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目的 构建带有FLAG标签的Y盒结合蛋白1(YB-1)真核表达载体,转染至HepG2肝癌细胞探究YB-1对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法 以人卵巢文库为模板并采用PCR扩增出YB-1基因片段,经双酶切后与pcDNA3.0-FLAG载体连接,构建pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核表达载体;将其转染至HepG2细胞,通过Western blot法验证YB-1在HepG2细胞的表达;CCK-8法和集落形成实验验证YB-1对HepG2细胞生长的影响;划痕实验验证YB-1对HepG2细胞迁移的影响。结果 成功构建出pcDNA3.0-FLAG-YB-1真核重组表达载体,且能在HepG2细胞中表达YB-1蛋白;YB-1能够促进HepG2细胞的增殖和迁移。结论 YB-1促进HepG2细胞的增殖和迁移。 相似文献
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目的 构建透明质酸介导运动受体(HMMR)真核表达重组质粒并在乳腺癌ZR75-1细胞中转染和鉴定,探究HMMR对乳腺癌细胞生长、增殖和迁移的影响.方法 采用PCR技术以人乳腺文库为模板扩增HMMR基因并与pcDNA3.0-FLAG载体在EcoR V和Xho Ⅰ酶切位点进行连接,构建真核表达载体(pcDNA3.0-FLAG-HMMR),并转染乳腺癌ZR75-1细胞;通过Western印迹法、CCK8实验和克隆形成检测HMMR基因表达对ZR75-1生长的影响,划痕实验验证真核表达载体对ZR75-1细胞迁移的影响.结果 经酶切鉴定及序列测序验证真核重组表达载体构建成功,并在ZR75-1细胞中表达;并且发现HMMR对ZR75-1细胞的增殖和迁移具有显著的促进作用.结论 构建的真核表达载体转染至ZR75-1细胞后,明显促进ZR75-1增殖和迁移,这为研究HMMR基因在乳腺癌发生发展机制奠定了基础. 相似文献
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