SAK-HV蛋白通过上调ABCG5/ABCG8的表达降低胆固醇的吸收

目的：通过动物实验和体外细胞实验探讨SAK－HV蛋白降胆固醇的机制。方法以0．5mg／kg浓度的SAK－HV蛋白治疗高脂喂养的ApoE－／－C57小鼠,酶法检测ApoE－／－C57小鼠血脂水平,定量PCR法（ real－time quantitative PCR,qPCR）和蛋白质印迹（ Western blot）法检测小肠ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白的表达水平。100μg／ml的SAK－HV蛋白作用caco－2细胞不同时间后,NBD胆固醇作为荧光探针检测SAK－HV蛋白对caco－2细胞胆固醇吸收的影响,q－PCR和Western blot法检测SAK－HV蛋白对caco－2细胞ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 SAK－HV蛋白可以降低高脂喂养的ApoE－／－C57小鼠的血清胆固醇水平,同时上调小肠ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白的表达水平。体外实验表明,SAK－HV蛋白可以抑制caco－2细胞胆固醇的吸收,同时上调ABCG5和ABCG8 mRNA和蛋白的表达水平。结论 SAK－HV蛋白通过上调ABCG5和ABCG8的表达抑制小肠胆固醇的吸收从而降低血清胆固醇水平。     

基于沙堡蠕虫和贻贝黏蛋白的融合基因构建及其在昆虫细胞中的表达

目的 构建基于贻贝足蛋白（Mfp）和沙堡蠕虫分泌蛋白（Pcs）的融合基因,并实现其在昆虫细胞中的表达,为新型黏附材料研制奠定基础。方法 理性设计基于Mfp和Pcs的融合分子,通过PCR扩增得到目的基因,再通过pFastBacHBM载体所介导的平末端克隆以及DH10Bac所介导的转座合成带有目的基因的重组杆状病毒质粒（Bacmid DNA）,利用昆虫表达系统生成携带目的基因的杆状病毒,并通过病毒感染细胞实现融合蛋白Pc1-Mfp5的可溶性表达。结果 测序结果显示,重组载体构建成功。病毒滴度测试显示,收获高滴度的杆状病毒。SDS-PAGE以及Western印迹分析表明,Pc1-Mfp5融合蛋白在昆虫细胞中实现了可溶性表达。结论 成功构建pc1-mfp5融合基因,并实现了其在昆虫系统中的可溶性表达,为新型仿生黏附材料的研制奠定了基础。