蛋白的表达也明显减少。结论靶向HER-2mRNA的siRNA能在体内外有效抑制HER-2的表达,可用于乳腺癌的基因治疗。     

四川省剑阁县麻风病流行情况

剑阁县地处川北剑门山区，海拔最高1300m，最低460m，1000m以上的中山区面积占总面积的0．63％，500～1000m的低山区面积占90．57％．500m以下的深丘区占8．8％。全县共有10个片区、60个乡镇、527个自然村、3561个居民组、140060户、589861人(1985年末)，幅员3204km^2。     

重组人粒细胞集落刺激因子构象异构体生物学性质研究

目的：探索构象的不均一性对原核工程产品质量的影响，方法：以重组人粒细胞集落刺激因子（G－CSF）为模型，对分离出的异构体单一组分分别测定生物活性、单克隆抗体反性和圆二色谱，并探索复性条件对不同构象异构体生成情况的影响。结果：异构体A活性很高，接近进口标准品，异构体B和C活性较低。各异构体的单克隆抗体反应性和圆二色性也存在微小差别。稀释复性可产生3种异构体，异构体A占40％，透析复性仅产生两种异构体，异构体A占80％。结论：构象异构体的存在影响原核基因工程产品的质量，不同的构象异构体具有不同的性质。     

活性氧对蛋白质抗原与其相应抗体反应性增强的效应

牛红细胞铜锌超氧化物歧化酶经Ｈ＿２Ｏ＿２和抗坏血酸－Ｆｅ￣（３＝）处理后与其相应抗体的反应及与抗狗、抗猪和抗人红细胞铜锌超氧化物歧化酶抗体的交叉反应均显著增强；Ｈ＿２Ｏ＿２－Ｃｕ￣（２＋）和抗坏血酸－Ｆｅ￣（３＋）处理后人血清白蛋白及人ＩｇＧ与其相应抗体的反应也显著增强。结果提示活性氧所致蛋白质抗原与其相应抗体反应的增强可能与某些自身免疫性疾病中抗原抗体复合物的形成有关．     

抗人肝再生增强因子单克隆抗体的研制

目的　利用纯化的重组人肝再生增强因子(hALR)制备抗hALR的单克隆抗体,建立hALR的检测方法。方法 采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,经ELISA和免疫印迹证明其特异性。结果获得了4株分泌抗hALR特异性抗体的杂交瘤 细胞系;无血清培养液效价为1×10-2,腹水效价为1×10-5;亚类鉴定表明2株单克隆抗体为IgGl,另2株为IgG2b;免疫印迹 显示抗体结合抗原的分子量与hALR相符,为特异性抗hALR抗体。结论通过杂交瘤技术,获得了抗hALR的单克隆抗体 为以后的工作奠定了基础。     

药物的聚乙二醇修饰研究进展

目的 介绍了药物聚乙二醇技术及其在药物研究中的应用最新进展。方法 以国外大量有代表性的献为基础，简要论述了聚乙二醇的生理化学特性、药物的聚乙二醇修饰的优势、修饰技术及其在药物研究中的应用和存在的问题，并评述其应用前景。结果 药物的聚乙二醇修饰技术改变了药物的分子结构，从而改进了药物动力学和药效学的性质，增加了注射药物的临床应用范围和疗效。结论 聚乙二醇修饰技术成功应用于蛋白质药物、有机小分子的前体药物和脂质体药物的研究，显示了药物的聚乙二醇修饰技术良好的应用前景。     

抗坏血酸—Fe^3＋羟自由基生成体系对质粒pBR322DNA的损伤

以抗坏血酸-Fe^3 作为自由基生成体系，结合琼脂糖电泳和激光密度扫描等方法，观察了自由基对质粒pBR322DNA的损伤及过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的防护效能，结果表明，该体系生成的羟自由基可造成的单链断裂而使pBR322的超螺旋构型转变为开环构型；过氧化氢酶对羟自由基所致DNA损伤的抑制作用显著，而超氧化物歧化酶无明显抑制作用。     

抗人超氧化物歧化酶单克隆抗体制备及临床应用

人体内超氧化物歧化酶(SOD)质与量的检测,对体内超氧阴离子自由基的动态的研究和所引起机体生理病理状态的自由基医学的发展,具有理论意义和应用价值。作者从人红细胞内纯化CuZn SOD,其比活性为3300U/mg,紫外光谱分析最大吸收峰在265um处,经酶染色定位证明为均一性纯酶。以其为抗原,制备了(绵)羊抗人CuZnSOD抗体和3株鼠抗人CuZn SOD McAb。建立了反向间接血凝试剂盒和酶联免疫吸附试验试剂盒,用于验测人体内SOD滴度,前者的