LPS对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的研究细菌脂多糖（LPS）对大鼠肺微血管内皮细胞（rat pulmonary microvascular endothelial cell，RPMVEC）Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate，SSeCKS）表达和细胞内定位的影响，探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法用植块培养法体外培养大鼠肺微血管内皮细胞，用抗大鼠CD31抗体进行细胞鉴定。LPS刺激体外培养的RPMVEC，用定量PCR、免疫印迹方法检测LPS刺激RPMVEC不同时间SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况；用0．05μmol／L蛋白激酶C（PKC）抑制剂（Calphostin C）预处理RPMVEC30min后再用LPS刺激6h，免疫荧光细胞化学法观察Calphostin C对LPS诱导SSeCKS与纤维状肌动蛋白（filamentous—actin，F-actin）细胞内定位和结构改变的影响。结果定量PCR结果显示LPS刺激RPMVEC1h后SSeCKS表达水平达到最高，Westernblot结果与定量PCR结果相一致，同时，LPS以时间依赖的方式诱导SSeCKS磷酸水平增加。免疫荧光结果显示LPS刺激后，F-actin发生重构，细胞内形成应力纤维，SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足末端聚集；Calphostin C部分抑制LPS对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论LPS能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加和细胞内定位改变，PKC参与I娲诱导内皮细胞F-ac，6n的重构和SSeCKS重新分布；提示SSeCKS可能与LPS诱导内皮细胞F-actin的重构有关。     

分级诊疗制度的实施对三级医院病案质量管理影响与对策

病案文书是患者在住院期间医疗活动的原始记录,是综合评价医院医疗质量、技术和管理水平的重要依据.随着分级诊疗制度的逐步落实,三级综合性医院定位发生转变,着重对危重、疑难及复杂病例的诊治,对病案质量及其管理提出了严峻考验.本研究以上海交通大学医学院附属第九人民医院为例,收集其分级诊疗制度推行前后疑难危重患者占比等数据,结合...     

突触后密度蛋白-95在大鼠坐骨神经损伤后的表达

为了探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在周围神经损伤过程中的表达变化,本实验建立大鼠坐骨神经夹伤模型,采用荧光定量PCR(real-timePCR)和Western blotting对PSD-95 mRNA及其蛋白水平进行定量检测,应用免疫荧光双标技术观察PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)的共定位情况。结果显示,PSD-95 mRNA及其蛋白在正常坐骨神经中度表达,损伤后迅速下降;PSD-95 mRNA从损伤后2d开始表达上调;而其蛋白水平于损伤后1周明显升高。免疫荧光双标染色证实在坐骨神经损伤后1周PSD-95与nNOS共定位于Schwann细胞上,而与神经丝蛋白NF-200共定位不明显。本研究结果提示PSD-95通过nNOS参与了周围神经损伤修复过程。     

p27kip1和Skp2在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化

为了探讨损伤后周围神经p27kip1和S期激酶相关蛋白2(Skp2)的定位表达和变化,本实验将成年SD大鼠随机分为正常对照组、夹伤组和切断组,运用Western blot结合免疫组织化学及免疫荧光双标,在大鼠坐骨神经损伤时,对p27kip1和Skp2表达的影响进行了研究。结果表明:(1)坐骨神经夹伤后,p27kip1蛋白表达先逐渐下降,后又逐渐上升;坐骨神经切断后,远侧段p27kip1蛋白表达持续下降,而近侧段p27kip1蛋白表达在切断后6h明显下降,后又逐渐升高至正常水平,而Skp2表达变化与之相反;(2)免疫组织化学染色结果显示,坐骨神经切断后1w,远侧段从断端到末端,p27kip1阳性信号逐渐增加,而Skp2阳性信号逐渐减弱;(3)免疫荧光双标显示,正常和损伤坐骨神经的雪旺氏细胞中都有p27kip1和Skp2表达。以上结果提示:周围神经损伤后影响雪旺氏细胞中p27kip1和Skp2的表达变化,为进一步研究它们在周围神经损伤和修复中的作用机制奠定基础。     

正、反义β-1,4-半乳糖基转移酶V表达质粒在星形胶质细胞瘤细胞中的转染与鉴定

目的：构建β-1，4-半乳糖基转移酶-V(β-1，4-GalTV)正、反义表达质粒，并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中，为探讨神经胶质瘤细胞表达β-1，4-GalTV的生物学意义提供研究基础。方法：构建β-1，4-GalTV表达质粒，并将其转染到人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中；用Western印迹和Northern印迹鉴定转染情况。结果：通过酶切鉴定和测序分析，实验成功构建β-1，4-GalTV表达质粒。将构建的表达质粒转染到胶质细胞瘤细胞SHG-44中，经鉴定表明，转染的正义表达质粒能增加胶质细胞瘤细胞SHG-44中的β-1，4-GalTV表达量，而转染反义质粒则能降低细胞中β-1，4-GalTV表达量。结论：正、反义β-1，4-GalTV表达质粒在人脑星形胶质细胞瘤细胞SHG-44中的稳定转染和表达，对分析胶质瘤细胞表达β-1，4-GalTV的意义如对肿瘤细胞的增殖、迁移和黏附等的影响提供了研究基础。     

多项举措改善Ⅰ类切口手术围手术期抗菌药物应用

目的评价某院采取多项举措干预Ⅰ类切口手术围手术期患者抗菌药物使用的效果,为抗菌药物合理应用提供依据。方法对2005-2012年该院每年4月份和10月份9 823例Ⅰ类切口手术患者进行回顾性调查,以2005年的数据为基线,2006-2012年采取培训、考核、监督、反馈及与相关部门合作等多项举措进行干预,比较干预前后抗菌药物使用情况。结果Ⅰ类切口手术围手术期患者抗菌药物使用合格率从2006年的14.20%提高至2012年的92.30%;2006-2009年抗菌药物联合用药率偏高（7.00%～9.00%）,2010-2012年呈下降趋势,2012年下降至3.20%。2006和2007年该院Ⅰ类切口手术预防使用抗菌药物种类与2005年（基线）基本相似,主要为头孢菌素类、青霉素及其复合制剂、氨基糖苷类;2008-2012年预防使用的主要抗菌药物是第一、二代头孢菌素,青霉素类及其复合制剂。多因素非条件logistic回归分析结果显示,年龄（40～59岁）、科室（骨科、普通外科和眼科）和年份（2011和2012年）是抗菌药物使用合格与否的主要影响因素（均P＜0.05）。结论采取多项举措进行干预可提高Ⅰ类切口手术围手术期抗菌药物使用合格率,减少使用抗菌药物种类,降低联合用药率。     

CLEC-2在中枢神经系统炎症中的表达意义

目的:研究C型凝集素家族重要成员C型凝集素样受体2(C-type lectin-like receptor-2,CLEC-2)在中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎症反应中的表达变化及其生物学作用.方法:在大鼠侧脑室内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)构建大脑炎症模型,运用Western Blot方法检测CLEC-2在LPS侧脑室内注射的大脑炎症及LPS诱导的原代小胶质细胞炎性活化模型中的蛋白表达变化;运用免疫荧光方法检测CLEC-2在大脑皮层中的细胞定位.结果:Western Blot显示大脑皮层中CLEC-2的蛋白表达呈现先上升后下降的趋势.免疫荧光分析显示CLEC-2与小胶质细胞存在共定位,且侧脑室注射LPS 12h后CLEC-2在小胶质细胞中的表达增加.在体外原代小胶质细胞活化模型中,CLEC-2和P-Syk蛋白的表达水平也明显升高.结论:脑炎症中CLEC-2表达上调,其主要定位在活化的小胶质细胞上,表明在中枢神经系统炎症中CLEC-2可能发挥着重要的作用.     

血管性血友病因子基因19内含子MspⅠ多态性与冠心病危险因素的关系

目的 :探讨血管性血友病因子 (vonWillebrandfactor ,vWF)基因 19内含子MspⅠ多态性与冠心病(CHD)危险因素的关系。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)技术结合MspⅠ酶切分析等 ,测定了 10 9例CHD患者和 10 4例健康对照者vWF基因 19内含子MspⅠ限制性片段长度多态性频率 ,同时应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术测定血浆vWF水平。结果 :①vWF基因 19内含子MspⅠ基因型与高血压间差异有统计学意义 ( P<0 .0 5 ) ,而与性别、年龄、糖尿病、高脂血症和吸烟等危险因素差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。②vWF基因 19内含子MspⅠ基因型在高危组和低危组的分布差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。③伴高血压患者中M-/M-基因型与M+/M+基因型和M+/M-基因型的血浆vWF水平之间无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :vWF基因 19内含子MspⅠ多态性可能与CHD的危险因素之一高血压有关。     

硫化氢对动脉粥样硬化的影响及其与 CX3CR1 的关系

目的在高脂饮食ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化模型中,探讨硫化氢对动脉粥样硬化斑块的影响及其与斑块内趋化因子受体CX3CR1的关系。方法10周龄、雄性纯合子ApoE基因敲除小鼠予以高脂饮食喂养,在高脂饮食喂养第4、8、12、24周时处死小鼠并留取血浆和主动脉,通过化学比色法和Western Blot技术检测血浆硫化氢水平和主动脉胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）表达情况。一部分小鼠在高脂饮食4或12周后开始每天予以硫化氢供体药物NaHS（1mg-kg^-1,i．P．）或生理盐水。高脂饮食24周后,通过超声生物显微镜成像技术评估小鼠主动脉及其主要分支内的动脉粥样硬化情况,随后处死小鼠并留取主动脉,通过H＆E染色和免疫组化技术进一步观察小鼠头臂干动脉粥样斑块的病变情况及CX3CR1的表达水平。结果在动脉粥样硬化斑块形成早期,即出现了CSE表达水平的显著降低,随着斑块的进展,CSE的表达水平进一步下调和CSE活性明显下降,最终导致血浆硫化氢水平的显著降低。动脉粥样硬化早期或中晚期予以NariS均可显著延缓动脉粥样硬化斑块的形成和进展,但是NaHS早期干预,其抗动脉粥样化的益处显著优于中晚期干预。NariS的抗动脉粥样硬化益处可能与其抑制斑块内CX3CR1的表达有关。结论动脉粥样硬化过程中存在着内源性硫化氢代谢紊乱,予以NaHS干预可抑制斑块内CX3CR1的表达和延缓动脉粥样硬化的进展,早期NaHS干预的疗效显著优于中晚期干预。