重组NIS基因腺相关病毒的制备及其在甲状腺癌细胞系表达

目的探讨钠碘同向转运体（NIS）基因介导的甲状腺癌基因治疗的可行性。方法构建腺相关病毒载体质粒pGA—NIS，并采用磷酸钙沉淀法制备重组NIS基因的腺相关病毒rAAV—NIS，体外感染甲状腺癌细胞系FTC-133、8505C后，通过免疫荧光检测被感染细胞的NIS蛋白表达，并通过摄碘实验及NaClO4摄碘抑制实验验证其表达的NIS蛋白功能和特性。结果成功制备了重组NIS基因的rAAV—NIS，其感染肿瘤细胞所表达的NIS蛋白位于细胞膜上，且具有介导碘摄取的功能，以及被NaClO4抑制的特性，表明与正常甲状腺细胞的NIS具有相同的功能和特性。感染细胞的碘摄取较未感染细胞明显增高。结论rAAV—NIS能介导甲状腺癌细胞的碘摄取，为甲状腺癌NIS基因介导的基因治疗提供了实验依据。     

重组杆状病毒载体在哺乳动物细胞中的表达

目的探讨重组杆状病毒作为哺乳动物基因转导载体的可行性及其转导特点.方法应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,以不同MO1的病毒和不同终浓度丁酸钠感染各哺乳动物细胞系.通过荧光倒置相差显微镜和流式细胞仪观察检测细胞转导率和绿色荧光蛋白(GFP)表达强度.结果发现HEK293细胞中,Bac-GFP转导率和GFP表达强度随着MOI和丁酸钠浓度的提高而显著增高(P<0.01),报告基因GFP的表达第2 d最高,至少可持续9 d.Bac-GFP可感染不同种属不同组织的哺乳动物细胞系,但转导率有差异.结论重组杆状病毒可以用于体外基因转导.     

杆状病毒介导NIS基因放射治疗甲状腺癌的实验研究

目的探讨重组钠／碘同向转运体(NIS)基因杆状病毒介导甲状腺癌细胞放射性碘治疗的可行性。方法构建杆状病毒载体质粒(pFBNIS)并制备重组NIS杆状病毒(BacNIS)，体外感染甲状腺癌细胞，通过免疫荧光检测NIS蛋白的表达，通过动态摄碘及NaC104摄碘抑制实验观察表达蛋白的功能和特性；进行^131I杀伤细胞的克隆形成实验。结果成功构建了重组NIS杆状病毒，受巨细胞病毒(CMV)极早期基因启动子调控；BacNIS体外感染的甲状腺癌细胞表达的NIS蛋白具有摄碘功能和NaC104抑制的特性；BacNIs感染的肿瘤细胞可被^131I有效杀伤。结论BacNIS是介导肿瘤细胞摄碘的有效方法，为杆状病毒介导NIS基因治疗失分化甲状腺癌转移灶提供依据。     

杆状病毒介导内皮抑素抗兔动脉粥样硬化作用

目的研究分泌型重组杆状病毒介导内皮抑素体内抗动脉粥样硬化的作用.方法采用髂动脉内膜剥脱联合高脂喂养法建立兔髂动脉粥样硬化模型.造模后第2周,对照组和实验组分别肌肉注射空载杆状病毒rBac-GFP和携带人内皮抑素基因的分泌型重组杆状病毒rBac-hEndo 各1×109 pfu,比较治疗前后肝肾功能变化.于治疗2周后处死动物,取病变部位血管观察其病理学改变.结果肝肾功能检测结果表明,rBac-hEndo治疗未发生肝肾毒性反应;组织学观察显示,治疗2周后,病变血管内膜增厚和管腔狭窄程度较对照组显著减轻,且内膜新生血管明显减少.结论分泌型重组杆状病毒rBac-hEndo通过介导兔体内骨骼肌分泌内皮抑素,有效抑制动脉粥样硬化斑块生长,且安全性高.     

杆状病毒介导内皮抑素抗兔动脉粥样硬化作用

目的研究分泌型重组杆状病毒介导内皮抑素体内抗动脉粥样硬化的作用。方法采用髂动脉内膜剥脱联合高脂喂养法建立兔髂动脉粥样硬化模型。造模后第2周,对照组和实验组分别肌肉注射空载杆状病毒rBacGFP和携带人内皮抑素基因的分泌型重组杆状病毒rBachEndo各1×109pfu,比较治疗前后肝肾功能变化。于治疗2周后处死动物,取病变部位血管观察其病理学改变。结果肝肾功能检测结果表明,rBachEndo治疗未发生肝肾毒性反应;组织学观察显示,治疗2周后,病变血管内膜增厚和管腔狭窄程度较对照组显著减轻,且内膜新生血管明显减少。结论分泌型重组杆状病毒rBachEndo通过介导兔体内骨骼肌分泌内皮抑素,有效抑制动脉粥样硬化斑块生长,且安全性高。