15例儿童型脊肌萎缩症的基因分析

脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种较常见的常染色体隐性遗传病,由于脊髓前角运动神经细胞退行性变,导致患者进行性骨骼肌无力和肌萎缩.根据发病年龄和病情轻重,临床上将SMA分为4型,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型称为儿童型SMA,Ⅳ型为成人型SMA[1].小儿时期起病的SMA是要儿期最常见的致死性遗传病.     

人脐带间充质干细胞3种分离制备方法的比较

目的 比较组织块贴壁培养法、脐带匀浆胶原酶消化法与改良胶原酶消化法制备脐带间充质干细胞（CMSCs）,探讨一种简便、快速、高质量的CMSCs制备方法。 方法 无菌条件下留取健康孕妇剖宫产的新生儿脐带,采用上述三种方法获取CMSCs,经传代培养、倒置显微镜形态观察、细胞增殖能力观察及流式细胞仪检测CMSCs免疫表型。 结果 三种方法均制备出CMSCs,但改良胶原酶消化法贴壁迅速,短时间内即可获得大量的CMSCs。细胞免疫表型：高表达CD90、CD105、CD73、CD29、CD44;极低表达CD45、CD34、CD14、CD19、HLADR。 结论 改良胶原酶消化法可以快速分离脐带华尔通胶（Wharton′s jelly)中CMSCs,且细胞迅速贴壁生长3~5 d即可传代,是一种简便快速易行的CMSCs制备方法。     

135例Duchenne型肌营养不良症DMD基因缺失分析

目的：杜氏肌营养不良（DMD）患者基因缺失检测。方法：对135个患者,应用12对引物,PCR多重反应体系,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行基因分析研究,设正常和空白对照,检测结果再以二重PCR进行验证。结果:其中54例患者有不同区域的缺失,基因缺失检出率为40%。结论：其缺失区域集中在45～53号外显子,最高峰在48号外显子。     

骨髓间充质干细胞条件培养基治疗大鼠糖尿病足溃疡的疗效及机制

目的 探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(mesenchymal stem cell-conditioned medium,MSC-CM)治疗大鼠糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcer, DFU)的疗效与机制。方法 通过高脂饮食和腹腔注射STZ建立2型糖尿病(diabetes mellitus type 2, T2DM) SD大鼠模型,对大鼠后肢进行手术,制作DFU模型,大鼠分为正常对照(normal control, NC)组、糖尿病对照(diabetes mellitus control, DM-C)组、MSC-CM组和间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)组共4组,每组各6只。MSC-CM组在溃疡周围注射大鼠骨髓MSC-CM,MSC组给予大鼠骨髓MSC注射治疗,其他两组给予PBS注射治疗。治疗后,对创面部位皮肤愈合、再上皮化(通过HE染色检测皮肤颗粒层的厚度)、细胞增殖(通过免疫组化法检测ki-67)、血管生成(通过免疫荧光法检测CD31)、自噬(通过免疫荧光法和Western blot法检测LC3B,电镜观察自嗜溶酶体)和细胞焦亡(通过Western blot法检测IL-1β、NLRP3、caspase-1、GSDMD和GSDMD-N)进行评估。结果 治疗后,MSC-CM组创面面积与IL-1β、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N均低于DM-C组;MSC-CM组皮肤颗粒层厚度、ki-67、CD31和LC3B均高于DM-C组。对DFUs大鼠注射MSC-CM能够加速创面愈合、促进细胞增殖和血管生成、增强细胞自噬和减少创面中的细胞焦亡。结论 MSC-CM可用于治疗大鼠DFU,加速伤口愈合过程,有望成为一种新的无细胞治疗方法。     

RNA干扰抑制RPS12基因表达对胃癌细胞凋亡的影响及分子机制探讨

目的: 探讨RPS12基因特异的RNA干扰对胃癌BGC823细胞凋亡的影响及机制。 方法: 设计并构建RPS12特异性shRNA表达载体(RPS12-shRNA),以Lipofectamine2000介导将RPS12特异性shRNA及Scram-ble-shRNA表达载体分别转染胃癌细胞。RT-PCR方法检测BGC823细胞中RPS12基因及凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA的表达,流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析RNA干扰对细胞凋亡的影响。 结果: RT-PCR结果显示,RPS12-shRNA表达载体转染第3、5、7天后,RPS12基因表达低于对照组,其中第5天下调最明显。RPS12特异性RNA干扰第5天、第7天后,Bcl-2 mRNA表达明显下调,BaxmRNA表达无明显改变。流式细胞术分析结果显示,RNA干扰RPS12基因第7天后,胃癌细胞凋亡率(17.84%)明显高于对照组(1.89%)。 结论: RNA干扰RPS12基因促进胃癌细胞凋亡作用可能是其作为上游基因通过下调Bcl-2基因表达而实现的。