蛋白转导域介导BCR/ABL抗原对CML患者T细胞的活化作用

目的：研究蛋白转导域(PTD)介导的BCR／ABL抗原对慢性髓细胞白血病(CML)患者T细胞的特异性活化作用。方法：利用基因工程技术，将PTD基因与CML b3a2 bcr／abl基因融合并原核表达。将纯化的PTD—BCR／ABL融合蛋白与CML患者外周血单个核细胞(PBMC)体外共孵育，用流式细胞仪分别检测CD4^ 、CD8^ T细胞上活化抗原CD25的表达。结果：终浓度为100mg／L的PTD—BCR／ABL抗原体外刺激4d后，10例CML患者中，5例表现为CD8^ T细胞活化，2例表现为CD4^ T细胞活化，其中有1例CD8^ 和CD4^ T细胞同时活化；而作为对照的BCR／ABL抗原刺激组无一例表现为CD8^ 或CD4^ T细胞活化。结论：PTD能将外源性BCR／ABL抗原转导入抗原呈递细胞内，加工呈递后激活抗原特异性CD8^ 及CD4^ T细胞，为CML特异性CD8^ 、CD4^ T细胞的体外活化及细胞免疫治疗开辟一条新的途径。     

体外诱导兔骨髓间充质干细胞定向分化为软骨细胞的实验研究

目的：研究兔骨髓间充质干细胞（BMMSCs）向软骨细胞分化的潜能。方法：将兔髂骨骨髓液进行原代和传代培养，以高糖DMEM无血清特定培养液诱导（含TGF-β2 10ng／ml、地塞米松7mol／L-10mol／L、维生素C50μmol／L），相差显微镜下观察细胞形态变化，免疫组织化学染色检测软骨特异性Ⅱ型胶原表达。结果：BMMSCs诱导后细胞体外扩增能力显著降低，细胞形态由成纤维样细胞梭形向多角形、多边形或类圆形转变，诱导21天后细胞形态变化最为显著，Ⅱ型胶原免疫组化染色深而均匀。结饿在适当条件下，体外培养的BMMSCs可定向诱导分化为软骨细胞。     

改良CVP联合rhG—CSF动员方案外周血干细胞移植治疗血液肿瘤及实体瘤41例

目的：研究改良CVP联合rhG—CSF方案对血液肿瘤和实体瘤41例患者自体外周血干细胞移植（APBSCT）动员及造血重建效果。方法：2001年3月至2006年3月采用改良CVP联合rhG—CSF动员方案，完成APBSCT41例（血液肿瘤32例，实体瘤9例），平均年龄39．6岁（18岁～67岁）。WBC升至4．0×10^9／L左右采集单个核细胞（MNC）并计数MNC和CD34^＋细胞数；预处理结束48h～72h回输MNC。结果：动员期间患者WBC均降至1．0×10^9／L以下，PLT 40×10^9以下。34例1次采集成功，7例（双次移植5例）作第2次采集。采集MNC数0．9×10^8／kg～8．3×10^8／kg（2．8±2．0×10^8／kg），CD34^＋细胞1．1×10^6／kg～9．4×10^6／kg（3．2±2．6×10^6／kg）。预处理后所有病例均达到骨髓抑制，WBC恢复到1．0×10^9／L时间为＋8～＋16d（平均＋11．3d）；38例PLT恢复到50×10^9／L时间为＋13～＋22d（平均＋16．8d），3例P1月恢复延迟，最长＋35d。随访15～65个月，持续完全缓解19例（46．3％），部分缓解或好转13例（31．7％），总有效率78．0％，无效9例（22．0％），无1例发生移植相关死亡（其中5例带瘤生存，17例死亡）。结论：改良CVP联合rhG—CSF动员方案行APBSCT是一种安全有效的动员自体外周血造血干细胞的方法，临床疗效满意。     

心理支持疗法对成人急性白血病患者化疗后生活质量的影响

目的：观察心理支持疗法对成人急性白血病患者生活质量的影响，探讨其影响机制。方法：化疗后50例随机抽签分为观察组26例，对照组24例，观察组化疗后进行心理支持疗法，两组白血病患者均长期随访(1995—01／2002—06)，生活质量参照PULSES的内容自拟生活质量调查问卷评定，心理健康水平应用汉密顿焦虑评定量表(HAMA)进行评定。结果：治疗组26例中，持续完全缓解大于5年13例，持续完全缓解未达5年的6例，复发7例；生活质量积分少于10分的13例，生活质量积分少于15分的7例，生活质量积分少于20分的6例。对照组24例中，持续完全缓解大于5年9例，持续完全缓解未达5年的5例，复发10例；生活质量积分少于10分8例，少于15分5例，少于20分11例。两组间的5年生存率有明显差异(r=5．1023，P&;lt;0．05)，生存质量改善情况差异明显(t=-2．043．P&;lt;0．05)。结论：心理支持疗法对急性白血病患者的生活质量有较好的改善作用。     

骨髓增生异常综合征39例临床分析

0　引言　骨髓增生异常综合征 (myelodysplasic syndrome,MDS)是一组骨髓造血功能异常的恶性克隆性干 /祖细胞性疾病 ,其主要特征是无效造血所致的难治性血细胞减少和极易发展为急性白血病 . MDS部分可转化为白血病 ,近年来发病率在上升 .我院从 1982 - 0 7/ 1998- 0 7共收治可随访的 39例MDS患者 ,现总结分析如下 :1　临床资料1.1　病例的选择　文中病例均为住院患者 ,诊断标准按照1982年 FAB协作组诊断标准 [1 ] ,根据该标准将全部病例分为5个亚型 :A.难治性贫血 (RA) ;B.环状铁粒幼细胞性难治性贫血 (RAS) ;C.难治性贫血伴原始细…     

心理支持疗法对成人急性白血病患者化疗后生活质量的影响

目的:观察心理支持疗法对成人急性白血病患者生活质量的影响,探讨其影响机制。方法:化疗后50例随机抽签分为观察组26例,对照组24例,观察组化疗后进行心理支持疗法,两组白血病患者均长期随访(1995-01/2002-06),生活质量参照PULSES的内容自拟生活质量调查问卷评定,心理健康水平应用汉密顿焦虑评定量表(HAMA)进行评定。结果:治疗组26例中,持续完全缓解大于5年13例,持续完全缓解未达5年的6例,复发7例;生活质量积分少于10分的13例,生活质量积分少于15分的7例,生活质量积分少于20分的6例。对照组24例中,持续完全缓解大于5年9例,持续完全缓解未达5年的5例,复发10例;生活质量积分少于10分8例,少于15分5例,少于20分11例。两组间的5年生存率有明显差异(χ2=5.1023,P<0.05),生存质量改善情况差异明显(t=-2.043,P<0.05)。结论:心理支持疗法对急性白血病患者的生活质量有较好的改善作用。     

PTD介导蛋白通过血脑屏障及其在脑组织中的分布

目的：探讨HIV－1 TAT的蛋白转导结构域（protein transduction domain,PTD）介导的大分子蛋白通过血脑屏障（blood-brain barrier,BBB）的作用及其在脑组织中的分布。方法：将纯化的PTD－BCR／ABL融合蛋白及伊文思蓝经尾静脉注入小鼠体内，制备全脑组织恒冷箱连续切片，用免疫组织化学染色法检测PTD－BCR／ABL融合蛋白在脑组织中的分布，用伊文思蓝作为指示剂检测PTD对BBB开放的影响。结果：将其注射到小鼠体内后，在全脑组织细胞中均检测到PTD－BCR／ABL融合蛋，呈非特异性组织分布；全脑组织除无BBB区域外，余脑区均无伊文思蓝渗入，PTD不引起BBB的开放。结论：PTD可在体内特异性介导大分子蛋白通过血脑屏障，并在全脑组织细胞中分布，为肽类或蛋白类大分子药物通过BBB进入中枢神经系统（central nervous ystern,CNS)开辟了一条新的途径。     

LD—HA诱导治疗非M3型老年急性髓系白血病疗效观察

目的观察小剂量高三尖杉酯碱＋阿糖胞苷（LD—HA）诱导治疗非M3型老年急性髓系白血病（AML）的疗效和不良反应。方法将35例初治老年AML患者随机分为A组（19例）及B组（16例）。A组采用LD—HA方案：高三尖杉酯碱（H）1～2mg／d,阿糖胞苷（Ara—C）25mg,q12h,第1—14天化疗。B组采用标准剂量HA或DA方案。结果1个疗程结束后,A组和B组的完全缓解（CR）率分别为68．4％和37．5％;病死率分别为10．5％和18．7％,差异有统计学意义。血液学毒性两组差异无统计学意义;非血液学毒性的发生率A组低于B组。结论LD—HA诱导治疗老年AML近期疗效好,不良反应较轻。     

抗PTD-bcr/abl单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备单克隆抗体(mAb)并初步用于PTD-bcr/abl融合蛋白的研究,为慢性粒细胞白血病的免疫治疗提供实验依据.方法:在大肠杆菌中表达PTD-bcr/abl融合蛋白,用所获得的蛋白免疫BALB/e小鼠,常规收集小鼠脾细胞与Sp2/O细胞融合,筛选杂交瘤细胞株的阳性克隆,并对其进行一系列鉴定.结果:(1)表达PTD-bcr/abl融合蛋白;(2)制备了抗PTD-ber/abl融合蛋白mAb;(3)用mAb以多种方法检测PTD-bcr/abl融合蛋白,证实此抗体效价高,特异性强.结论:此抗体可用于PTD-ber/abl融合蛋白的进一步研究.     

Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用

背景：Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力。 目的：构建pET32a(+)-hFL^ext原核表达载体,表达、纯化hFL^ext蛋白,观察其对脐血CD34⁺细胞的扩增作用。 方法：克隆hFL^ext,构建pET32a(+)-hFL^ext重组表达载体。转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白。磁珠分选脐血CD34⁺细胞,单独加入hFL^ext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用。 结果与结论：成功克隆hFL^ext,并构建了pET32a(+)-hFL^ext重组表达载体。在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFL^ext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFL^ext融合蛋白。Trx-hFL^ext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34⁺细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础。