家猪自然感染汉坦病毒与肾综合征出血热关系的分子流行病学调查

目的:为了解家猪在肾综合征出血热(HFRS)疫区的流行病学意义,探索家猪感染汉坦病毒(HV)与HFRS发病的关系。方法:采用间接免疫荧光法(IFA)、反向间接血凝法(RPHA)、免疫酶染色法、RT-PCR检测HV抗原与抗体,同时分离HV。结果:在家猪心、肺、肝、脾、肾等脏器及其血液、尿、粪、唾液等标本中检出HV抗原与抗体,并从多种HV抗原阳性标本分离到HV,证实家猪对HV易感,而且遍及多种脏器组织。以HV抗原阳性的组织、血液及排泄物等二次感染成功。同时从乳猪脾、肺、肾和脑组织检出HV抗原,表明HV似乎可直接进入中枢神经系统参与损伤。结论:家猪具备作为HFRS扩散宿主的先决条件。     

小干扰RNA技术下调视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50中Survivin基因表达的研究

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术沉默视网膜母细胞瘤细胞株SO-Rb50中凋亡抑制因子Survivin的表达,观察其干扰效果及对细胞的影响.方法 实验研究.体外化学法合成针对人Survivin基因的特异性小干扰RNA(siRNA)和对Survivin基因无沉默效果的阴性对照siRNA,利用转染试剂分别将siRNA转入SO-Rb50细胞株,通过半定量RT-PCR和Western blot检测其对SO-Rb50细胞中Survivin基因和蛋白表达的抑制作用,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度siRNA对细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测转染后细胞凋亡率和细胞周期改变,荧光显微镜下观察细胞凋亡形态.对多组间数据比较采用单因素方差分析,处理组与对照组比较采用Dunnett-t检验.结果 Survivin特异性siRNA转染细胞24 h后Survivin mRNA和蛋白表达水平明显下调,对照组中其表达则无明显改变.MTT法结果显示Survivin特异性siRNA浓度为35、70、100 nmol/L时均对SO-Rb50细胞增殖具有抑制作用(P＜0.05),且具有剂茸依赖性.流式细胞仪检测发现Survivin特异性siRNA组出现凋亡亚二倍体峰,细胞被阻滞于G0/G1期,较对照组增加了8.11%,G2/M期细胞比例减少了5.75%,S期细胞仅减少了2.26%.荧光显微镜下可见部分细胞出现染色质浓缩和凋亡小体等典型的凋亡形态学变化.结论 针对Survivin的RNA干扰技术可有效地下调SO-Rb50细胞中Survivin基因表达,进而抑制SO-Rb50细胞增殖和诱导其凋亡,为视网膜母细胞瘤的基因治疗提供了重要的途径.     

体外培养诱导生精细胞减数分裂及其在辅助生殖中应用的新进展

生精阻滞所致的男性不育一直是医学治疗的难题，体外培养克服生精阻滞是解决这一问题的方法之一。为此研究者们摸索了多种培养方法，包括曲细精管培养、牛精细胞与支持细胞共培养，同时还有双室培养系统、藻酸钙培养系统、微重力细胞培养系统、胶原凝胶基质三维培养系统等。在多种培养体系中已将多种哺乳动物的精原和精母细胞培养成圆形或长形精子细胞，并且采用体外培养的人精子细胞已经有婴儿诞生，但是仍需继续探索更稳定的人生精阻滞细胞体外培养体系。     

体外培养方法诱导大鼠精母细胞减数分裂

目的:探讨大鼠睾丸精母细胞在体外减数分裂、分化为精子细胞或精子的可能性。方法:取出生后20-22dWistar大鼠睾丸组织,经胶原酶消化分离细胞,分别用含2%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基(对照组)和含2%FBS的DMEM/F12培养基+多种性激素+多种细胞生长因子等(实验组)作体外培养,于培养后d3、d7、d14收集细胞,采用流式细胞技术,检测培养前后生精细胞染色体倍体的变化;RT-PCR法检测精子细胞特异性基因过渡蛋白1(TP1)mRNA的表达。结果:培养d2,可见支持细胞贴壁生长,生精细胞粘附于支持细胞表面,实验组生精细胞存活率>90%,对照组<5%;培养14d,实验组可见长有鞭毛的长形精子细胞。流式细胞检测结果显示,培养前生精细胞为二倍体和四倍体细胞群,培养d14实验组单倍体细胞占总细胞数的6.2%,对照组未见单倍体峰。RT-PCR结果显示与流式细胞技术检测结果一致:培养前生精细胞未检测到TP1mRNA的表达,培养7d后实验组可检测到该基因的表达,培养14d,其表达量显著增加。结论:采用生精细胞与支持细胞混合培养并在培养液中添加性激素、细胞生长因子等的方法,大鼠精母细胞可以在体外进行减数分裂,分化成长形精子细胞。