高压液相色谱纯化肾综合征出血热病毒血凝素及其性状分析

用吐温８０－乙醚（ＴＥ）法、蔗糖－丙酮（ＳＡ）法、丙酮－乙醚（ＡＥ）法分别从肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）感染的Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞培养和乳小白鼠脑组织中制备病毒血凝素（ＨＡＮ），定量对比证明其制备效果，结果无明显差异。粗制ＨＡＮ经高压液相色谱（ＥＰＬＣ）纯化，有４个洗脱峰，血凝活性物质存在于峰１。纯化ＨＡＮ在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中呈单一区带，分子量５６．６ＫＤ，ＨＡＮ相对含量７９．６％。纯化ＨＡＮ在蔗糖密度梯度液中有一条１．１５～１．１６ｇ／ｃｍ３的沉淀，粗制ＨＡＮ有３条沉淀。电镜观察纯化ＨＡＮ中为大小相等的球状颗粒。粗制ＨＡＮ的高密度沉淀中可见到病样颗粒。对几种常用消毒剂、氧化剂、去垢剂对ＨＡＮ的灭活作用做了实验对比观察。     

乳铁蛋白(Lf)抗病毒感染研究进展

乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)是转铁蛋白家族中的一种铁结合糖蛋白,在动物和人体内分布较广.它不仅能促进对铁的吸收、调节胚胎发育和细胞繁殖,而且在免疫调节和防御细菌、真菌和病毒中发挥重要作用.现就Lf抗病毒的研究作一综述.     

HPLC法测定清热解毒方芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定清热解毒方中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱:KromasilC₁₈(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸(85∶15)为流动相,流速:1.0mL·min^-1,检测波长:254nm,柱温:35℃。结果:芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚分别在1.0125～16.2μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、1.025～16.4μg、0.625～10μg范围内呈良好线性关系,相关系数分别为0.9991,0.9998,0.9997,0.9994,0.9996,平均回收率分别为101.4%,102.0%,101.7%,102.1%,100.8%。结论:该方法操作简单、准确,且重复性好,可作为清热解毒方质量的控制指标之一。     

汉滩病毒S基因5''端311bp编码蛋白的原核表达、纯化及其抗原性分析

目的进一步了解汉滩病毒核蛋白氨基端的抗原特性. 方法构建汉滩病毒S基因5端311 bp片段的原核表达载体,并诱导表达和纯化了Mr 3.6×104的融合蛋白(汉滩病毒核蛋白氨基端Mr 1.0×104与Mr 2.6×104 GST融合);用mAb,以Western-blot和ELISA方法对该蛋白的抗原位点进行了鉴定. 结果与完整核蛋白反应的mAb中仅有部分与Mr 3.6×104融合蛋白反应,而与核蛋白氨基端Mr 2.6×104片段反应的5株mAb(1A8,A35,8E8,3A9,3G11)都能与Mr 3.6×104融合蛋白反应. 结论汉滩病毒核蛋白氨基端Mr 1.0×104以内存在一个或几个线性表位,而羧基端可能主要起着维持完整核蛋白立体构象的作用,并影响识别立体表位的mAb与该蛋白的结合.     

发光剂标记物的制备及质量鉴定

<正> 化学发光免疫测定法(Chemiluminescent immunoassay,CLIA)是一种以化学发光反应示踪抗原抗体间特异性免疫反应的微量检测技术。本实验室用几种不同的方法制备了鲁米诺-羊抗人IgG和ABEI-羊抗人IgG结合物,同时做了质量鉴定,现将结果报告如下。     

培养基对鼠杂交瘤的影响:杂交瘤活性、细胞增殖和抗体产生最佳条件的确定

由于培养基的选择对杂交瘤的表型有深刻影响,所以检测所使用的培养基是否为杂交瘤的增殖、维持生长以及抗体的产生提供了最佳条件是很有意义的。本文作者选用了三种来自不同亲代骨髓瘤的杂交瘤系对8种培养基进行了实验,初步鉴别出了最佳的培养基配方。 杂交瘤细胞系培养基配方如表1。另添加4.0mML-谷氨酰胺,10~(-4)M次黄嘌呤,10(-5)M胸腺嘧啶核苷,10u/ml青霉素和10μg/ml链霉素以及20％的小牛血清。     

凉血活血方对脓毒症大鼠白细胞系列黏附分子表达的影响

目的:研究凉血活血方对脓毒症大鼠白细胞黏附分子表达的影响,探讨其药理作用机制。方法:Wistar大鼠90只,雌雄各半,随机分为假手术组(10只)、模型组(20只)、凉血活血方治疗组(分为大,中,小剂量组,每组20只)。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型,造模同时分别进行灌胃治疗,给予大,中,小剂量的活血凉血方浸膏,观察72h动物死亡率;在造模72h后腹主动脉取血抗凝,溶血素处理后,分别加入不同荧光素标记的CD11b、CD31、CD54、CD62L抗体,经流式细胞仪检测白细胞表面4种黏附分子的表达情况;行气管插管进行肺泡灌洗,收集分离白细胞,流式细胞术检测4种黏附分子的表达情况;留取肝、肺及末段回肠组织,检测髓过氧化物酶(MPO)活性。结果:模型组大鼠血中及肺泡灌洗液中白细胞黏附分子CD11b、CD31、CD54、CD62L表达较假手术组显著增高;大,中剂量凉血活血方治疗可显著降低模型大鼠血中及肺泡灌洗液中白细胞CD11b、CD31、CD54、CD62L表达,显著降低肝、肺及末段回肠组织MPO活性;凉血活血方大剂量组动物死亡率显著降低。结论:脓毒症状态下白细胞黏附因子的异常高表达及其与血管内皮的黏附作用可介导多种脏器功能障碍,活血凉血中药可通过抑制血管内皮系列黏附分子高表达而发挥治疗作用。     

汉滩病毒S、M基因部分片段嵌合基因原核载体的构建及表达产物的鉴定

目的　将汉滩病毒核蛋白 (NP)主要抗原位点活性片段与囊膜糖蛋白G2进行融合原核表达及鉴定 ,为该融合蛋白的真核表达及汉滩病毒基因工程疫苗研究打基础。方法　构建了汉滩病毒 76 - 118株M基因G2 片段与S基因 5’端70 0bp片段的嵌合片段原核表达载体pGEX - 4T1-G2 S0 7,诱导表达相应的融合蛋白 ,用Westernblotting和ELISA方法进行鉴定。结果　酶切结果显示成功构建了原核表达载体 pGEX - 4T1-G2 S0 7。IPTG诱导表达 4h后 ,Westernblotting显示诱导出分子量约 10 0kD的含GST的融合蛋白 (GST -G2 N0 7)。ELISA结果表明该融合蛋白与抗汉坦病毒NP特异性McAb有较高的结合活性 (P/N值为 0 71/ 0 0 7) ,与抗汉滩病毒糖蛋白特异性McAb也有较弱的结合活性 (P/N值为 0 2 1/ 0 0 8)。结论　S、M基因拼接方式是成功的 ,能够表达出有活性的汉滩病毒G2 糖蛋白与NP片段的融合蛋白。     

中药及其有效成分调节小鼠成纤维细胞瘤细胞活性的研究

目的动态观察6种中药或有效成分对小鼠成纤维细胞瘤细胞(L-929细胞)活性的影响,筛选出对其有效的药物。方法以传代培养的L-929细胞为靶细胞,以MTT比色法测定细胞活性。每种药选择3个浓度,连续观测5个时间点。结果经统计学分析,复方丹参注射液等6个药物与对照组相比对L-929细胞有一定的抑制作用,而且某些药的不同浓度之间的抑制作用也有显著差异。肿瘤坏死因子与其他药物作用比较抑制作用最为明显。结论本实验系统正确、可靠,复方丹参注射液等6种药物有不同程度的抑制L-929细胞活性的作用。