蛋白质组学技术及其在口腔医学中的应用

蛋白质组是后基因组时代出现的一个新兴研究领域.它的研究主要是先通过双向凝胶电泳和差异凝胶电泳等方法分离蛋白质,然后再用质谱技术和Edman测序法等方法进行鉴定.目前蛋白质组研究得到人们的关注,并且成为生物技术中的一个重要领域.本文就蛋白质组研究的主要技术及其在口腔医学领域中的应用作一综述.     

牙髓成纤维细胞传代培养与冻存复苏后生长情况比较

目的：比较牙髓成纤维细胞在体外传代培养及冻存复苏后细胞生长情况的差异,探讨其应用价值。方法：采用组织块培养法对牙髓组织标本进行体外成纤维细胞的原代及传代培养,观察成纤维细胞形态及生物学特性,选取第4代处于对数生长期的细胞梯度降温后置入液氮中（196℃）保存3个月,比较经传代培养细胞与复苏后成纤维细胞的生长情况,用MTT法分别绘制细胞生长曲线,比较细胞生长情况。结果：经冻存保存3个月后牙髓细胞复苏率超过80%,而细胞形态未见明显的改变。复苏后细胞生长较对照组慢,进入对数生长期的时间较对照组略长。但两者生长曲线基本一致。结论：牙髓成纤维细胞传代培养与冷冻复苏后形态及生长特性基本相同,冻存的成纤维细胞可以成功的复苏。     

2%利多卡因与4%阿替卡因对上颌牙齿不可复性牙髓炎患者麻醉效果比较

目的:比较2%利多卡因含1:100 000肾上腺素与4%阿替卡因含1:100 000肾上腺素对上颌牙齿不可复性牙髓炎颊侧浸润麻醉效果。方法:90例患者以随机双盲的方式接受2%利多卡因或4%阿替卡因颊侧浸润麻醉。45例接受利多卡因和45例接受阿替卡因。牙髓麻醉成功与否是注射之后用牙髓活力电测试仪来评估。测试仪最大读数为80同时患者无主观感觉,此时定性为麻醉成功。患者在治疗期间对疼痛的主观评价通过视觉模拟评分标尺记录。结果:注射后10 min之内,90例牙齿中65例麻醉成功,利多卡因注射后麻醉成功30例,阿替卡因注射后麻醉成功35例(P=0.24);49例接受了无痛治疗,利多卡因注射后无痛治疗20例,阿替卡因注射后无痛治疗29例。利多卡因和阿替卡因颊侧浸润麻醉后,麻醉起效时间相似(平均值±标准差分别为4.36±0.86 min、3.81±0.96 min;t=1.6;P=0.11)。结论:在上颌牙齿不可复性牙髓炎,利多卡因和阿替卡因的颊侧浸润麻醉效果无明显性差异。     

伢典微创化学机械去腐法在老年根面龋治疗中的应用

临床上治疗老年根面龋多采用常规法高速涡轮牙钻备洞以达到去净腐质,保证窝洞有足够的抗力形和固位形,使充填材料能保持更长时间及避免继发龋的发生为目的,此种方法的缺点是磨除过多健康牙体组织,磨牙时的压力和温度对牙髓造成一定程度的伤害,给患者带来痛苦及畏惧感,致使去腐不净和一定程度上的姑息治疗,充填物易脱落     

重组人白细胞介素-1β诱导人牙髓细胞蛋白质组的差异分析

目的分析重组人白细胞介素-1β（rhIL-1β）诱导前后牙髓细胞蛋白质的差异,鉴定2组间差异表达的蛋白质。方法采用双向凝胶电泳技术分离牙髓细胞全蛋白,获得对照组和诱导组牙髓细胞蛋白质图谱,Image Master2D Elit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。通过基质辅助的激光解吸飞行时间质谱对差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定,得到肽质量指纹图谱。结果比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达;质谱鉴定后,10个蛋白得到确认。结论牙髓细胞对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。鉴定了牙髓细胞中与rhIL-1β作用密切相关的2个差异蛋白,为探索早期牙髓炎的应答机制提供了新的线索和思路。     

重组人白细胞介素1β对人牙髓细胞蛋白质组的影响

目的 创建牙髓损伤模型,比较牙髓细胞在不同条件下蛋白质表达的异同;探讨重组人白细胞介素1β(recombinant human IL-1β,rhIL-1β)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulpcells,HDPC)蛋白质的影响及牙髓损伤机制.方法 在HDPC的培养液中加入rhIL-1β 12 h,用双向凝胶电泳分离HDPC全蛋白,获得对照组(未加rhIL-1β)及诱导组(加入rhIL-1β诱导)HDPC蛋白质图谱,Image Master2D Elit 5.0软件分析确认差异表达蛋白.结果 诱导组牙髓细胞中有39个蛋白质点差异明显,其中15个蛋白质点高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达.结论 rhIL-1β诱导HDPC后有多种蛋白质分子发生变化,双向凝胶电泳能够显示HDPC的全蛋白,而且能够发现差异表达蛋白质,这些差异表达蛋白质可能参与了牙髓细胞损伤的过程.     

组织块法培养成体人牙髓细胞的增殖及分化状态水

背景:人牙髓组织较少,对酶解消化的耐受性较差,经胰蛋白酶和胶原酶分步消化处理后,细胞贴壁数量少,生长缓慢,难以成功传代,组织块酶解法获得的牙髓细胞种类少,活性差.目的:探索组织块培养法在人牙髓细胞体外培养中的应用.设计、时间及地点:细胞观察实验,于2005/2007年在吉林大学和平校区及口腔医学院进行.材料:健康人正畸或阻生拔除的牙齿.方法:选取第三磨牙,取出牙髓,在少量DMEM培养液浸润下,将牙髓组织剪碎至1.0 mm×1.0 mm×0.5 mm组织块,将牙髓组织块移入含培养液的6孔板中.调整组织块密度至3～6块每孔,间距0.5cm均匀摆置.将6孔板倒置放入37℃、体积分数为5%CO2、饱和湿度条件的培养箱中,3h后翻转培养板,保持组织块贴壁生长,加培养液至2 mL后继续培养.4～6 d换液1次.细胞6～15 d从组织块边缘游出,在组织块周围形成生长晕.细胞渐进汇合时,以用0.25%的胰蛋白酶、0.02%EDTA的混合液消化2.0～3.0 min,按1:(2～3)的比例传代培养至25 mL培养瓶.原代培养细胞通过反复消化传代的方式逐渐获得纯化的成纤维样细胞.主要观察指标:采用免疫组织化学方法鉴定细胞形态,碱性磷酸酶值测定牙髓细胞分泌.MTT法绘制牙髓组织细胞生长曲线.结果:相差显微镜下,获得的牙髓细胞主要是典型成纤维细胞,形态多呈星形、长梭形,胞体丰满,胞浆均匀,核圆形或卵圆,核仁清晰.免疫组织化学检测显示,细胞表面波丝蛋白阳性、角蛋白阴性,碱性磷酸酶阳性.在接种于96孔平底培养板1 d后,细胞数量有所下降,但在接种2 d后数量又有所增加.此时细胞增加不很明显.4 d开始进入对数生长期,细胞增加显著,8 d进入平台期,9 d开始减少,整个细胞曲线呈"S"形.结论:采用组织块培养法从成体人牙髓组织中可以分离培养出细胞,在体外能有效增殖并保持低分化状态.     

双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HD-PCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2D Elit5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果:比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论:HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。     

利多卡因与阿替卡因对下颌磨牙不可复性牙髓炎患者无痛麻醉效果比较

目的比较利多卡因与阿替卡因在下颌磨牙不可复性牙髓炎下牙槽神经阻滞麻醉效果。方法回顾性分析自2015年8月至2016年1月在南京大学医学院附属口腔医院牙体牙髓科门诊因不可复性牙髓炎需要进行牙髓治疗的253例患者的临床资料。所有患者随机分为利多卡因组(132例)和阿替卡因组(121例)。利多卡因组患者接受2%利多卡因+1∶100 000肾上腺素下牙槽神经阻滞麻醉,阿替卡因组患者接受4%阿替卡因+1∶100 000肾上腺素麻醉。使用牙髓活力电测试仪评估牙髓麻醉成功与否。采用视觉模拟评分(VAS)记录并比较两组患者治疗期间对疼痛的主观评价。结果本研究253例患者,186例麻醉成功后施行牙髓摘除术,其中,利多卡因组患者主观评价无痛92.7%(88/95),阿替卡因组96.7%(88/91),两组间比较,差异无统计学意义(χ~2=1.87,P>0.05)。结论对于下颌磨牙不可复性牙髓炎,采用利多卡因或阿替卡因行下牙槽神经阻滞麻醉,无痛麻醉效果无明显性差异。     

双向电泳分析重组人白细胞介素-1β对人牙髓细胞的影响

目的：观察rhIL-1β对培养的HDPCs产生蛋白质的影响,揭示rhIL-1β与牙髓炎的关系。方法：在HD-PCs的培养液中加入rhIL-1β,用2-DE分离HDPCs全蛋白,获得对照组和诱导组HDPCs蛋白质图谱,ImageMaster2DElit 5.0软件分析确认差异表达蛋白。结果：比较对照组和诱导组蛋白质图谱,发现了39个蛋白质点差异明显。其中15个蛋白质点在诱导组高表达,新增13个蛋白质点,7个蛋白质点低表达,4个蛋白质点仅在对照组中表达。结论：HDPCs对rhIL-1β的应答反应是一个非常复杂的过程,多种蛋白质分子涉及其中。