靶向HER2的CAR T细胞构建与对膀胱癌细胞杀伤活性的探索研究

目的 制备特异性杀伤人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)表达阳性的膀胱癌细胞的嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T-Cell,CAR T）,初步探索HER2-CAR T细胞治疗膀胱癌的可行性。方法 首先免疫组化法检测膀胱癌患者石蜡组织切片中肿瘤细胞HER2表达情况,然后以赫赛汀单克隆抗体的单链抗体（single chain antibody fragment,scFv）序列作为CAR T的识别序列,构建包含铰链,共刺激分子（CD28和4-1BB胞内域）和CD3z的三代CAR T慢病毒质粒。使用293T细胞包装慢病毒,感染人源外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell, PBMC）细胞,制备HER2-CAR T细胞,并采用流式细胞术检测CAR的转导效率。将CAR T细胞分别与HER2表达阳性并且稳转构建表达荧光素酶的SK-BR3阳性对照细胞和MDAMB-468阴性对照细胞及T24膀胱癌细胞共培养,采用荧光素酶报告基因检测法检测杀伤...