自体血小板血浆对角膜基质细胞生物学功能的影响

目的 观察自体血小板血浆对体外培养的角膜基质细胞生物学功能的影响.方法 采用二次离心法分离兔全血获得富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)和贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP);原代培养兔角膜基质细胞,取第3代细胞用于实验.在角膜基质细胞中分别加入体积分数5.0%的PRP和PPP,倒置显微镜下观察细胞生长情况,对比PRP和PPP对角膜基质细胞的促生长情况,以确定自体血小板血浆中促增殖作用的最有效成分.采用不同浓度的PRP(体积分数分别为2.5%、5.0%、10.0%)作用于角膜基质细胞,以及采用不同浓度PRP(体积分数分别为2.5%、5.0%、20.0%)联合FBS作用于角膜基质细胞,CCK-8法检测PRP、PRP联合FBS促进角膜基质细胞增殖的作用.对不同浓度(体积分数分别为2.5%、5.0%)PRP作用的角膜基质细胞进行免疫荧光法检测其表达的平滑肌型肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA).结果 加入体积分数5.0%PRP组促细胞增殖作用强于加入体积分数5.0%PPP组.PRP在体积分数为2.5%～10.0%时,均能促进角膜基质细胞的增殖,其中体积分数为5.0%时作用最强;体积分数5.0%PRP与FBS联合作用时的吸光度值随时间的变化均明显高于两者单独作用时的吸光度值(均为P<0.05),而体积分数20.0%的PRP与FBS联合作用时的吸光度值随时间的变化低于FBS单独作用时的吸光度值.不同浓度PRP处理的角膜基质细胞均可见α-SMA的阳性表达.结论 低浓度的PRP能有效促进角膜基质细胞的增殖及活化,有利于角膜基质损伤的快速修复,促进伤口愈合,防止严重并发症的发生.     

鼠神经生长因子在外伤性视神经挫伤中的应用研究

目的 探讨鼠神经生长因子在外伤性视神经挫伤中的应用效果.方法 选取2018年4月至2021年1月安阳市眼科医院收治的65例外伤性视神经挫伤患者作为研究对象,并按照随机数表法将其随机分为研究组(33例)与对照组(32例),对照组患者采用常规药物治疗,研究组患者在对照组治疗的基础上联合应用鼠神经生长因子治疗,对比两组患者治...     

一种培养原代小鼠角膜基质细胞的新方法

目的改良小鼠角膜基质细胞分离培养方法 ,为角膜基质细胞生物学和角膜组织工程等研究提供更好的种子细胞。方法采用Dispase酶消化法联合组织块贴壁法分离、培养原代小鼠角膜基质细胞,倒置显微镜下观察细胞生长情况,通过间接免疫荧光化学染色Vimentin表型和RT-PCR检测Vimentin、Lumican和CK12基因表达对培养的细胞进行鉴别。结果倒置显微镜下可见小鼠角膜基质细胞呈三角形和树枝状,细胞间连接明显,可形成网状连接;免疫荧光化学鉴定小鼠角膜基质细胞表达Vimentin阳性;RT-PCR显示Vimentin和Lumican基因表达阳性,CK12表达阴性。结论 Dispase酶消化法联合组织块贴壁法培养可获得具有角膜基质细胞特性的细胞,本方法为体外获得单纯小鼠角膜基质细胞提供了简单高效的途径。     

有序排列微模板培养角膜基质细胞及其细胞生物学变化

目的探讨CO2激光打标机处理的有序排列微模板培养兔角膜基质细胞的生长特征及其细胞生物学变化。方法用CO2激光打标机刻制的聚苯乙烯有序排列微模板培养兔角膜基质细胞,模板沟槽划线间隔距离0.25mm者为窄间隔组,间隔距离1mm者为宽间隔组,平板组作为对照组。将角膜基质细胞悬液以1×10^5/mL细胞密度接种于培养板中,倒置显微镜下观察细胞生长情况,苏木精-伊红染色观察细胞排列的形态学差异,免疫荧光法检测培养板上细胞的波形蛋白,实时监测显微镜下观察24h窄间隔组细胞的接触指引特性及细胞的动态生长过程。结果培养第1天倒置显微镜下见3组培养细胞贴壁生长状态无明显区别,窄间隔组和宽间隔组细胞逐渐围绕沟槽接触指引生长,表现为有序排列,且窄间隔组较宽间隔组明显。苏木精-伊红染色和免疫荧光染色显示培养的细胞在窄间隔组沟槽的接触指引下呈有序排列,呈现10余层细胞排列的平行板层结构。3组细胞波形蛋白免疫荧光染色均呈阳性反应。实时监测显微镜下可见窄间隔组细胞体部首先贴壁,在接触指引下生长,而细胞在干燥环境下的凋亡始于细胞伪足突起处。结论利用CO2激光打标机制备的有序排列微模板可获得有序排列的角膜基质细胞,有利于在接近生理状态条件下角膜基质层的构建。     

PACAP38对兔角膜瓣术后三叉神经节细胞及角膜神经生长的影响

目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP38）对培养的兔三叉神经节细胞及角膜瓣术后角膜神经生长的影响。方法从2周龄新西兰白兔中分离三叉神经节细胞,并在神经元基础培养液中进行培养。培养24h后在培养液中分别加入1μmol/LPACAP38（A组）、0.1μmol/LPACAP38（B组）,C组培养液中加入PBS。1周后行抗神经纤维丝蛋白（NF200）免疫荧光染色鉴别培养的三叉神经节细胞。27只新西兰白兔右眼行角膜瓣手术,并分为3组,术后1d分别以10μmol/LPACAP38、5μmol/LPACAP38或PBS点眼,共8周,行角膜敏感度测定和NF200免疫荧光染色,评价术后不同时间角膜神经的修复情况。结果 PACAP38培养的三叉神经节细胞有较多神经细胞存活,伸出突触并交织呈网状,A组神经细胞存活最多。角膜瓣手术的3个组角膜敏感度随着术后时间的延长逐渐增加（Ftime=58.196,P=0.00）,10μmol/LPACAP38点眼组角膜敏感度恢复最快。10μmol/LPACAP38点眼组和5μmol/LPACAP38点眼组角膜敏感度值明显高于PBS点眼组,差异均有统计学意义（P=0.000,P=0.005）。角膜神经染色示10μmol/LPACAP38点眼组角膜神经密度较5μmol/LPACAP38点眼组和PBS点眼组高,神经干短端多膨大,以出芽方式发出细微的新生神经纤维芽。结论 PACAP38能促进兔三叉神经节细胞增生及诱导神经突形成,可促进角膜敏感性恢复及角膜神经修复再生。