基于多重PCR的呼吸道病毒纳米孔测序快速检测的方法学研究

目的 通过对多重PCR扩增条件的优化和纳米孔测序中病原微生物检测特异性及灵敏度的评价,建立一种由多重PCR和纳米孔测序技术相结合的检测技术体系,满足对呼吸道病毒现场快速检测鉴定的需求。方法 首先针对呼吸道病毒设计特异性引物,其次优化PCR扩增条件,建立快速测序体系,最后对不同浓度的病原体进行扩增与测序鉴定,评价检测体系的灵敏度。结果 优化后的多重PCR检测体系在退火温度为55℃、引物添加浓度为0.1μmol/L时,可同时检出25种呼吸道病毒,检测灵敏度可达1×10⁴拷贝/ml,整体检测时间在4 h以内。结论 该方法简单快捷,能够实时获取扩增片段的序列信息,特异性强,灵敏度较高,有望为呼吸道病原体的快速筛选和现场检测鉴定提供有力技术支撑。     

多重PCR和纳米孔测序结合检测消化道病原体方法及其评价

目的 建立多重PCR和纳米孔测序相结合的检测方法,为实现消化道病原体现场高灵敏度快速检测奠定基础。方法 通过设计消化道病原体特异性引物,验证引物特异性,优化多重PCR扩增条件,构建快速建库测序体系,对病原体的检测灵敏度进行评价。结果 建立的12种消化道病原体多重PCR检测体系可以对所有靶序列进行有效扩增。经测序检测,当引物池中每条引物浓度为0.1μmol/L时,12种病原体混合DNA模板和3种轮状病毒A、B、C的混合RNA样品检测灵敏度均可达到10³拷贝/ml。结论 该方法可在短时间内完成消化道病原体的鉴定,提升突发公共卫生事件中现场病原体检测效率,有望在疫情防控中发挥重要作用。