60Coγ射线辐射致LyGDI断裂对K562细胞的延迟性凋亡作用

目的 采用不同剂量的⁶⁰ Co γ射线照射人红白血病细胞系K562,探究鸟苷酸解离抑制因子-2(LyGDI)在细胞延迟性死亡中的作用以及其调控机制。方法 细胞流式仪PI单染检测细胞周期,藻红B染色观察细胞的凋亡,Western blot分析LyGDI和Rac1蛋白的表达,免疫荧光检测Rac1蛋白在细胞内的分布。结果 K562细胞被阻滞在G₂/M期的百分率为71.3%,K562细胞早期凋亡率较低,8 Gy ⁶⁰ Co γ射线照射后24 h,凋亡率为14%,呈现出延迟性的细胞凋亡;K562细胞在4 Gy的γ射线照射24 h后,可见LyGDI发生断裂,总的Rac1蛋白表达未发生明显变化,但其在细胞内的分布发生改变,Rac1转移至细胞膜上与少量核内分布,Rac1脱离LyGDI而激活。结论 LyGDI具有增加细胞延迟性凋亡的作用,其断裂使Rac1转移至细胞膜上,诱导Rac1的激活,从而促进了细胞的凋亡。     

miRNA-34c对肺腺癌A549细胞的辐射增敏效应

目的研究肺腺癌A549细胞中miRNA-34e的辐射增敏效应。方法单独转染miRNA．34e序列或单独照射或转染和照射联合处理细胞后,采用MTT比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,藻红B染色法观察细胞凋亡率,Westernblot检测p53蛋白的表达。结果转染联合照射处理组的抑制率及凋亡率都较单独转染或单独照射组明显增高（均P〈0．05）,且随miR-34e转染浓度的增加而增高（均P〈0．05）。细胞周期检测结果显示,细胞明显阻滞于G1／G0期（P〈0．05）。联合处理的细胞p53蛋白表达量较单独照射组增加,且呈miRNA．34c浓度依赖性增加（P〈0．05）。结论miRNA-34c对肺腺癌细胞A549有辐射增敏效应,可强化p53蛋白的表达,诱导细胞G1／G0期阻滞和凋亡。     

酸性核糖体蛋白P2在紫外线诱导的肿瘤细胞快速凋亡中的功能

目的研究酸性核糖体蛋白P2在紫外线（UV）诱导的细胞快速凋亡中的分子信号功能。方法选取小鼠淋巴瘤细胞3SB、人白血病细胞Jurkat、人宫颈癌细胞HeLa S3和人乳腺癌细胞MCF-7来研究其对UV诱导细胞凋亡的差异性。UV照射后,荧光显微镜活细胞染色计数分别观察细胞的凋亡形态学变化和凋亡率;Western blot分析凋亡相关的标志性蛋白的表达。并分别提取细胞质蛋白和细胞总蛋白,利用小型二维电泳、Western blot技术分析细胞质中游离的酸性核糖体蛋白P2的变化和总的P2的表达。结果 3SB和Jurkat细胞在UV照射后,24 h的凋亡率达100%,并观察到PARP和P21的激活;而HeLa S3和MCF-7细胞出现延迟性细胞凋亡。在快速凋亡的Jurkat细胞中,发现酸性核糖体蛋白P2去磷酸化。总的P2表达降低,存在剂量效应,并伴随着凋亡蛋白PARP的激活。结论酸性核糖体蛋白P2的去磷酸化及其在细胞内总量降低与UV诱导的细胞快速凋亡相关。